肺非终末呼吸单元型腺癌中PD-L1表达和CD8^(+)TILs的临床意义

目的:探讨肺非终末呼吸单元型(non-TRU)腺癌中PD-L1表达和CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(CD8^(+)TILs)的临床意义。方法:回顾性研究85例手术切除的临床分期为I-IV期的肺non-TRU型腺癌患者的临床病理资料,应用免疫组化方法检测PD-L1、p53和4项错配修复蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)的表达以及CD8^(+)TILs,应用扩增阻滞突变系统(ARMS)和荧光原位杂交技术(FISH)检测EGFR、KRAS突变和ALK融合基因,并结合随访资料进行生存分析。结果:85例non-TRU腺癌中PD-L1阴性34例(40.0%)、低表达36例(42.4%)、高表达15例(17.6%),PD-L1表达更常见于有吸烟史(P<0.05)、浸润性非黏液性腺癌(P<0.01)、组织学分级高(P<0.05)、脏层胸膜浸润(P<0.05)和KRAS突变(P<0.05)患者。CD8^(+)TILs低密度17例(20.0%)、中密度42例(49.4%)、高密度26例(30.6%),中-高密度CD8^(+)TILs更常见于患者年龄较低(P<0.05)、有吸烟史(P<0.01)、肿块较小(P<0.05)、浸润性非黏液性腺癌(P<0.01)、组织学分级高(P<0.01)和p53异常表达(P<0.01)。相关分析显示PD-L1表达与CD8^(+)TILs密度之间无显著性相关关系(P>0.05)。高密度CD8^(+)TILs患者的OS显著高于低-中密度患者(P<0.05),不同PD-L1表达水平的OS和DFS以及不同密度CD8^(+)TILs患者的DFS之间的差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:肺non-TRU型腺癌常表达PD-L1并具有较高密度的CD8^(+)TILs,提示患者可能从ICIs治疗中获益,高密度CD8^(+)TILs可以作为一项辅助判断肺non-TRU型腺癌预后的指标。

外周血Th1型细胞因子与TIL对乳腺癌新辅助化疗效果的预测价值

背景:新辅助化疗(NAC)是乳腺癌的重要治疗手段,治疗后达到病理完全缓解(pCR)预示着长期生存的改善。然而,NAC效果因个体差异而异,预测NAC效果对制定治疗方案具有重要意义。患者的免疫系统状态是NAC成功的关键,Th1型细胞因子和TIL与抗肿瘤免疫反应密切相关,可能影响NAC的效果。目的:本研究旨在探讨新辅助化疗前外周血Th1型细胞因子与TIL对乳腺癌新辅助化疗效果的预测价值。方法:收集乳腺癌患者化疗前的血清样本,检测外周血Th1型细胞因子水平,并对肿瘤间质组织进行TIL水平评估。通过统计分析,评估Th1型细胞因子和TIL与NAC疗效的关系。结果:根据手术后的病理结果将患者分为pCR组和非pCR组。在治疗前,外周血高水平Th1型细胞因子的患者在接受NAC后表现出更高的病理缓解率。治疗后达到pCR的患者中,TIL的增加与外周血Th1型细胞因子的升高呈正相关。结论:在新辅助化疗开始前,外周血Th1型细胞因子可作为预测NAC效果的生物标志物,Th1型细胞因子水平还可以作为高TIL的代替标志物,与TIL一起更好地预测新辅助化疗的疗效。

分析NAC治疗乳腺癌的MRI成像变化及其参数对预测浸润性乳腺癌TILs水平的效能

目的通过乳腺磁共振成像(MRI)技术评估新辅助化疗(NAC)对乳腺癌的疗效,并探讨MR多参数成像对浸润性乳腺癌肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的预测价值。方法将本院2020年2月至2021年8月收治的浸润性乳腺癌患者142例纳入本次研究中,按照不同治疗方式分为NAC组(n=68)及常规组(n=74)。比较治疗前后两组乳腺MRI成像参数及治疗后两组患者TILs水平;根据治疗前的TILs比例将所有病例分为TILs低比例组、TILs高比例组,评估MR多参数对浸润性乳腺癌TILs水平高低的诊断价值。结果研究组治疗后ADC显著升高,肿瘤中心层面最大直径明显下降(P<0.05);研究组治疗有效率显著高于常规组(P<0.05);治疗后研究组TILs水平明显比常规组高(P<0.05);TILs高比例组中Her-2过表达型、三阴型数量多于低比例组;比较MRI参数发现,乳腺癌的形状、边缘、脂肪抑制T2WI信号均匀度、内部强化方式差异明显(P<0.05),形状圆形或卵圆形、边缘光滑、脂肪抑制T2WI信号均匀、内部强化均匀可能为TILs高表达相关(P<0.05);形状、边缘、脂肪抑制T2WI信号均匀度、内部强化方式ROC曲线线下面积均较高,且具有较高的特异性及敏感度。结论采用NAC治疗乳腺癌患者,可缩小病灶,使TILs表达增加,有利于患者病情稳定或改善,且通过MR多参数成像可对乳腺癌患者TILs水平起到预测作用,更好指导患者预后,建议临床推广使用。

