地龙2号对大鼠肝纤维化TGF-β1,MMP-13及TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究蚯蚓提取物地龙2号对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1),基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA和蛋白表达的影响.方法:采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型.古Wistar大鼠52只随机分成6组:正常组、阴性对照组、模型组、阳性对照组、地龙2号大剂量组和小剂量组;8wk末,用免疫组织化学染色法及RT-PCR检测肝组织中TGF-β1,MMP-13,TIMP-1mRNA和蛋白的表达.结果:地龙2号大、小剂量组肝组织内TGF-β1及TIMP-1mRNA(TGF-β1:0.68±0.16vs0.90±0.29.0.66±0.14vs0.90±0.29,后者P<0.05;TIMP-1:1.01±0.22vs2,48±1.18,1.21±0.38vs2.48±1.18,P<0.01)及蛋白表达均显著低于模型组(TGF-β1:3.14±2.67vs8.22±2.99.3.60±1.90vs8.22±2.99,P<0.01;TIMP-1:3.57±2.23vs7.56±3.40,3.30±2.67vs7.56±3.40,P<0.01),而MMP-13mRNA(1.69±0.75vs0.62±0.21,1.82±0.71vs0.62±0.21,P<0.01)及蛋白表达则明显高于模型组(7.71±1.25vs4.67±2.45,P<0.01,8.50±2.88vs4.67±2.45.P<0.01).结论:地龙2号可下调TGF-β1,TIMP-1mRNA及蛋白的表达,并上调MMP-13mRNA及蛋白的表达,从而抑制或减轻肝纤维化的形成.

益气活血方对非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞ColⅡ、Aggrecan及TIMP-1 mRNA的影响

目的探讨益气活血方对人体非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)及金属基质蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的表达的影响。方法选择非破裂型腰椎间盘突出症(LDH)的住院患者经手术摘除的腰椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变髓核细胞分为3组,实验组分别予体积比为5%、10%的益气活血方血清DMEM培养液;对照组加入生理盐水血清DMEM培养液。通过Realtime PCR检测ColⅡ、Aggrecan、TIMP-1mRNA的表达。结果与生理盐水组比较,益气活血方血清可上调非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达(P<0.05),未检测出TIMP-1mRNA的变化。结论益气活血方可能通过影响非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan含量,进而发挥防治非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞的退变作用。

脑膜瘤MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达及其意义

目的 :研究基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9(matrixmetallo proteinase ,MMP 2、MMP 9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase ,TIMP 1)mRNA在脑膜瘤组织中的表达及其与肿瘤浸润性的关系。方法 :用原位杂交法检测 35例脑膜瘤组织中MMP 2、MMP 9、TIMP 1mRNA的表达。比较肿瘤浸润组与非浸润组的差异。结果 :脑浸润组MMP 2、MMP 9表达阳性率较无脑浸润组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;MMP 2、MMP 9的表达与硬膜浸润、颅骨浸润无关 (P >0 .0 5 ) ;TIMP 1在各组肿瘤中均高表达 ,但与肿瘤浸润性无关 (P >0 .0 5 )。结论 :MMP 2、MMP 9和TIMP

肝纤维化大鼠TGF-β_1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的 :探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺 (dimethylnitrosamine ,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)和转化生长因子β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)的影响 ,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制。方法 :雄性Wistar大鼠 4 0只 ,随机分为正常对照组、模型组和治疗组 ,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化。治疗组在造模 4周后给予补肾柔肝方灌胃 ,剂量 10 g·kg 1·d 1,共治疗 4周。第 8周末处死全部大鼠 ,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察 ,并采用RT PCR半定量方法 ,检测大鼠肝组织TIMP 1及TGF β1mRNA的表达水平。结果 :肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化 ,模型组肝组织TIMP 1和TGF β1mRNA表达明显增强 ,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱 ,而正常对照组表达较少。结论 :TIMP 1与TGF β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关 ,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP 1及TGF β1具有明显的抑制作用 。

桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中MMP-12、Smad-2mRNA、Smad-3、TIMP-1 mRNA表达的实验研究

目的:研究桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中基质金属蛋白酶-12(MMP-12)、Smad-2、Smad-3及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA含量的影响。方法:将60只小鼠分为6组,每组10只,空白对照组、模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药低、中、高剂量组,对模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药低、中、高剂量组制备光老化模型,空白对照组正常饲养。空白对照组和模型对照组给生理盐水,高、中、低剂量组给相应剂量药液,阳性对照组(VE组)给予维生素E滴剂,于造模前30 min灌胃。造模完成后,采用RT-PCR法检测皮肤组织中MMP-12、Smad-2、Smad-3、TIMP-1 mRNA的含量。结果:空白对照组皮肤组织中MMP-12mRNA的表达处于低水平;与空白对照组比较,模型对照组的MMP-12 mRNA表达水平显著上调,Smad-2 mRNA、Smad-3 mRNA和TIMP-1 mRNA表达水平显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,中药高、中、低剂量组MMP-12 mRNA表达水平均出现不同程度的下调(P<0.01),Smad-2 mRNA表达水平显著上调(P<0.01),中药中高剂量组Smad-3 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),而中药低剂量组差异不具有统计学意义,中药各剂量组TIMP-1 mRNA表达水平显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:桃红四物汤在皮肤光老化过程中具有保护作用。

