鸭THRSPα基因内含子多态与生长和屠体性状相关性研究

根据克隆出的鸭THRSPα基因全长序列,采用PCR-RFLP法检测THRSPα内含子多态与238只6周龄北京鸭生长、屠体性状的关系。结果发现:在THRSPα内含子第239处存在C-A碱基突变,该突变为SacI酶切位点,C碱基基因频率占95%,为优势等位基因,χ2检验结果表明,该群体处于Hardy-Weinberg平衡状态。最小二乘分析表明:THRSPα内含子SacI位点获得的2种基因型CC和CA与6周龄体重、屠宰性状的关系中,除CC型肝脏率极显著(P<0.01)低于CA型,其他性状两基因型间的差异均不显著(P>0.05)。

THRSPα基因多态性与鸡肉质、屠体及脂肪性状的关联分析

THRSP(甲状腺激素应答蛋白Spot 14)是在甲状腺素诱导下在肝脏中表达的一类小分子酸性蛋白质,主要在肝脏、腹脂和乳腺等脂肪生成组织内表达,因此THRSP基因被认为与脂肪生成相关。本研究利用杏花鸡与隐性白洛克鸡F2代全同胞个体资源群作为试验材料,检测了12个家系共439只个体的THRSPα基因的多态性,对THRSPα基因与肉质、屠体和脂肪性状的相关性通过最小二乘法进行了分析,结果表明该基因与脂肪带宽和腹脂重呈显著相关(P<0.05)。

朗德鹅THRSPα基因PCR-SSCP分析及与产肝性能的相关性

THRSPα参与脂肪合成限速酶基因的转录调控,在脂肪生成过程中发挥重要作用。该研究采用PCR-SSCP法检测朗德鹅群体中THRSPα基因的多态性,并分析基因多态性与产肝性能的关系。结果表明,在THRSPα基因第1外显子编码区216 bp处存在1个新的突变位点即C→T碱基突变,其中C碱基的基因频率为0.90,为优势等位基因。χ2检验结果显示:该群体处于Hardy-W e inberg平衡状态;THRSPα第一外显子编码区SSCP多态位点只有2种基因型AA和AB,没有BB,其中AB型朗德鹅肝重和肝脏指数(肝重/体重)均显著高于AA型(P<0.05)。

荆江麻鸭THRSPα基因内含子酶切多态性及其与屠体性状的研究

采用PCR-RFLP法检测96只荆江麻鸭THRSPα基因内含子的多态性,并对基因多态性与屠体性状进行关联分析。结果发现,本试验群体中未检测到AA基因型,仅有CC和CA2种基因型。其中C等位基因频率为0.9792,为优势等位基因。χ2检验表明,该多态位点处于Hardy-Weinberg遗传平衡状态。结果表明:荆江麻鸭THRSPα基因内含子多态位点CA基因型个体活重极显著高于CC基因型(P<0.01),C基因C型个体全净膛率、胸肌率和瘦肉率极显著高于CA基因型(P<0.01),其他性状差异不显著(P>0.05)。

甲状腺素和葡萄糖对鸡前脂肪细胞增殖和THRSPα基因表达的影响

在培养基中添加葡萄糖和甲状腺素(T3),观察鸡前脂肪细胞的生长及分化后的增殖情况及检测THRSPα基因在不同时间段的表达情况。结果表明,葡萄糖和甲状腺素(T3)的使用没有显著促进脂肪细胞数量的增长,各试验组在前3 d细胞数量保持一定幅度的增长,但低于对照组,第4天数量降幅很大,除200 nmol/L T3外其他3组在第5天稍有回升,组间差异不显著(P>0.05)。添加50 nmol/L T3和200 nmol/L T3的2个试验组THRSPα基因相对表达量在第2天有较大幅度的增加且差异极显著(P<0.01);100 nmol/L T3在第6天稍有升高,前面5 d无显著变化。总之葡萄糖和甲状腺素(T3)细胞增殖和THRSPα基因表达未产生显著的影响。

鸭甲状腺激素应答基因(THRSPα)比较基因组学研究

为从比较基因组学角度研究鸭、鸡甲状腺激素应答Spot14alpha(THRSPα)基因突变的异同,根据对鸭THRSPα基因克隆和表达的研究结果,采用多样本PCR产物测序方法筛查鸭THRSPα基因编码区和部分内含子区的核苷酸变异,并与已知的鸡THRSPα基因编码区多态进行比较分析。结果表明:鸭THRSPα基因突变频率远高于鸡,编码区平均突变频率为每1 000个碱基有23个碱基发生突变,内含子区平均每1 000个碱基有28个碱基发生突变。编码区16个突变有3个为错义突变,其余均为同义突变。并且THRSPα蛋白靠近亮氨酸拉链结构域N端的第81位天冬氨酸(Asp81),在鸭中错义替换为缬氨酸(Val),在鸡中发生插入或缺失。提示鸭在进化过程中所受选择程度低于鸡,使其THRSPα基因碱基替换频率和分布均匀度均高于鸡,二者在脂肪性状相关的Asp81位点处均发生缺失或突变。

