支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

四君子汤激活TLR-2/MyD88信号通路促进小肠黏膜上皮细胞损伤修复

目的:探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用及机制。方法:采用血清药理学方法制备四君子汤含药血清;tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤含药血清对ICE-6细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TLR-2和My D88 mRNA表达;Western blot法检测TLR-2与My D88蛋白表达。结果:中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P<0.01);细胞损伤后12 h,中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P<0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P<0.05,P<0.01);中(10%)、高(20%)浓度四君子汤含药血清可上调TLR-2及My D88 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:四君子汤可加速胃肠黏膜损伤修复过程,其机制可能与激活TLR-2/My D88信号通路,促进黏膜上皮细胞迁移和增殖有关。

结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。

脑心通胶囊对不稳定斑块兔TLR-2和TLR-4炎性信号转导因子的影响

目的探讨脑心通胶囊稳定易损斑块的机制。方法45只兔给予球囊损伤腹主动脉及高脂饲料喂养,12周末造模兔随机分为自然消退组、脑心通组和辛伐他汀组,每组15只。24周末在腹主动脉斑块处转染携带人野生型p53基因,2周后给予中国斑点蝰蛇毒(CRVV)和组胺触发斑块破裂。于26周末通过免疫组化、WesternBlotting及实时定量RT-PCR分析,检测用药后经p53基因转染处Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)的表达。结果转染后动脉粥样硬化斑块处有大量TLR-2、TLR-4和NF-κB表达,尤其集中于内皮细胞和巨噬细胞及炎性细胞浸润处。三者在脑心通组和辛伐他汀组的表达较自然消退组显著降低。结论TLR-2、TLR-4的表达量可预测动脉粥样硬化(AS)斑块的进展,脑心通胶囊可通过降低TLR-2、TLR-4的过度表达而稳定斑块。

酿酒酵母β-葡聚糖通过膜受体Dectin-1和TLR-2诱导绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1的机制研究

为了探索酿酒酵母β-葡聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达过程中膜受体Dectin-1和TLR-2可能存在的作用。本研究首先利用免疫组化、RT-PCR、免疫荧光和Western blot等方法检测Dectin-1是否在ORECs内表达,并且采用qPCR和Western blot方法对β-葡聚糖刺激ORECs后细胞膜受体Dectin-1和TLR-2的表达变化进行检测。而后用不同浓度的Dectin-1阻断剂昆布多糖或TLR-2特异性封闭抗体分别预处理ORECs后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,以确定β-葡聚糖诱导SBD-1表达过程中Dectin-1和TLR-2的参与情况。结果显示:1)绵羊瘤胃组织及ORECs内存在Dectin-1表达,且β-葡聚糖刺激ORECs后Dectin-1和TLR-2的表达水平显著增加(P<0.05);2)不同浓度的昆布多糖和TLR-2封闭抗体均可以极显著降低β-葡聚糖诱导SBD-1的表达(P<0.01),且随着阻断剂和封闭抗体浓度的增加,其抑制SBD-1表达的作用越明显。结果表明,Dectin-1在绵羊瘤胃组织及ORECs内均表达,并且酿酒酵母β-葡聚糖在ORECs中诱导SBD-1的表达是由Dectin-1和TLR-2介导产生的。

TLR-2和TLR-5在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨Toll样受体-2(TLR-2)和Toll样受体-5(TLR-5)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测60例DLBCL组织标本中TLR-2和TLR-5的表达,以21例反应性淋巴结增生组织为对照组,并分析TLR-2和TLR-5表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果 TLR-2在DLBCL组织中的阳性表达率为78.3%,在对照组中为28.5%,差异有统计学意义(P<0.05);TLR-2表达与年龄、性别和ECOG评分无关,与临床分期、乳酸脱氢酶水平、B症状、IPI、免疫亚型以及结外受累有关。TLR-5在DLBCL中的阳性表达率为26.6%,在对照组中为23.8%(P>0.05);TLR-5表达与各临床病理特征无关。结论 TLR-5与DLBCL临床特征无关;TLR-2可能参与了DLBCL的发生和发展,有望作为判断其预后的生物学指标。