洋参御唐方对高糖诱导下人肾小球系膜细胞增殖及TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达影响

目的:通过研究洋参御唐方对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HMC)表达的影响,探讨其对糖尿病肾病(DN)肾脏保护的作用机制。方法:应用血清药理学方法制备洋参御唐方及贝那普利药物血清,再进行药物血清干预的研究。将体外培养的HMC分为对照组、洋参御唐方高剂量组、洋参御唐方中剂量组、洋参御糖方低剂量组、高糖组、贝那普利组共6组。于培养的24 h、48 h及72 h用MTT法检测各组细胞的增殖情况;并于相应干预因素作用48 h及72 h后,运用Real-time PCR技术法检测其相关mRNA即TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA的相关表达。结果:高糖刺激能诱导TIMP-1 mRNA表达的上调、MMP-9 mRNA表达的下调;与高糖组相比,洋参御唐方高、中剂量组及贝那普利组TIMP-1 mRNA的表达下调、MMP-9 mRNA的表达上调,且以洋参御唐方高剂量组逆转TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达失衡更为显著。结论:洋参御唐方可抑制高糖培养下HMC的增殖,且抑制效果优于贝那普利,其作用与降低TIMP-1蛋白的表达,上调MMP-9蛋白表达有关。洋参御唐方可通过逆转TIMP-1、MMP-9蛋白的表达,从而抑制高糖环境HMC的增殖可能是其降低细胞外基质堆积减轻肾间质纤维化的机制之一。

地塞米松对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的:研究地塞米松对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1mRNA表达的影响,探讨激素性青光眼的发病机制。方法:采用原代培养的人眼小梁细胞,用10-7mol/L的地塞米松培养24h,通过RT-PCR方法检测小梁细胞MMP-3及TIMP-1mRNA的表达。结果:地塞米松处理后MMP-3mRNA的表达明显减少,与正常对照组相比相差显著(0.74±0.10vs0.46±0.11,P<0.05),TIMP-1mRNA的表达与正常对照组相比无明显改变(2.01±0.13vs1.95±0.11,P>0.05)。结论:地塞米松抑制小梁细胞MMP-3mRNA的表达,提示激素性青光眼的发病与MMP-3的降低有关。

凋膜止崩方对大鼠子宫内膜增生症子宫内膜组织中MMP-1及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的:探究凋膜止崩方治疗大鼠子宫内膜增生症的可能机制,为临床治疗无排卵型功血(ADUB)的新方法——中药靶向干预子宫内膜增生症提供理论依据。方法:采用RT-PCR检测法测定凋膜止崩方宫腔靶向干预对ADUB大鼠子宫内膜组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)基因表达水平的变化。结果:模型对照组与空白组比较,MMP-1mRNA表达明显升高,TIMP-1mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。实验大、小剂量组与模型对照组比较,MMP-1mRNA表达降低,TIMP-1mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),而大小剂量组间比较无统计学意义。结论:凋膜止崩方治疗子宫内膜增生症的机制可能与下调MMP-1mRNA表达有关。

转化生长因子-β_1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)不同浓度和作用时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基因(MMP-9 mRNA)及基质金属蛋白酶抑制剂-1基因(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法先分别用TGF-β10、100、200 ng/ml作用于绒癌JEG-3细胞,48 h收获细胞;再以TGF-β1100 ng/ml分别与JEG-3细胞作用0、12、24、48、72h;最后用RT-PCR技术检测TGF-β1不同浓度和作用时间收获JEG-3细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达。结果随TGF-β1浓度升高和作用时间延长,各收获细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达均明显升高,且MMP-9 mRNA与TIMP-1 mRNA比值均>1(P<0.01或<0.05)。结论在一定浓度和作用时间内,外源性TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达。

薯蓣皂苷元对U-2OS细胞MMP-9／TIMP-1 mRNA的影响

为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA所发生的变化,结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显的抑制作用,IC50(24h)为45 μmol／L:薯蓣皂苷元抑制U-2OS细胞MMP-9基因转录,而TIMP-1基因转录不受影响。说明薯蓣皂苷元明显抑制U-2OS细胞生长,抑制其MMP-9基因转录,对骨肉瘤侵袭和转移有一定抑制作用。