THRSPα基因多态性及其与鸭脂肪性状的相关性研究

从分子遗传学角度出发,在鸭THRSPα已获基因全长的基础上,选择合适的突变位点,将部分突变位点在随机群体中的多态性与肉鸭随机群体各性状进行关联分析。结果表明,8bp插入缺失位点缺失型纯合子DD型个体数极少,但DD型个体的腹脂重和腹脂率显著低于II和ID型个体;SacI位点无AA基因型,该位点与皮下脂肪厚性状有显著相关性。

荆江麻鸭THRSPα基因内含子酶切多态性及其与屠体性状的关联研究

采用PCR-RFLP法检测了96只荆江麻鸭THRSPα基因内含子的多态性,并对基因多态性与屠体性状进行关联分析。结果发现,本试验群体中未检测到AA基因型,仅有CC和CA 2种基因型。其中C等位基因频率为0.979 2,为优势等位基因。χ2检验结果表明,该群体处于Hardy-Weinberg平衡状态。最小二乘分析结果显示,荆江麻鸭THRSPα基因内含子CA型个体活重极显著高于CC型(P<0.01),CC型个体全净膛率、胸肌率和瘦肉率极显著高于CA型(P<0.01),其他性状间差异不显著(P>0.05)。

牛科物种THRSP基因的分子特征及功能比较分析

【目的】探究牛科物种THRSP基因的序列特征、功能差异及系统发育关系。【方法】从NCBI和Ensembl数据库下载常见牛科物种和非牛科物种的THRSP基因及其编码产物的氨基酸序列,进一步利用比较基因组学和生物信息学方法对所得数据进行比较分析。【结果】牛科物种THRSP基因转录区的结构相似,编码序列一致性高(93.2%~96.9%),但非翻译区和内含子差异较大。牛科THRSP蛋白均为亲水性核蛋白,无跨膜区和信号肽,都包含1个Spot_14或Spot_14超家族保守结构域,其参与的生物学路径主要与脂类的生物合成有关,分子功能主要与脂肪酸合酶活性和蛋白同源二聚化活性相关。与牛科THRSP互作的蛋白质主要与脂肪酸的合成和β-氧化、蛋白质代谢和转运、跨细胞膜或细胞器的物质转运、溶酶体与吞噬体的融合等生物学过程有关。牛科THRSP蛋白的氨基酸组成、理化特性、基序组成模式、保守结构域、功能修饰位点和高级结构高度相似,但表现出属间差异。系统发育分析表明:牛科物种同属动物间THRSP蛋白的亲缘关系更近。【结论】牛科物种THRSP序列和结构一致性高、功能相似,是一种在细胞核中发挥功能作用的亲水蛋白,推测其参与牛科物种脂合成的调节。

牛科物种甲状腺激素应答(THRSP)基因在乳脂合成中的功能作用研究进展

甲状腺激素应答(Thyriod hormone responsive,THRSP)基因参与动物从头脂肪酸的合成,主要在肝脏、乳腺和脂肪组织中表达,在转录水平上受到与脂代谢相关因子的诱导并作为转录激活剂调节下游脂肪合成酶基因的表达。本文对牛科物种THRSP基因的结构和功能、转录调控机制和调节脂肪酸合成的生物学路径及该基因多态性对泌乳性状的影响等方面的研究进展进行了综述。

雪山鸡THRSPα基因5′-侧翼区SNPs与肌肉品质关联性

通过MALDI-TOF-MS技术对雪山鸡甲状腺激素应答蛋白Spot 14(THRSP)α基因5′-侧翼区候选SNPs位点进行扫描,对SNPs的存在与否进行进一步验证,并对其与肌肉品质进行关联分析。结果表明:雪山鸡THRSPα基因5′-侧翼区中存在G637A突变,得到3种基因型,G、A等位基因频率分别为0.567和0.433,适合性检验处于遗传平衡状态;不同基因型个体间在pH值、肉色和嫩度等常规肉品质指标并无显著差异;但GA型个体胸肌肌内脂肪含量显著高于GG和AA型的个体(P<0.05)。GA个体腿肌的C16∶0含量、C18∶1n9c含量、C18∶2n6c含量均显著高于GG和AA型的个体(P<0.05),GG和AA型个体之间差异不显著。初步可以认为THRSPα基因应是肌肉脂肪性状含量的候选标记。

