拮抗TGF-β_1可抑制胚胎干细胞来源BL-CFC的产生和分化

胚胎干细胞来源的BL-CFC体外可分化产生造血和内皮细胞。为了研究TGF-β1对BL-CFC产生和分化的调控作用,在拟胚体培养阶段施加TGF-β1和TGF-β1中和抗体,观察不同阶段TGF-β1对BL-CFC的数目及其定向内皮和造血细胞分化能力的影响。结果表明:在拟胚体培养阶段拮抗TGF-β1的作用可显著降低BL-CFC的数量(P<0.01);与之吻合的,中和TGF-β1后拟胚体中Flk-1+细胞比例降低。此外,在拟胚体培养阶段加入TGF-β1可显著增强BL-CFC的造血和内皮细胞分化能力,而中和TGF-β1后分化能力降低。结论:TGF-β1对BL-CFC的产生和分化发挥正向调节作用。

TGF-β1诱导人胃腺癌SGC-7901细胞建立EMT模型

目的拟利用TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化(EMT),建立EMT模型。方法不同浓度TGF-β1作用SGC-7901细胞24h,观察其形态变化,并采用CCK8、迁移试验、细胞侵袭试验和蛋白印迹等技术,检测TGF-β1对SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果经10ng/ml TGF-β1诱导24h后,多数细胞变为梭型细胞边界基本消失,细胞间间隙明显增大。采用CCK-8试验检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)的TGF-β1对SGC-7901细胞作用24h后OD值,结果显示各作用浓度对SGC-7901的生长抑制率未发现有增加或减少趋势。体外划痕试验检测细胞迁移能力实验中,各组间距为94.67±3.06、87.00±3.61、68.67±7.77和91.00±3.00(单位:像素),10ng/ml剂量组有大量细胞迁移至划痕区,划痕间距明显变小(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果:0、5、10、20ng/ml组,侵袭的细胞数分别为152.00±5.29、169.00±6.00、299.33±10.50和176.00±11.27,且10ng/ml剂量组细胞数明显增多(P<0.05)。蛋白免疫印迹定量分析显示:不同浓度(0、5、10、20ng/ml)的TGF-β1作用SGC-7901细胞24h,E-cadherin蛋白灰度值测量结果:0、5、10、20ng/ml组,分别为0.95±0.02、0.91±0.04、0.62±0.05和0.75±0.32,10ng/ml剂量组灰度值明显减少(P<0.05);Vimentin蛋白灰度值测量结果:0、5、10、20ng/ml组,分别为1.18±0.03、1.33±0.02、1.57±0.05和1.19±0.07,10ng/ml剂量组灰度值明显增加(P<0.05)。结论10ng/ml TGF-β1诱导人胃腺癌SGC-7901细胞24h后,细胞明显发生EMT过程,本研究证明在人胃腺癌SGC-7901细胞系,通过10ng/ml TGF-β1的诱导24h可以成功建立EMT模型。

角膜营养不良家系患病角膜细胞角蛋白及b-FGF与TGF—bl表达的研究

目的了解深圳地区一角膜营养不良家系中患病角膜中细胞角蛋白，纤维组织相关的碱性成纤维细胞因子（b—FGF）和转化生长因子（TGF—b1）的表达改变。方法分别按照SABC免疫组织化学方法及双夹心ELISA方法检测家系中5例受累颗粒状营养不良角膜及1例格子状角膜营养不良角膜中高、低分子量细胞角蛋白的分布表达情况，以及h—FGF和TGF—bl的表达，散发4例格子状角膜营养不良角膜及4例意外死亡者的正常角膜做为对照。结果高、低分子量细胞角蛋白在本角膜营养不良家系患者的角膜中分别有100％及66．7％的阳性表达（阳性／弱阳性均计入阳性表达率），散发性格子状营养不良角膜均有弱阳性的表达，正常角膜则没有表达。b—FGF在各组角膜中的表达无明显差异。TGF的含量在家系颗粒状角膜营养不良的角膜中平均为1．225±0．867pg／ml，与正常角膜中的含量无明显差异；家系格子状角膜营养不良的角膜中为4．0pg／ml，比正常角膜明显增多（t检验t=36．373，P=O．017）；散发格子状角膜营养不良的角膜中平均为（8．375±0．667）pg／ml，比正常角膜明显增多（t检验t=9．413，P=0．020）；正常角膜中TGF的含量平均为（0．0625±0．0088）pg／ml。结论细胞角蛋白在本家系颗粒状角膜营养不良及格子状角膜营养不良均有表达，高分子量细胞角蛋白的表达更明显，其发病与角膜上皮表达细胞角蛋白的增多有关联。家系中的主要角膜营养不良类型（颗粒型）的患病角膜组织中TGF—bl及b—FGF的含量均无明显改变。格子状角膜营养不良（包括家系及散发）的角膜组织中TGF—bl的含量明显增加，其发病与板层纤维增生有一定的关联。