雏鸡感染肠炎沙门氏菌后脾脏中TLR4和TLR15 mRNA表达水平的变化

本研究以中国地方三黄鸡为实验对象,检测在肠炎沙门氏菌的急性感染期,雏鸡生长和脾脏中TLR4和TLR15 m RNA表达水平的变化。将2日龄三黄鸡随机分为对照组和攻毒组,攻毒组颈部皮下注射100μL含106 CFU肠炎沙门氏菌的PBS缓冲液,对照组则注射等体积PBS缓冲液。分别在感染后d1和d3(即3日龄和5日龄)记录雏鸡体重和采集脾脏样品,采用实时荧光定量PCR方法比较两组雏鸡脾脏样品中TLR4和TLR15 m RNA表达量的变化。结果显示,3日龄时对照组雏鸡体重与出雏重相比差异没有显著统计学意义,发生增重停滞,而攻毒组雏鸡体重显著低于出雏重(P=0.018)和3日龄对照组体重(P=0.026);攻毒后d3,对照组体重极显著高于0日龄体重(P=0.000),并且与攻毒组鸡的体重具有极显著统计学意义(P=0.000),而此时攻毒组鸡的体重亦增加并超过0日龄体重(P=0.051)。肠炎沙门氏菌攻毒后,雏鸡脾脏中TLR4(P=0.023)和TLR15(P=0.000)m RNA表达均发生显著上调,其中TLR15 m RNA表达的上调持续至5日龄(P=0.000);肠炎沙门氏菌对雏鸡体重、脾脏中TLR4和TLR15 m RNA表达的影响,在日龄上均表现出极显著的交互效应(P=0.000),且雏鸡体重和脾脏TLR4 m RNA表达量呈极显著的正相关(r=0.471,P=0.000)。综上所述,在肠炎沙门氏菌的急性感染期雏鸡的体重增长受到严重影响,脾脏中上调的TLR4和TLR15 m RNA表达参与了三黄鸡沙门氏菌感染的免疫应答过程。

不同种类球虫刺激鸡异嗜白细胞ChTLR4、ChTLR15和IL-6 mRNA表达水平的研究

为了评价不同种类球虫刺激对ChTLR4、ChTLR15和IL-6 mRNA表达水平的影响,试验采用荧光定量PCR方法检测了鸡柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)、兔斯氏艾美尔球虫(Eimeria stiedai)和犬芮氏等孢球虫(Isospora rivolta)刺激鸡异嗜白细胞后相应基因的表达水平。结果表明:与对照组相比,E.tenella子孢子刺激组ChTLR4、ChTLR15和IL-6 mRNA的表达显著增加(P<0.05);E.stiedai子孢子刺激组ChTLR4和IL-6 mRNA的表达显著上调(P<0.05),而ChTLR15 mRNA表达无显著性变化;I.rivolta子孢子和E.tenella孢子化卵囊刺激对鸡ChTLR4、ChTLR15和IL-6 mRNA的表达无显著影响;加热灭活的E.tenella和E.stiedai子孢子刺激对异嗜白细胞ChTLR4和ChTLR15 mRNA的表达水平略高于活的球虫子孢子。说明ChTLR4可能对艾美尔属球虫具有识别功能,ChTLR15可能只识别感染鸡的特异性球虫种类,这两种受体所识别的配体不是球虫子孢子热不稳定蛋白。

不同日龄鸡法氏囊中TLR15、LY86和TRIM39 mRNA表达水平

本研究通过荧光定量PCR方法检测了TLR15、LY86和TRIM39 mRNA在不同日龄鸡法氏囊中的变化。结果显示,10日龄时,TLR15 mRNA的相对表达量显著高于18胚龄时的,10日龄和30日龄时的表达量基本相同;出壳后,LY86 mRNA的表达水平呈下降趋势,30日龄时的表达量极显著低于18胚龄时的;而TRIM39 mRNA在出壳后表达量逐渐增加,30日龄时的表达量极显著高于18胚龄时的。本研究结果表明,TLR15、LY86和TRIM39在鸡法氏囊发育过程中发挥着重要作用。