心痛方对急性心肌梗死大鼠MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的通过观察心痛方对大鼠急性心肌梗死(AMI)后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达及对心肌形态学的影响,探讨心痛方治疗AMI的疗效机制。方法 80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心痛方组、双抗组(阿司匹林+氯吡格雷),冠脉结扎法制备AMI模型,灌胃给药7 d后处死大鼠,运用RT-PCR法测定心肌组织MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA表达,心肌细胞HE染色观察形态学改变。结果心痛方能使AMI大鼠心肌内MMP-9 mRNA表达减少(P<0.01);TIMP-1mRNA表达升高(P<0.01);MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值降低(P<0.01);心肌损伤程度及心梗面积与MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值呈正直线相关。结论心痛方对AMI缺血心肌具有保护作用,其作用机制可能与增加TIMP-1 mRNA表达,降低MMP-9 mRNA表达,从而调节MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA的平衡有关。

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血SD大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响随机平行对照研究

[目的]观测蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,45只SD大鼠常规饲料喂养3d,称重后随机数字表法分为5组,假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀低、中、高剂量组(简称"ZL低、中、高剂量组"),9只/组。按指标检测时间分为12h、48h、72h三个亚组,3只/组。自体尾部血注入法复制脑出血大鼠模型。灌胃干预:蛭龙活血通瘀胶囊按人体用量(3.6g/d)5倍、10倍、20倍定为低、中、高剂量。RT-PCR法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达。[结果]AQP-4 mRNA:假手术组有微量表达,12h、48h及72h表达无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组呈进行性升高,72h最为显著;ZL各剂量组表达均低于模型组(P<0.01);各时间点低、中剂量组均高于ZL高剂量组(P<0.01)。MP-9 mRNA:假手术组有少量表达,术后12h、48h及72h表达无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组术后48h上升明显并达到高峰,72h略有下降,ZL各剂量组均低于模型组(P<0.01);ZL低、中剂量组在各时点均明显高于高剂量组(P<0.01)。TIMP-1 mRNA:假手术组仅有微量表达,术后12h、48h及72h无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组48h上升明显并达到高峰,72h略有下降;ZL各剂量组各时点均高于模型组(P<0.01);ZL低、中剂量组各时点均明显高于高剂量组(P<0.01)。[结论]蛭龙活血通瘀胶囊可明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9 mRNA,升高TIMP-1 mRNA,呈量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。

HSV-1即刻早期基因的5′UTR对报告基因mRNA翻译的影响

mRNA疫苗的5′非翻译区(5’untranslated regions,5′UTR)对其表达起着重要作用,报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)用于检测5′UTR调控mRNA表达已经是一个较为成熟的实验方法.为研究单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)即刻早期基因的5′UTR作为报告基因EGFP mRNA的5′UTR对其翻译的影响,本研究将4个即刻早期基因的5’UTR以及表达能力较强的人β珠蛋白基因(humanβGlobin,hBg)5′UTR插入报告基因EGFP 5’端,通过观察绿色荧光强度研究不同即刻早期基因5′UTR对mRNA翻译的影响.结果表明:经mRNA转染试剂和纳米脂质体颗粒分别递送进293T细胞和小鼠体内;RL2的5′UTR作为报告基因EGFP 5′UTR的表达水平与hBg 5′UTR相近,RS1、US1、US12表达水平明显弱于hBg 5′UTR.因此,RL2基因的5′UTR有潜力作为mRNA疫苗的5′UTR.

电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中MMP-3和TIMP-3及Col3α1表达的影响

目的:探讨电针对负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中基质金属蛋白酶(MMP)-3、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-3和III型胶原α1(Col3α1)表达的影响。方法:将80只豚鼠随机分为正常对照组、负透镜诱导型近视组、电针干预组和假穴组,每组20只。正常对照组不做任何干预,负透镜诱导型近视组、电针干预组和假穴组,右眼均配戴-6.0 D透镜,左眼不戴镜。戴镜同时电针干预组在合谷穴与太阳穴给予电针刺激,假穴组豚鼠在假穴位进行干预。造模前,造模2、4 wk检影验光检测屈光度,A超检测眼轴长度,HE染色观察视网膜组织结构变化,定量聚合酶链反应(Q-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测视网膜中MMP-3、TIMP-3、Col3α1 mRNA和蛋白表达的情况。结果:造模2、4 wk,负透镜诱导型近视组与正常对照组相比眼轴长度均明显增加(均P<0.05),屈光度均明显降低(均P<0.05);与负透镜诱导型近视组相比,电针干预组干预后眼轴长度均减少(均P<0.05),屈光度均增加(均P<0.05)。HE染色显示,正常对照组豚鼠视网膜组织各层分界明显,排列规则;负透镜诱导型近视组视网膜厚度、内外核层厚度及细胞数量减少,排列不规则;电针干预组视网膜整体结构较为完善,排列较规则,组织各层形态结构未出现明显异常。Q-PCR和WB检测结果显示,负透镜诱导型近视组视网膜中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白表达均比正常对照组明显升高(均P<0.05);而电针干预组干预后视网膜中MMP-3、TIMP-3和Col3α1mRNA及蛋白表达均较负透镜诱导型近视组明显降低(均P<0.05)。结论:电针能够延缓负透镜诱导型近视豚鼠眼轴增长,下调负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中的MMP-3、TIMP-3及Col3α1 mRNA及蛋白表达。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