恶性胸/腹水肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外选择性CD8+T细胞扩增的培养体系建立及功能表型分析

目的探讨体外恶性胸/腹水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)大量培养扩增方法并初步研究其分子表型及功能特征.方法无菌操作条件下抽取恶性肿瘤患者胸/腹水,密度梯度离心法分离淋巴细胞,采用γ干扰素(IFN-γ)、抗CD3多克隆抗体OKT3和白细胞介素2(IL-2)为基础的联合方案扩增TIL,并记录其细胞形态及扩增速度.采用流式细胞术动态检测扩增淋巴细胞的分子表型T淋巴细胞亚群中淋巴细胞激活信号分子F7(SLAMF7)、CD45RO、颗粒酶B(GZMB)、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD57阳性细胞比例,CCK-8法检测其对肿瘤的杀伤能力.结果在本培养方案中,TIL细胞培养至第26天状态良好,第30天开始增殖速率下降.CD4^(-)CD8^(+)T细胞及CD8^(+)CD56^(+)T细胞比例随培养时间的延长逐渐提高,CD4^(+)CD8^(-)T细胞的比例逐渐下降,CD4^(+)CD25^(+)T细胞始终保持低水平状态.与扩增前相比,SLAMF7、CD45RO、GZMB、PD-1阳性细胞比例均有显著提高,耗竭性T细胞标志CD57表达比例也逐渐升高.TIL源性扩增性T细胞杀伤肿瘤细胞能力明显强于外周血单个核细胞(PBMC)源性,当效靶比为10∶1时杀伤能力最强,且杀伤能力在肿瘤细胞类型间存在明显差异.结论建立了从癌性胸/腹水中大量扩增TIL的培养方案,方法简便易行、效率高、杀伤肿瘤能力强,其效应细胞主要为CD8^(+)T细胞,表型处于活化状态.

炎性指标联合TILs与乳腺癌新辅助疗效关系

目的:乳腺癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤,新辅助化疗在乳腺癌中占有重要地位,本研究主要探讨炎性指标如中性粒细胞淋巴细胞比例(Neutrophil lymphocyte ratio, NLR)、血小板淋巴细胞比(Platelet lymphocyte ratio, PLR)、淋巴细胞单核细胞比(Lymphocyte monocyte ratio, LMR),肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor infiltrates lymphocytes, TILs)对新辅助化疗疗效产生预测作用。方法:回顾性分析青岛大学附属医院2017年6月~2020年6月就诊的乳腺癌患者,收集相关的病理资料,对TILs及化疗前后的NLR进行分析。结果:140例患者中,有21例达到了病理完全缓解,单因素分析显示:新辅助化疗疗效与年龄(P = 0.033)、淋巴结情况(P < 0.01)、激素受体(P < 0.001)、HER-2 (P = 0.024)、Kit-67 (P = 0.016)、分子分型(P = 0.007)、TILs (P = 0.002)、Pre-NLR (P = 0.001)、Delta-NLR (P ≤ 0.001)、Post-NLR (P ≤ 0.001)存在统计学差异,其余因素无明显相关。多因素分析显示:年龄(P = 0.044, 95%CI: 0.851~0.998)、TILs (P = 0.019, 95%CI: 0.031~0.728)与新辅助化疗疗效相关。结论:化疗前后的NLR及前后的差值新辅助疗效相关,TILs能够对疗效单独起到预测作用。