THRSP基因C184T突变与秦川牛肉质性状相关性的研究

【目的】研究秦川牛THRSP基因第一外显子184bp处C/T错义突变与部分肉质性状的关系。【方法】选取405头相同饲养条件下无亲缘关系的18～20月龄的秦川牛,利用PCR-SSCP技术对THRSP基因进行个体基因型分析;运用SPSS统计软件中的GLM模型分析该SNP与93头秦川牛部分肉用性能指标的相关性。【结果】该位点引发THRSP基因第51个氨基酸由缬氨酸(GTG)变为丙氨酸(GCG)。多态信息含量为0.3583,属于中度多态,杂合度为0.4676,有效等位基因数为1.8783。卡方检验显示该位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.01)。相关分析结果显示,该位点基因型与嫩度和系水力2个性状显著相关。多重比较结果显示,AA基因型个体的嫩度显著高于AB型(P<0.05),BB基因型个体的系水力显著高于AB型(P<0.05)。【结论】这一位点可能是影响牛肉嫩度及系水力的主效QTN或与之紧密连锁,可做为肉牛肉质选育的候选分子标记。

猪THRSP基因5′侧翼区序列转录调控活性的鉴定

本研究旨在对猪THRSP基因5′调控区TP526序列进行转录调控活性的鉴定,以鉴别THRSP基因调控区的功能。提取猪耳组织基因组,利用PCR技术克隆THRSP基因5′调控区TP526序列,将其插入荧光素酶报告载体中(pGL3-Basic),构建猪THRSP基因5′调控区TP526序列调控的荧光素酶报告载体(pGL3-TP526/promot-er),经PCR鉴定后,转染293T细胞,利用双报告基因检测TP526序列的启动子活性。结果显示,pGL3-TP526/promoter调控的表达载体,其萤火虫与海肾荧光素酶荧光强度之比(1.816 2±0.253 3)显著高于pGL3-Basic(0.126 7±0.020 3),呈高效表达(P<0.01)。THRSP基因5′调控区TP526序列具有启动子调控活性。

鸡、鸭甲状腺激素应答基因(THRSP)的研究进展

甲状腺激素应答Spot14(Thyroid hormone responsive spot14,THRSP)是一个参与多种脂肪合成限速酶基因表达的转录调控因子,在动物肝脏、乳腺和脂肪组织中高度表达。家禽中鸡和鸭THRSP基因在cDNA水平均发现THRSPα和THRSPβ两种同工型,其中鸡THRSPα基因编码区碱基的插入/缺失影响鸡体重和腹脂性状,与鸡的生长发育和脂肪代谢有关。文章综述了鸡THRSP基因与鸭同源基因结构特性和表达差异,以及鸡、鸭THRSP基因多态性及其遗传效应。

甲状腺激素应答蛋白Thrsp在脂质合成中的调节作用

甲状腺激素应答点14蛋白(thyroid hormone responsive SPOT 14 homolog,Thrsp),也可简称为点14(Spot 14)或S14,仅表达于肝脏、脂肪和哺乳期乳腺等脂质合成活跃的组织,可被甲状腺激素和高糖饮食等刺激脂质合成的因子迅速上调。体外实验中敲低Thrsp可导致细胞的脂质合成降低;而在Thrsp敲除小鼠,乳腺的脂质合成下降、乳汁甘油三酯含量减少而肝脏的脂质合成反而增多。这是由于Thrsp的同源基因———S14R(S14 related)在除乳腺外全身组织广泛表达,但在乳腺不表达。Thrsp表达和脂质合成还影响正常乳腺上皮细胞的增殖,并与乳腺癌的恶性度和复发率高度相关。S14R在表达调节及促脂质合成两方面均与Thrsp存在重叠。S14R通过与脂肪酸合成的限速酶乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)结合,使之发生聚合,而显著提高酶活性,进而引起肝脏脂肪酸合成增多和甘油三酯堆积。Thrsp则通过与S14R形成异源二聚体,降低ACC的聚合与活性。显然这只能解释Thrsp敲除小鼠中肝脏的脂质合成为何增多,而Thrsp促进脂质合成的机制还有待于继续深入研究。总之,Thrsp与S14R是脂质合成的重要调节基因,在泌乳、乳腺癌生长与浸润、脂肪肝发生发展、胰岛素抵抗等生理和病理生理过程中起着重要作用。