人TLR-2胞外肽段的分段表达及其活性鉴定

为深入研究TLR-2胞外肽段不同区域在配基识别过程中的功能,对TLR-2a(7M-225E)、TLR-2b(185L-392L)、TLR-2c(436E-595C)三个小片段进行克隆及原核表达,其中TLR-2a和TLR-2c得到成功克隆和表达,活性鉴定结果显示TLR-2a与商品抗TLR-2(179L-204I)多抗和抗His单抗反应良好,TLR-2c可以与抗His单抗反应,在配基结合实验中TLR-2a和TLR-2c都可与PGN和LTA结合,提示TLR-2对配基的识别为构像识别。

TLR2、IL-10 mRNA的表达及树突状细胞分布在外阴硬化性苔藓中的临床意义

目的:探讨与免疫相关的TLR2、IL-10 mRNA及树突状细胞与外阴硬化性苔藓(VLS)发生和发展的关系。方法:选取VLS石蜡标本50例(早期和进展期各25例),外阴正常皮肤15例。采用免疫组化S-P法检测CD1α在组织中的分布,RT-PCR法检测TLR2和IL-10 mRNA在组织中的表达。结果:CD1α阳性细胞在VLS进展期中明显高于正常外阴皮肤(P<0.05)。TLR2、IL-10的mRNA表达在VLS进展期中明显高于正常外阴皮肤(P<0.05);TLR2、IL-10 mRNA和CD1α表达在早期VLS中略增加,与正常外阴皮肤相比无统计学差异(P>0.05)。结论:VLS的进展期TLR2、IL-10 mRNA及树突状细胞增多,预示局部组织内免疫抑制作用增强。

2型糖尿病患者血浆TLR-2水平变化及其临床意义

目的探讨血浆TLR-2水平在2型糖尿病肾病患者的变化。方法将142例研究对象分为单纯糖尿病组(DM组)36例、糖尿病肾病组(DN组)106例,DN组根据尿白蛋白分为:正常白蛋白尿组(DN1组)35例、微量白蛋白尿组(DN2组)38例、大量白蛋白尿组(DN3组)33例。检测血清肌酐与血糖等生化指标及TLR-2水平,测定24 h尿白蛋白,比较各组间的差异。结果DN组的TLR-2水平均高于DM组(P<0.05);DN组的DN3、DN2、DN13组间(TLR-2)水平显著不同且随尿白蛋白增加而升高(P<0.05);TLR-2水平与糖尿病病程、BMI、UAER、TG呈正相关性,与HDL呈负相关性。结论2型糖尿病肾病发生发展与TLR-2受体激活密切相关。

清燥救肺汤及其分解剂对肺炎支原体感染小鼠TLR-2/NF-κB信号通路的影响

目的观察清燥救肺汤及其分解剂对肺炎支原体(MP)感染小鼠Toll样受体2(TLR-2)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗MP的作用机制。方法选择SPF级BALB/c小鼠144只,随机分成正常组、模型组、全方组、分解剂Ⅰ组、分解剂Ⅱ组及阿奇霉素组,每组24只。除正常组其他各组制备MP感染模型,造模成功后予药物灌胃治疗,并于感染后第3、7、10、14天进行取材。采用苏木精-伊红染色观察肺脏病理组织学改变、qPCR方法检测肺组织中TLR-2 mRNA变化、ELISA法检测血清中MyD88、TNF-α的含量及Western blot法检测肺组织NF-κB的表达。结果 MP感染后小鼠肺组织出现间质性炎症改变,7d时炎症最明显,14d时炎症逐渐减轻;治疗后各组肺部炎症均有改善,尤以第10、14天全方组、阿奇霉素组明显。MP感染后小鼠肺组织中TLR-2、NF-κB表达水平升高,血清中MyD88、TNF-α含量亦升高(P<0.05),各项指标出现峰值的时间不一致,其中NF-κB出现最早(第3天),TLR-2、TNF-α于第7天达峰值,而MyD88则相对较晚,于第10天达峰值。第7天,全方组即起效(P<0.05),肺组织中TLR-2、NF-κB表达水平下降,血清中MyD88、TNF-α含量亦降低;分解剂Ⅰ组在第10、14天亦能发挥类似全方组的作用,但较全方组偏弱(P>0.05);分解剂Ⅱ组在第14天TLR-2mRNA表达略升高。结论清燥救肺汤抗MP感染的机制与减少促炎因子的释放,调控TLR-2/NF-κB信号通路传导有关,其中分解剂Ⅰ起主要作用。