PD-L1表达、CD8^(+)TIL密度与食管鳞癌临床病理特征及预后的关系

目的 探讨新疆莎车县维吾尔族食管鳞状细胞癌(ESCC)患者程序性死亡-配体1 (PD-L1)表达和CD8阳性肿瘤浸润淋巴细胞(CD8^(+)TIL)密度与临床病理特征及预后的关系。方法 收集2016年6月至2021年6月期间新疆莎车县人民医院收治的167例ESCC患者的组织蜡块。ESCC根治标本制备组织芯片,采用χ^(2)检验分析PD-L1表达、CD8^(+)TIL密度与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析PD-L1表达、CD8^(+)TIL密度与患者总生存期(OS)的关系,并绘制生存曲线图;单因素和多因素COX比例风险模型回归分析和OS相关的危险因素;Kaplan-Meier法分析PD-L1表达和CD8^(+)TIL密度不同亚组与OS的关系。结果 PD-L1表达在不同肿瘤浸润深度组间比较差异有统计学意义(P<0.05),PD-L1高表达组易发生深部浸润;CD8^(+)TIL密度在有无淋巴结转移组间比较差异有统计学意义(P<0.05),CD8^(+)TIL低密度组易发生淋巴结转移;PD-L1表达在不同CD8^(+)TIL密度组间比较差异有统计学意义(P<0.05),PD-L1高表达组CD8^(+)TIL密度较高;Kaplan Meier单因素生存分析结果显示,PD-L1低表达或CD8^(+)TIL高密度组预后较好;单因素COX回归分析结果显示,女性、PD-L1低表达或CD8^(+)TIL高密度组患者预后较好(P<0.05);多因素COX回归分析结果显示,PD-L1表达和CD8^(+)TIL密度是预测ESCC预后的有效指标(P<0.05);Kaplan Meier单因素分析结果显示,各亚组间,PD-L1低表达/CD8^(+)TIL高密度亚组预后最好,PD-L1高表达/,CD8^(+)TIL低密度亚组预后最差。结论 PD-L1表达和CD8^(+)TIL密度可以作为判断ESCC患者预后的有效标志物,联合使用抗血管生成药物和免疫检查点抑制剂,可能为某些免疫治疗预后较差的亚组提供新的治疗手段。

基于PD-L1/TIL的小鼠黑色素瘤模型的构建

目的:基于程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)构建符合临床特征的PD-L1^(+)/TIL^(+)和PD-L1^(+)/TIL^(-)小鼠黑色素瘤模型。方法:采用流式细胞术从主要组织相容性复合体I类基因编码分子H-2Kb-的小鼠黑色素瘤细胞B16中筛选出H-2Kb^(+)的细胞,使用动物试验、免疫组化、流式细胞术等方法研究H-2Kb^(+)的细胞生长速度、成瘤快慢、细胞因子分泌、T淋巴细胞浸润和PD-L1的表达等。结果:筛选得到了8株H-2Kb^(+)的细胞,其中2F10和2G1两株细胞的H-2Kb表达持久稳定,细胞生长慢、成瘤慢,分泌MCP-1和IL-6,可在2F10肿瘤组织中检测到T淋巴细胞浸润,肿瘤细胞和肿瘤组织均可检测到PD-L1表达。结论:利用H-2Kb^(+)细胞构建出了符合临床黑色素瘤分型特征的PD-L1^(+)/TIL^(+)和PD-L1^(+)/TIL^(-)的小鼠黑色素瘤模型。

黄芪和地黄对食管癌TIL增殖及体外抗肿瘤作用的研究

目的 :探索黄芪、地黄在促进食管癌TIL增殖和特异性杀伤活性中的作用和食管癌TIL免疫治疗的可行性。方法 :采用3H TdR掺入法。应用黄芪和地黄联合多种细胞因子对 9例食管癌TIL的增殖和特异性杀伤活性进行研究。结果 :在促进TIL增殖、杀伤活性中 ,黄芪联合IL 2、IL 2 +IL 4、IL 2 +TNF α均较单用这些细胞因子有明显增强作用 (P <0 .0 5或 0 .0 1)。结论

粒─-巨细胞集落刺激因子对人胃腺癌TIL增殖及体外杀瘤活性的影响

本研究观察粒-巨细胞集落刺激因子（GM－CSF）对胃腺癌TIL增殖及体外杀瘤活性的影响。结果发现，单独GM－CSF刺激不诱导TIL增殖扩增，而在400U／ml的IL－2培养条件下，各剂量GM－CSF均可促进TIL增殖，其中，100μg／mlGM－CSF协同IL－2促增殖效应显著。体外杀瘤活性试验（MTT法）证实100ug／mlGM－CSF协同IL－2诱导TIL细胞增强了其杀瘤活性，无论是对同种异体细胞，亦或是自体肿瘤细胞。本文探讨了GM－CSF促TIL增殖及增强杀瘤活性的可能机制。