LPS诱导下鹅TLR15及相关免疫因子的表达分析

为探究炎症反应中东北白鹅Toll样受体15(TLR15)的免疫功能及其组织表达特征,本研究采用荧光定量PCR方法,对LPS诱导下的东北白鹅TLR15及相关免疫因子在不同组织的转录水平进行分析;同时利用免疫组织化学技术,对TLR15在不同组织中的表达水平进行检测。结果显示,在LPS诱导下东北白鹅TLR15及其相关免疫因子(IFN-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6)的转录水平均高于对照组,其中TLR15、IFN-α和IFN-γ在法氏囊组织转录水平最高(p<0.01),IL-6在胸腺中转录水平最高,表明在炎症反应中TLR15及其免疫因子在不同组织的转录水平存在一定的差异。免疫组织化学检测结果显示,与对照组比较,各实验组TLR15在法氏囊、脾脏和肝脏中的表达差异极显著(p<0.01),在肺组织和肾组织中的表达差异显著(p<0.05),表明在LPS诱导下,鹅TLR15基因的转录和翻译水平一致。本研究为东北白鹅TLR15在炎症反应中的免疫功能分析提供了参考依据。

清远麻鸡和白耳鸡TLR15基因多态与鸡白痢沙门菌天然感染率的相关性

以中国地方三黄鸡(清远麻鸡和白耳鸡)的种母鸡为研究对象,通过血清平板凝集反应对鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum,SP)天然感染情况进行评估,通过PCR-SSCP的方法筛查Toll样受体15(Toll-like receptor15,TLR15)基因在2个鸡种中的多态性,并对TLR15基因单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点与鸡SP天然感染率进行相关性分析。结果显示:清远麻鸡和白耳鸡的鸡SP感染率分别为37.50%和53.50%,清远麻鸡的SP感染率显著低于白耳鸡的SP感染率(P<0.05);Ch TLR15基因的外显子区域检测到3个SNPs(G168A、C726T、A1166G),其中G168A和C726T为沉默突变,A1166G能引起编码氨基酸由赖氨酸(Lys)突变为精氨酸(Arg);C726T(P<0.05)和A1166G(P<0.01)在品种间基因型分布差异显著,C726T在白耳鸡的阴阳性感染鸡之间(P<0.05)和两品种的阴性感染鸡之间(P<0.01)的基因型分布差异显著;A1166G则在两品种的阴性或阳性感染鸡之间的基因型分布均差异极显著(P<0.01)。C736T多态位点基因型和品种分布在鸡白痢沙门菌自然感染率性状上存在着显著的互作效应(P<0.01)。结果表明:肉用型的中国地方鸡种对SP的抗性较强于蛋用型鸡种,TLR15的C726T多态位点可能与鸡的SP抗性具有相关性。

鸡Toll样受体15的生物信息学分析及组织表达

Toll样受体是参与机体天然免疫的一类模式分子,可以识别多种病原体相关分子模式,快速启动有效的免疫应答,在机体的抗感染免疫中发挥重要的作用。为了深入探讨鸡Toll样受体的免疫功能,为禽类相关疾病的预防和控制提供依据,试验通过RT-PCR技术克隆海兰褐鸡TLR15基因的全长阅读框,同时将其胞外区片段插入载体p ET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE和Western Blot法检测融合蛋白,并将融合蛋白作为免疫原免疫昆明鼠后制备多克隆抗体,同时采用免疫组织化学的方法,对ch TLR15的组织表达进行检测。结果表明,海兰褐鸡TLR15编码基因全长2 607 bp,编码868个氨基酸残基,其中胞外区1 962 bp,重组蛋白分子量约为72 ku;免疫小鼠可以产生特异性的抗体,抗体效价为1∶10 000;免疫组化检测结果显示,ch TLR15主要在脾脏中表达,在肝脏和肺部表达较少。研究结果可为禽类TLR15相关的免疫调节机制分析提供物质基础,也可为后续抗感染生物制剂的开发奠定基础。