脊柱结核患者TLR-2表达与血清中炎性因子及应激因子的相关性研究

目的研究脊柱结核患者Toll样受体-2(Toll like receptor 2,TLR-2)表达与血清中炎性因子及应激因子的相关性。方法收集2015年8月至2018年10月住院手术治疗的椎间盘突出症患者40例作为对照组,脊柱结核患者40例作为观察组。入院后采集两组患者静脉血,采用免疫组化检测TLR-2表达,采用Western blot检测TLR-2蛋白表达,采用Elisa法检测血清白细胞介素1β(Interleukin,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin,IL-6)和C反应蛋白(C reactive protein,CRP)含量,采用Person检验分析TLR-2与IL-1β、IL-6和CRP相关性。结果观察组TLR-2表达量(0.81±0.06)显著高于对照组TLR-2表达量(0.43±0.05)(t=13.447,P<0.05);观察组TLR-2蛋白相对表达量(0.63±0.05)显著高于对照组TLR-2蛋白相对表达量(0.37±0.07)(t=46.848,P<0.05);观察组血清IL-1β(77.23±11.22)pg/ml、IL-6(61.39±13.73)pg/ml和CRP(49.29±8.98)pg/ml显著高于对照组IL-1β(48.33±12.32)pg/ml、IL-6(32.63±9.32)pg/ml和CRP(29.89±14.37)pg/ml(P<0.05);TLR-2蛋白与血清IL-1β(r=0.762,P<0.05)、IL-6(r=0.689,P<0.05)和CRP(r=0.721,P<0.05)含量之间呈正相关。结论脊柱结核血清中IL-1β、IL-6和CRP可被认为与TLR-2有密切关系,有效抑制TLR-2可有效降低脊髓结核患者的炎症水平。

TLR-2信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞扩增方面的影响

目的探讨TLR-2(Toll like receptor-2)信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Treg)扩增方面的影响及其与成人免疫系统的差别。方法应用TLR-2的配体-肽聚糖(PPG)和有丝分裂原-植物凝血素(PHA)刺激胎儿脐带血单核淋巴细胞(CBMC)和成人外周血单核淋巴细胞(PBMC),然后采用3H胸腺嘧啶掺入法测淋巴细胞增殖情况及流式细胞技术检测活化T细胞,Treg细胞扩增情况。结果PPG和PHA刺激后,CBMC淋巴细胞总体明显增殖(P<0.05),但PPG的刺激不能使活化T细胞和Treg细胞比例增加(P>0.05)。PPG和PHA刺激后,PBMC淋巴细胞总体明显增殖(P<0.05),且活化T细胞和Treg细胞比例均增加(P<0.05)。此外,PPG诱导的CBMC淋巴细胞增殖强度弱于PBMC(P<0.05)。结论TLR-2信号途径可以诱导新生儿淋巴细胞增殖但活化T细胞和Treg细胞比例不增加,与成人免疫系统的TLR-2信号途径存在差别。

