莪术油对病毒性脑炎小鼠TNF-α、TLR2 mRNA和S100B蛋白表达的影响

目的分析莪术油对病毒性脑炎(herpes simplex virus encephalitis,HSE)小鼠TNF-α、TLR2 mRNA和S100B蛋白表达的影响,初步探讨莪术油治疗HSE的相关机制。方法选择5周龄新西兰小鼠40只,♂,随机分为空白对照组、莪术油组、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)-1+莪术油组、HSV-1组;HSV-1组、HSV-1+莪术油组颅内注入HSV-1病毒,造HSE模型小鼠;空白对照组、莪术油组同样方式注射Vero细胞培养液上清;造模后空白对照组、HSV-1组灌胃生理盐水,莪术油组、HSV-1+莪术油组灌胃莪术油。采用免疫组化法对脑组织病理情况进行分析;采用ELISA法检测脑组织中TNF-α、S100B水平;采用QT-PCR法检测脑组织中TLR2 mRNA水平。结果与HSV-1组相比,HSV-1+莪术油组小鼠可见实质性脑组织细胞变性、水肿减轻,脑组织病灶淋巴细胞、小胶质细胞等单核巨噬细胞侵袭浸润水平减弱,HSV-1+莪术油组小鼠脑组织中TLR2mRNA水平均显著降低(P<0.01);HSV-1+莪术油组小鼠脑组织中TNF-α及S100B水平均显著降低(P<0.01)。结论莪术油可能通过抑制病毒性脑炎小鼠TNF-α、TLR2 mRNA、S100B蛋白表达从而发挥疗效。

乳酸杆菌制剂对应用抗生素大鼠体内TLR2 mRNA转录水平及相关因素影响的研究

目的动态观察乳酸杆菌制剂对应用抗生素大鼠肠道菌群结构和TLR2 mRNA转录水平的影响。方法采用细菌培养法定量检测肠道双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌和肠球菌;利用反转录聚合酶链反应技术测定大鼠肠黏膜组织、肠系膜淋巴结、肝脏和脾脏细胞TLR2 mRNA转录水平。结果应用抗生素可致肠道菌群失调和TLR2 mRNA转录水平的早期受抑制。乳酸杆菌制剂干预可迅速提高肠道乳酸杆菌数量,及早扶正肠道菌群结构,减轻由于应用抗生素引起的Toll样受体mRNA转录受抑程度。结论乳酸杆菌制剂早期干预可及早扶正肠道菌群结构,减轻TLR2 mRNA转录水平受抑制程度,为临床合理应用抗生素,早期益生菌干预提供理论依据。

荧光定量RT-PCR检测雏鸡感染NDV强毒后胸腺和法氏囊中TLR2与TLR4 mRNA的表达

Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在识别病原微生物过程中发挥重要作用。为了定量检测TLR2、TLR4 mRNA表达水平,研究病原与机体的相互作用,本研究建立了检测鸡TLR2、TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测了新城疫病毒强毒(vNDV)感染SPF雏鸡后36h、48h时胸腺、法氏囊中TLR2、TLR4 mRNA表达量变化。结果显示该方法特异性好,RRT-PCR产物分别在85.5℃、83.3℃出现单特异峰,对TLR2、TLR4的扩增效率分别为105.91%和95.30%,相关系数分别为0.9980、0.9996,最低检测限分别为108拷贝/反应和461拷贝/反应。感染后36h vNDV显著抑制TLR2、TLR4基因在法氏囊、胸腺中的表达;感染后48h时,法氏囊、胸腺中TLR2基因的表达水平显著升高,胸腺中TLR4基因的表达显著升高,而法氏囊中TLR4基因的表达仍处于抑制状态。本研究证明TLR2和TLR4参与了鸡体对NDV的感染应答。

军团菌体外刺激对人PBMC TLR2 mRNA表达影响

目的探讨嗜肺军团菌活菌刺激对人外周血单个核细胞(PBMC)表达TLR2 mRNA的影响。方法采用不同浓度的嗜肺军团菌活菌悬液刺激体外培养的健康人PBMC,收集细胞运用RT-PCR方法测定TLR2 mRNA的表达水平。结果析因分析结果显示,时间的主效应有统计学意义(F=26.06,P<0.05);时间与浓度的交互作用有统计学意义(F=11.39,P<0.05);24 h时,MOI 1、MOI 10刺激组TLR2 mRNA的表达量均高于对照组(P<0.05),呈现随菌液浓度升高表达量也逐渐升高,48 h时,各组之间TLR2 mRNA的表达量差异虽无统计学意义(P>0.05),但表达量随浓度升高呈现下降趋势,72 h时,各组之间TLR2 mRNA的表达量差异有统计学意义(P<0.05),但随菌液浓度升高表达量反而降低。结论用军团菌体外刺激人PBMC,其TLR2 mRNA的表达在一定范围内呈一定的时效与量效关系,可为今后的研究提供有益的时间和剂量参考。