肿瘤细胞和TIL对化疗药物敏感性的测定

目的：探讨 MTT法应用于肿瘤细胞化疗敏感性检测的意义 ,及化疗与肿瘤浸润淋巴细胞 (tumor infiltrating lymphocyte,TIL)过继免疫治疗的合理应用。方法：应用 MTT法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和化疗对 TIL的毒性。结果：肿瘤细胞和 TIL细胞数都与生成的甲 ? (formazan)的光密度 (OD)值呈线性正相关。肿瘤细胞对化疗药物的敏感性存在较大个体差异。 EADM与 DDP， DDP与 MMC联合化疗存在协同作用， EADM与 5 FU联合化疗存在拮抗作用。化疗药物对 TIL的毒性作用大于对肿瘤细胞的杀伤作用。结论： MTT法应用于肿瘤细胞化疗敏感性检测以指导临床个体化治疗，具有筛选敏感性化疗药物和避免非敏感性化疗对机体抗肿瘤免疫细胞毒性的双重积极意义。 TIL过继免疫治疗与化疗不宜同时应用。

经腹膜外盆腔淋巴间隙给予IL-2对妇科肿瘤患者TIL亚群及NK细胞的影响

目的 探讨通过盆腔腹膜外淋巴间隙进行肿瘤生物治疗的可行性。方法 妇科恶性肿瘤患者 4 1例 ,随机分为 IL- 2组 (n=10 )、IL- 2 +5 - Fu组 (n=11)、5 - Fu组 (n=10 )及对照组 (n=10 ) ;通过经盆腔腹膜外淋巴间隙留置管 ,分别予以 IL- 2、IL- 2 +5 - Fu、5 - Fu治疗后 ,手术中摘取肿瘤组织 ,分离浸润淋巴细胞 ,用流式细胞仪检测 T细胞表面标记、CD2 5活化标记变化及 NK细胞数量。结果 治疗后各治疗组肿瘤浸润淋巴细胞 CD3+、CD4 +、CD8+ 、CD2 5 + 、NK细胞数量均明显高于对照组 (P值均 <0 .0 5 ) ;IL - 2 +5 - Fu组 CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD2 5 + T细胞含量及 NK细胞数量明显高于 5 - Fu组 ,IL - 2组 CD2 5 + T细胞含量及 NK细胞数量明显高于 5 - Fu组 (P<0 .0 5 )。结论 经盆腔腹膜外淋巴间隙进行生物治疗能有效激活机体 T细胞反应 ,促进 T细胞增殖、活化和浸润 ,增强患者免疫系统对肿瘤的有效防御反应。

肝癌瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的：为了提高肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的抗瘤活性。方法：使用肝癌瘤苗来激活ＴＩＬ，观察其抗瘤活性的改变。结果：经瘤苗激活的ＴＩＬ在培养扩增１０、２０、３０和４０ｄ的体外对自体肝癌细胞的杀伤率均有明显提高，其中以培养扩增３０ｄ时为最高。

TGF-β_1和TIL在喉癌局部免疫反应中作用的研究

目的 :检测喉癌组织TGF β1的表达 ,分析TGF β1与喉癌临床指标的关系 ,明确TGF β1表达对TIL细胞浸润和局部免疫功能的影响。方法 :38例原发性喉癌标本 ,应用免疫组化SP法 ,检测喉癌组织CD3 、CD4 、CD8、CD57、CD68和CD2 5的浸润及TGF β1的表达 ;同时以 10例声带息肉做对照组。结果 :与对照组相比 ,喉癌组织TGF β1蛋白表达减少 ,且TGF β1表达与喉癌病人性别、年龄、临床分期及不同发生部位无关 ,随着恶性度的增高 ,TGF β1表达减少 ,淋巴结转移组TGF β1阳性率多于未转移组 ,TGF β1表达与CD4 细胞浸润无关 ,而与CD8浸润有显著正相关 ,TGF β1表达能诱发CD4/CD8比值倒置。结论 :喉癌组织TGF β1蛋白表达减少 ,TGF β1对喉癌细胞的生长可能起抑制作用 ,有利于肿瘤细胞的转移 ,通过影响CD8细胞的浸润 ,改变CD4/CD8比值 ,进而抑制肿瘤局部免疫功能。