椎管内麻醉后CD老年患者S100β、H-FABP、NLRP3mRNA、Caspase-1 mRNA表达意义

目的分析老年髋关节置换术(THA)患者椎管内麻醉后认知功能障碍(CD)发生的危险因素及中枢神经特异蛋白(S100-β)、核苷酸结合寡聚化域受体蛋白3信使核糖核酸(NLRP3 mRNA)、中心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、天冬氨酸蛋白水解酶1信使核糖核酸(Caspase-1 mRNA)对其预测价值。方法将椎管内麻醉后发生CD的40例老年THA术患者纳入A组,另选取未发生CD的68例老年THA术患者纳入B组。比较两组临床资料、S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA,危险因素采用多因素Logistic回归分析法进行分析,S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA对老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果A组年龄大于B组,差异有统计学意义(t=13.674,P<0.05);有糖尿病、术中低血压的患者占比均高于B组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.643、17.767,P<0.05)。A组血清S100-β、NLRP3 mRNA、H-FABP、Caspase-1mRNA表达均高于B组,差异有统计学意义(t=14.571、21.691、80.159、23.572,P<0.05)。老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素包括年龄大、糖尿病、术中低血压、血清S100-β、H-FABP、水平、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA高,差异有统计学意义(P<0.05)。S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA联合检查预测老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的曲线下面积(AUC)为0.915高于单一检测(P<0.05)。结论年龄大、糖尿病、术中低血压均为老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素,且S100-β、H-FABP、NLRP3 m RNA、Caspase-1 mRNA联合检测对CD的预测价值较高。

肺癌化疗患者并发细菌性肺部感染的病原菌特点和血清MMP-9、TIMP-1变化情况分析

目的:分析肺癌化疗患者并发细菌性肺部感染的病原菌特点,并分析血清金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)变化情况。方法:选取2020年6月—2023年6月无锡市第二人民医院接收的436例经病理及活检确诊的肺癌患者。所有患者均以铂类药物为主进行化疗,根据患者有无化疗后肺部细菌感染情况分为合并肺部感染组123例,未合并肺部感染组313例。采分析比较两组肺癌化疗患者血清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、可溶性血红蛋白清道夫受体(sCD163)水平,以及病原菌的分布情况。结果:肺癌化疗合并肺部感染组123例患者中,共分离出92株,其中61株革兰阴性菌、31株革兰阳性菌。在61株革兰阴性菌中,排在首位的是铜绿假单胞菌34.43%(21/61),其次是大肠埃希菌26.23%(16/61)。在31株革兰阳性菌中,排在首位的是金黄色葡萄球菌45.16%(14/31),其次是肺炎链球菌41.93%(13/31)。化疗后24 h、48 h,合并肺部感染组患MMP9、TIMP-1、sCD163水平均高于未合并肺部感染组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:临床上统计肺癌化疗病患极易合并肺部感染,且为细菌感染,其中革兰阴性菌属于主要致病菌。合并肺部感染者的血清指标MMP9、TIMP-1等水平相对偏高于未合并肺部感染者,对于观察病患的化疗病情有重要临床意义。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

一种新型1型单纯疱疹病毒mRNA疫苗的制备

制备用于防治1型单纯疱疹病毒感染的新型mRNA疫苗,并检测其免疫效果。利用同源重组技术构建HSV1糖蛋白gD胞外域(HSV1-gD^(Ectodomain))重组质粒,经PCR反应扩增HSV1-gD^(Ectodomain)基因模板,体外转录反应得到HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA,利用LNP包封HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA得到mRNA-LNP疫苗复合物,小鼠大腿肌肉接种mRNA-LNP疫苗复合物。ELISA法检测小鼠血清HSV1-gD抗体效价;TCID50法检测HSV1-gD血清中和效价。结果显示:经HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA疫苗接种后,小鼠血清抗体滴度达到1∶12800,中和实验表明抗体可保护Vero细胞不受HSV1病毒感染。成功制备一种新型HSV1 mRNA疫苗,用其接种小鼠可诱导产生特异性免疫应答,并具有良好的保护作用。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。