卡氏肺孢子菌肺炎鼠肺模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达变化

目的:研究卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,Pc)肺炎鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达,探讨模式识别受体表达改变与PCP疾病发生的相互关系。方法实验分4组:正常对照组、Pc刺激组、PCP模型组以及PCP模型恢复组。地塞米松磷酸钠免疫抑制方法建立PCP动物模型,改良四胺银(GMS)染色检测Pc包囊;肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量和Western-blot检测Dectin-1、TLR-2和TLR-4的mRNA以及蛋白的表达。结果:Pc刺激组的Dectin-1、TLR-2以及TLR-4的mRNA以及蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.05);Pc刺激组和PCP恢复组Dectin-1的mRNA以及蛋白显著高于PCP组(P<0.05),而肺部Pc载荷量显著低于PCP组(P<0.05)。结论地塞米松抑制了PCP鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4受体的表达,这可能与PCP疾病的发生和发展有关。

人牙髓组织中TLR-2的表达研究

目的探讨Toll样受体-2(TLR-2)在人牙髓组织中的分布与表达。方法对10颗健康牙髓和10颗炎症牙髓分别进行免疫组化和逆转录实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测,研究TLR-2的分布与表达。结果 TLR-2在健康人牙髓组织中表达呈阴性,在炎症牙髓组织中表达呈阳性。炎症牙髓组织中TLR-2阳性表达率显著高于健康牙髓组,差异有统计学意义(P<0.01)。2组牙髓组织标本总R N A R T-PCR扩增产物电泳显示,炎症牙髓标本均在β-actin条带之上368bp位置出现条带,而健康牙髓标本未见对应条带。结论 TLR-2在炎症牙髓组织中存在弱阳性表达,提示TLR-2可能参与了人牙髓组织的炎症和免疫反应。

石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化

本试验旨在研究石膏样小孢子菌经皮肤感染小鼠后皮肤损伤组织中模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化规律。通过对C57BL/6小鼠皮下接种大熊猫源石膏样小孢子菌,分别在第3、7和14天取病变皮肤组织,经PAS染色和HE染色观察孢子定植部位和病理损伤;分别在第3、6和12小时取病变皮肤组织,用荧光定量PCR检测受体mRNA的转录表达量;分别在第1、3、7和14天取样,用荧光定量PCR检测细胞因子mRNA的转录表达量。结果表明:石膏样小孢子菌感染小鼠后导致皮下脓肿,大量的炎性细胞浸润,并伴有角质层增厚。试验中模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4的转录表达量增加(P<0.01),细胞因子IL-6、IL-1β、IL-23、 TGF-β、IL-17A、IL-17F和IL-22的转录表达量增加(P<0.01)。模式识别受体通过识别病原菌表面模式识别分子而引发免疫反应。本研究表明,机体感染石膏样小孢子菌后,模式识别受体表达显著增加,并通过识别菌体表面模式识别分子从而激活Th17途径,分化成熟的Th17细胞分泌细胞因子IL-22、IL-17A和IL-17F,从而发挥抗菌作用。

利用RNA干扰技术研究长牡蛎TLR2-2基因对MyD88-2基因表达的影响

为研究长牡蛎(Crassostrea gigas)免疫基因TLR2-2对MyD88-2基因表达的调控作用,将体外合成的dsRNA注射进入成体长牡蛎体内,72 h后检测TLR2-2基因和MyD88-2基因的表达量。结果表明,成功地对TLR2-2基因和MyD88-2基因进行了干扰,而在TLR2-2基因被干扰后,MyD88-2基因的表达量显著下降,但在MyD88基因被干扰的长牡蛎中TLR2-2基因表达量没有明显变化。

TGF-β_1对γδT细胞TLR-4受体及IL-2、IFN-γ水平的影响

目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)对γδT淋巴细胞Toll样受体4(TLR-4)蛋白表达的影响,及TGF-β_1对γδT淋巴细胞分泌淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)的影响。方法从健康志愿者外周血中分离纯化γδT淋巴细胞,并用外源性TGF-β_1、脂多糖(LPS)刺激γδT淋巴细胞,分为4组培养:空白对照组、LPS组、LPS+TGF-β_1组、TGF-β_1组。培养12 d后采用酶联免疫吸附法检测淋巴因子IFN-γ、IL-2的表达,Western blot检测TLR-4蛋白的表达,PCR检测TLR-4基因的转录。结果与空白对照组相比,LPS组、LPS+TGF-β_1组TLR-4蛋白的转录及表达水平升高(P<0.05),淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达增加;TGF-β_1组TLR-4蛋白的表达、转录及IL-2的表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+TGF-β_1组TLR-4蛋白的转录及表达、淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达降低(P<0.05)。结论TGF-β_1能抑制γδT淋巴细胞TLR-4蛋白的表达,降低γδT淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2淋巴因子的水平。