THRSP在泌乳期高、低乳品质奶牛乳腺组织中的蛋白表达及定位

采用免疫印迹法和免疫荧光技术对泌乳期高、低乳品质荷斯坦奶牛乳腺组织中的甲状腺激素应答蛋白(Thyroid Hormone Responsive Spot 14 Protein,THRSP)蛋白表达及定位进行研究。结果表明,THRSP在泌乳期高乳品质荷斯坦奶牛乳腺组织中的蛋白表达量显著高于低乳品质荷斯坦奶牛;另外,THRSP在泌乳期奶牛乳腺上皮细胞细胞质中表达。结论:THRSP与泌乳期奶牛乳腺乳成份合成有关。

五个牛品种THRSP基因257C/G突变的遗传多态性研究

采用PCR-SSCP技术及测序技术,研究了秦川牛、夏南牛、南阳牛、郏县红牛和鲁西牛五个牛品种THRSP基因第一外显子257bp处C/G突变的遗传多态性及其与肉质性状的关系。结果显示,该位点引发THRSP基因第75位氨基酸发生同义突变,五个牛品种基因频率一致,多态信息含量以南阳牛最高,属于中度多态,其他牛品种属于低度多态。经χ2适合性检验,五个牛品种群体257C/G位点的突变均达到Hardy-Wein-berg平衡状态(P>0.05)。关联分析结果显示,AA,AB基因型个体的胴体长、眼肌面积差异显著。该位点可能是影响胴体长和眼肌面积的突变位点或与之紧密连锁,可做为肉牛肉质选育的候选分子标记。

五种牛THRSP基因部分第一外显子序列PCR-SSCP多态性研究

THRSP基因是调节动物脂肪生成的重要基因。试验利用PCR-SSCP和DNA测序方法对秦川牛(QC)、夏南牛(XC)、南阳牛(NC)、郏县红牛(JRC)、鲁西牛(LC)共644头牛的THRSP基因部分第一外显子序列进行遗传多样性分析。结果发现存在两个突变位点:40bpC/T和78bpA/G;四种基因型:AA,AB,BB,AC;五种牛A,B,C基因的频率分布一致。从位点间杂合度来看:QC>XC>LC>NC>JRC;从位点间多态信息含量看:QC属于高度多态(PIC>0.5),XC,LC,NC,JRC属于中度多态(0.25<PIC<0.5)。40bpC/T突变导致THRSP基因第3个氨基酸发生错义突变,由缬氨酸(GTG)→丙氨酸(GCG);78bp处的A/G突变引起THRSP基因第16个氨基酸发生错义突变,由缬氨酸(GTC)→异亮氨酸(ATC)。

THRSP蛋白在人类乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人类乳腺癌组织中THRSP蛋白的表达及其临床意义,方法收集新疆医科大学第五附属医院和新疆医科大学附属肿瘤医院经临床证实乳腺癌患者112例石蜡标本,采用SP法检测乳腺癌组织和癌旁组织中THRSP蛋白的表达,调取112例乳腺癌患者临床及病理资料,分析THRSP蛋白表达与患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)的表达及基因分型、临床分期、淋巴结转移率、组织学分级之间的关系。结果THRSP蛋白阳性表达主要定位于细胞核,细胞质少量表达。乳腺癌组织中THRSP蛋白阳性表达率为57.14%(64/112),明显高于癌旁正常组织3.57%(4/112),差异有统计学意义(P<0.01);乳腺癌组织中THRSP蛋白异常高表达与组织学分级(X^2=6.021,P<0.05)有关,与年龄、民族、原发肿瘤大小、ER、PR、Her-2状态、淋巴结转移、基因分型、临床分期无关。结论乳腺癌组织中THRSP阳性表达较正常乳腺组织高;乳腺癌组织学分级高者THRSP阳性表达率高;在乳腺癌组织中THRSP阳性表达与乳腺癌分子分型及预后无关。

Thrsp蛋白在乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中表达及鉴定

目的鉴定Thrsp甲状腺激素应答蛋白(Thrsp,S14)在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞株中的表达,并建立2株细胞的标准生长曲线,为研究甲状腺激素应答蛋白在乳腺癌细胞转移增殖中的作用及机制奠定基础。方法取对数生长期的乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞,用CCK8法检测,用Excel自带统计软件求平均值并绘制生长曲线。细胞爬片,Thrsp蛋白免疫组化SP法染色,DBA显色,显微镜下观察,采用Western Blot法检测2株细胞中Thrsp蛋白表达及相对量。结果连续培养72h MCF-7、MDA-MB-231细胞株达到对数生长期。Thrsp蛋白在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中呈弱阳性表达,在MCF-7中呈阳性表达。Thrsp蛋白电泳大小位于17ku。MBA-MD-231细胞株中Thrsp蛋白表达水平低于MCF-7细胞株,与免疫组化结果一致。结论 Luminal A乳腺癌细胞株MCF-7细胞株中Thrsp蛋白表达正常;Basal细胞株MDA-MB-231中Thrsp蛋白表达下调。