三阴性乳腺癌组织中PD-L1和CD8^(+)TIL的水平及其临床意义

目的:探讨程序性死亡蛋白-配体1(programmed death ligand-1,PD-L1)和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)组织中的水平及其临床意义。方法:收集2015年1月至2019年1月福建医科大学附属第二医院手术切除的61例TNBC患者的癌及癌旁组织石蜡标本,用免疫组化法检测癌组织中PD-L1表达和CD8^(+)TIL的水平,用卡方检测方法分析TNBC组织中PD-L1和CD8^(+)TIL水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果:PD-L1和CD8^(+)TIL在TNBC组织中的阳性率分别为63.9%(39/61)和32.8%(20/61)。PD-L1表达与TNBC患者的肿瘤大小、淋巴结转移、病理分期、复发与否有明显关联(均P<0.05),与患者的年龄、肿瘤分化程度、脉管侵犯以及Ki67表达水平无明显关联(均P>0.05);CD8^(+)TIL水平与TNBC患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、病理分期、复发与否有明显关联(均P<0.05),与患者的年龄、脉管侵犯以及Ki67表达水平无明显关联(均P>0.05)。PD-L1和CD8^(+)TIL水平与患者的无进展生存期(PFS)及总生存期(OS)具有显著相关性(均P<0.05),PD-L1^(+)或者缺乏CD8^(+)TIL与患者更差的PFS及OS相关(均P<0.05)。结论:TNBC组织中存在较高水平的PD-L1和CD8^(+)TIL,PD-L1阳性表达或缺乏CD8^(+)TIL与肿瘤侵袭性增加相关,也与患者更差的PFS及OS相关。

半乳糖基抗CD_3单抗-TIL体外趋肝性研究

为增强肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的趋肝性，制备了半乳糖基抗ＣＤ３单克隆抗体－ＴＩＬ（Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ），将其与肝细胞共同孵育，在倒置显微镜下观察两者通过无唾液酸糖蛋白受体介导的作用情况。测定了半乳糖基抗ＣＤ３单抗（Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ）的糖密度以及Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ与ＴＩＬ的结合率。结果发现，Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ与肝细胞有明显粘附现象。Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ的糖密度为６２．１８，Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ与ＴＩＬ的结合率为９７．９％。结果表明，Ｇａｌ－ａｎｔｉＣＤ３ＭｃＡｂ－ＴＩＬ在体外有良好的趋肝性，６２．１８的糖密度和９７．９％的结合率保证了ＴＩＬ的有效利用。

肝癌TIL细胞转导IL-2基因的生物学变化研究

目的：为探讨ＩＬ２基因导入肝癌浸润淋巴细胞及对其生物学活性的影响。方法：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），同时对经转导ＩＬ２基因的肝癌浸润淋巴细胞的杀伤活性，增殖能力及表型等进行了观察。结果：转导ＩＬ２基因后的肝癌浸润淋巴细胞能表达一定量的ＩＬ２，明显高于未转导细胞，但其杀伤肿瘤细胞活性，增殖能力及表型等没有显著变化。结论：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞获得成功，亦有ＩＬ２基因产物表达。

TIL治疗人体进展期肿瘤后的免疫学监测

对8例晚期恶性肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分离、培养至l0°细胞以上．再重输给病人，同时应用小剂量IL-2,在治疗前一周及治疗后一个月采集病人外周静脉血、分离单个核细胞作为效应细胞，选用一组不同类型人肿瘤细胞株为靶细胞．以MTT比色法测定效应细胞对靶细胞的杀伤活性，同时分析效应细胞表型变化．结果显示．治疗后对不同靶细胞的杀伤活性均有不同程度提高。最有趣的是对与病人有相同组织学类型的瘤细胞的杀伤活性显著提高(43升高到1249溶解单位p<0．06)，用T4、T8单抗双染流式细胞仪分析表明T4、T8细胞表面荧光强度明显增强(T4：l9→3．98．T8：445→7．2 p<0．06)。提示TIL能够明显上调病人的免疫状况．其作用途径除直接的细胞毒效应外．免疫调节作用可能是其主要效应途径。

胃癌TIL的细胞因子分泌及杀伤胃癌细胞的形态学观察

分析了经ＩＬ－２激活的胃癌ＴＩＬ分泌干扰素（ＩＦＮ－γ）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的活性较新鲜分离的ＴＩＬ明显升高。电镜观察ＴＩＬ伸出伪足包绕自体或异体胃癌细胞，使靶细胞核染色质密度增高，胞膜及线粒体膜部分溶解，内质网扩张，显示ＴＩＬ对胃癌细胞有杀伤作用。结果表明胃癌ＴＩＬ的抗肿瘤作用，可能与ＴＩＬ产生细胞因子，促使胃癌细胞凋亡有关。

恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL在体外抗肿瘤活性的研究

目的 寻求提高肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的抗肿瘤活性。方法 通过应用恶性黑色素瘤冷冻瘤苗来激活TIL ,观察其抗肿瘤活性的改变。结果 经冷冻瘤苗激活的TIL在培养扩增 10、2 0、30和 4 0d的体外对自体恶性黑色素瘤细胞的杀伤率均有明显提高 ,其中以培养扩增 30d时为最高。结论 经恶性黑色素瘤冷冻瘤苗激活的TIL具有更高的体外杀伤自体恶性黑色素瘤细胞的能力。