清消法通过调节TLR-2/NF-κB通路对大鼠痤疮局部炎症反应的改善作用研究

目的:观察清消法对痤疮模型大鼠耳廓炎症反应的影响,探讨清消法治疗痤疮的作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和中药组各10只,采用大鼠右耳廓注射痤疮丙酸杆菌方法复制痤疮模型。中药组给予枇杷清肺饮加减方,西药组给予异维A酸胶囊灌胃,其他2组给予等剂量生理盐水灌胃,连续给药21 d后观察大鼠耳外观及形态变化,测量大鼠耳廓厚度,计算大鼠耳廓组织肿胀率,ELISA检测大鼠血清中TNF-α、IFN-γ含量,免疫组化和蛋白质印迹(Western blot)检测大鼠病灶组织中的TLR-2、NF-κB P65蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠耳廓厚度及肿胀率显著增高,血清TNF-α升高,IFN-γ降低,大鼠耳廓组织中TLR-2、NF-κB的表达明显增加(均P<0.05);与模型组比较,西药组和中药组大鼠耳廓组织厚度及肿胀率、血清TNF-α、IFN-γ表达水平与大鼠耳廓组织TLR-2、NF-κB的表达水平均有所改善(均P<0.05),且中药组的改善效果稍好于西药组。结论:清消法能有效地改善大鼠痤疮局部炎症反应,其机制可能通过调节TLR-2/NF-ΚB来抑制TNF-α表达、促进IFN-γ表达。

开放骨折感染中BMP-2与TLR-4表达的研究

目的探讨控制成骨细胞分化的关键因素BMP-2及炎症信号受体TLR-4与骨折创伤后感染性炎症反应的关系。方法 18只雄性新西兰兔随机分为对照组(C组)、单纯开放骨折组(O组)和开放骨折+感染组(OI组),每组6只。O组利用手术方法制备胫骨开放骨折模型,OI组在O组的基础上用金黄色葡萄球菌感染造成开放骨折合并感染模型。术后第4天测定胫骨断端组织BMP-2和TLR-4基因表达情况(mRNA和蛋白水平)。结果与C组比较,O组BMP-2和TLR-4 mRNA和蛋白水平均显著升高,OI组BMP-2 mRNA降低,而TLR-4 mRNA和蛋白升高;与O组比较,OI组BMP-2 mRNA和蛋白下降,TLR-4mRNA和蛋白增加。结论开放骨折感染早期时,BMP-2表达下调而TLR-4表达上调,对骨折愈合将起不利作用。提高骨折部位微环境BPM-2表达并抑制TLR-4表达可能是治疗策略的新靶点。

TLR-2、NF-κBp65基因在兔膝关节软骨细胞损伤后不同时间点的表达变化

目的 检测TLR-2、NF-κBp65基因在兔膝关节软骨细胞损伤后不同时间点的表达变化。方法 将4周龄兔膝关节软骨分离并消化,进行软骨细胞培养,将软骨细胞传代、划伤,在显微镜下观察记录损伤后不同时间点的细胞形态变化。通过荧光定量PCR检测关节软骨细胞TLR-2与NF-κBp65在损伤前及损伤后1、3、7天3个时间点的表达。结果 分离关节软骨细胞,通过原代培养后成功建立细胞损伤模型。TLR-2与NF-κBp65表达水平在损伤后1、3、7天后表达量均逐步降低(P<0.01)。结论 TLR-2与NF-κBp65在软骨细胞损伤前后的不同时间点表达不同,为探讨二者在预防及治疗骨关节炎方面提供新的思路。