白念珠菌对高糖环境下HaCaT细胞表达TLR2 mRNA的影响

目的观察在高糖环境下白念珠菌对人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)表达TLR2mRNA的影响。方法分别在高糖和低糖DMEM培养基下共同培养Ha Ca T细胞与白念珠菌菌悬液,分别为高糖(HG)实验组,低糖(LG)实验组。并将两种培养基下未受白念珠菌感染的Ha Ca T细胞做对照,分别为HG对照组,LG对照组。观察Ha Ca T细胞与白念珠菌培养情况,并在第1h、6h、24h通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测4组中TLR2 mRNA表达量的变化。结果在第1h、6h、24h,TLR2 mRNA表达量始终表现为LG实验组高于HG实验组,LG对照组高于HG对照组,且实验组高于对照组(P<0.01)。HG实验组与LG实验组中TLR2mRNA均于第1h开始增多,6h达到高峰,到第24h均有所下降;且HG实验组在第24h与LG实验组相比下降得更明显(P<0.01);而HG对照组与LG对照组则始终无明显改变(P>0.01)。结论 Ha Ca T细胞感染白念珠菌后,高糖环境不利于角质形成细胞TLR2 mRNA的分泌,推测糖尿病患者易患白念珠菌感染性皮肤病与Ha Ca T细胞表达TLR2 mRNA减少有关。

血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值

目的:探讨血清移动抑制因子(MIF)、25-羟维生素D_(3)(25-(OH)D_(3))、Toll样受体2(TLR2)mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值。方法:选取我院2019年3月-2021年5月收治且完成随访的118例活动性肺结核患者为研究对象,治疗6个月后随访6个月,根据疾病复发情况将患者分为复发组(17例)和未复发组(101例)。比较两组治疗前、治疗2、4、6个月后血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平,分析血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平与疾病转归相关性,偏回归分析影响肺结核患者疾病转归的危险因素,比较不同高低水平复发风险度。结果:复发组治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平高于未复发组,25-(OH)D_(3)水平低于未复发组(P<0.05);Spearman分析,治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平与疾病复发呈正相关,血清25-(OH)D_(3)水平与疾病复发呈负相关(P<0.05);Logistic分析显示,血清MIF、TLR2 mRNA、25-(OH)D_(3)水平为活动性肺结核患者疾病复发的独立危险因素(P<0.05);治疗后血清MIF、TLR2 mRNA高水平、血清25-(OH)D_(3)低水平的复发风险较高(P<0.05)。结论:动态监测血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平变化对预测活动性肺结核患者疾病转归的状况存在指导效果。

小鼠肝缺血/再灌注损伤时肝脏Kupffer细胞中TLR2的表达

目的 观察小鼠肝部分缺血 /再灌注损伤时肝脏Kupffer细胞表面TLR2mRNA的表达及蛋白质的合成情况。方法 制作小鼠肝部分缺血 /再灌注损伤模型。采用原位灌注消化法分离并纯化Kupffer细胞 ,用大鼠抗小鼠TLR 2IgG和异硫氰酸荧光素 (FITC )的二抗进行染色 ,流式细胞仪 (FCM )测定阳性细胞数 ;并测定Kupffer细胞的TLR2mRNA含量。结果 缺血 60min ,再灌注 4h时 ,实验组小鼠肝脏Kupffer细胞表面TLR2mRNA表达及蛋白的合成量均明显高于假手术组 ,且缺血叶高于非缺血叶。结论 小鼠肝缺血 /再灌注损伤时 ,肝脏Kupffer细胞表面的TLR2mRNA表达明显增高 。

肝癌大鼠癌细胞microRNA-21含量与TLR2、TLR4、NF-κB水平的相关性研究

目的:研究肝细胞肝癌(HCC)大鼠癌细胞微小RNA-21(microRNA-21)含量与Toll样受体2(TLR2)、TLR4、核因子κB(NF-κB)水平的相关性.方法:40只SD大鼠随机分为对照组、模型组,各20只,模型组腹腔注射二乙基亚硝胺建立肝癌模型,对照组腹腔注射等量生理盐水,3次/周,连续12周.于12周末处死大鼠,解剖摘取肝脏,观察肝脏形态,行HE染色,采用RT-PCR检测microRNA-21、TLR2、TLR4、NF-κB mRNA表达,采用pearson相关性分析microRNA-21含量与TLR2、TLR4、NF-κB水平的相关性.结果:肝癌大鼠呈病态特征,精神状态、饮食活动、毛发生长、体重等异常,死亡大鼠较多.HE染色结果显示,肝癌大鼠肝组织呈水肿状态,色泽异常,表面粗糙,可见散在瘀斑,边缘变钝,质地翠硬易破裂,光镜可见肝小叶结构紊乱,肝小叶内肝细胞萎缩,大量坏死液化,中性粒细胞浸润.RT-PCR结果显示,模型组microRNA-21含量明显高于对照组,有统计学差异;模型组TLR2、TLR4、NF-κB mRNA表达水平明显高于对照组,有统计学差异;肝癌细胞中microRNA-21含量与TLR2、TLR4、NF-κB水平均呈正相关.结论:microRNA-21、TLR2、TLR4、NF-κB在肝癌大鼠癌细胞中表达上调,且microRNA-21含量与TLR2、TLR4、NF-κB水平呈正相关.