过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型的建立

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2^(-)),嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2分子的Nalm-6细胞(TLR2^(+))。利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平。结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性。Western Blot检测到TLR2在Nalm-6细胞中成功表达,且TLR2信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平。CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖。研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促进细胞增殖。此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础。

秃疮花异紫堇碱对LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞炎症因子和TLR2/MYD88/NF-κB通路的影响

试验旨在探究秃疮花异紫堇碱(ICD)对脂多糖(LPS)诱导的牛肺微血管内皮细胞(CPA 47)炎症因子和Toll样受体2/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR2/MYD88/NF-κB)通路的影响。选取CPA 47分为5组接种于6孔板中,每组设置4孔,对照组细胞加入1640培养基,LPS组加入脂多糖处理建立炎症模型,ICD高剂量组细胞加入20 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD中剂量组细胞加入15 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD低剂量组细胞加入10 mg/L ICD+50μg/L LPS。分别利用ELISA检测各组的炎性因子含量,实时荧光定量PCR检测TLR2/MYD88/NF-κB通路中关键基因的表达量,免疫印迹法(Western blot)检测上述通路中各蛋白含量。结果显示,与对照组相比,LPS处理组和ICD低剂量组牛肺微血管内皮细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量显著升高(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,ICD高、中剂量组中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量显著降低(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著降低(P<0.05)。研究表明,15~20 mg/L ICD可以有效缓解LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞的炎症反应,抑制LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞TLR2/MYD88/NF-κB炎症通路的激活。

TLR2对胶质母细胞瘤的预后价值和体外作用

目的探究TCGA数据库中TLR2基因在胶质母细胞瘤(GBM)中的预后价值,并明确该基因对胶质母细胞瘤细胞LN229的体外作用。方法从TCGA数据库中获取169例胶质母细胞瘤患者的临床信息和肿瘤样本的转录组数据,通过Kaplan-Meier生存曲线分析评估TLR2基因在GBM患者中的预后作用。构建TLR2敲减的人胶质母细胞瘤LN229细胞系,通过RT-qPCR和Western Blot验证。通过CCK8、克隆形成、细胞划痕、Transwell小室法,检测敲减TLR2对LN229细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力的影响。结果与正常样本相比,TLR2在GBM患者样本中表达增高。生存分析结果显示,TLR2高表达组患者总生存期显著低于低表达组患者(总生存期中位值333 d vs.402 d,P<0.05)。RT-qPCR和Western Blot结果显示,TLR2敲减的人胶质母细胞瘤LN229细胞系成功构建。与转染si-control的LN229胶质瘤细胞相比,转染si-TLR2的LN229胶质瘤细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。与转染si-control的LN229胶质瘤细胞相比,转染si-TLR2的LN229胶质瘤细胞克隆形成数明显降低(P<0.05)。转染si-TLR2的LN229细胞迁移能力明显低于转染si-control的LN229胶质瘤细胞(P<0.05)。转染si-TLR2的LN229细胞侵袭能力明显低于转染si-control的LN229胶质瘤细胞(P<0.05)。结论本研究通过数据挖掘发现TLR2表达与胶质母细胞瘤患者的预后显著相关,通过实验验证敲减TLR2有效抑制LN229细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,上述发现将为胶质母细胞瘤预后判断和靶向治疗提供新的潜在靶点。

儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液CARDS TX、HMGB1、TLR2表达及临床意义

目的研究肺炎支原体肺炎(MPP)患儿肺泡灌洗液中社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(CARDS TX)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体2(TLR2)表达,探讨其在MPP发病中的临床意义。方法回顾性分析55例MPP病例组及20例对照组临床资料,同时检测两组支气管肺泡灌洗液(BALF)中CARDS TX、HMGB1、TLR2、TLR4、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及髓样分化因子88(MyD88)表达,体外检测不同浓度CARDS TX刺激下HMGB1、TLR2的表达并进行比较。结果与对照组相比,MPP组LYM绝对值计数、PA、CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD3-CD19^(+)、NK cell、CD19^(+)CD23^(+)明显下降,CRP、LDH、D-二聚体、IgA、IgG、IgM、CARDS TX、HMGB1、TLR2、MyD88均升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.001)。CARDS TX刺激后HMGB1、TLR2的表达升高,且呈正相关,差异有统计学意义(P<0.001)。结论CARDS TX可能通过HMGB1-TLR2-MyD88途径参与肺炎支原体(MP)的致病。

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论加味少腹逐瘀汤可以降低寒湿瘀结证子宫内膜异位症小鼠血清炎症因子,这可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路改善腹腔炎症微环境有关。

基于TLR2/MyD88信号通路探究五味子乙素对全身炎症反应综合征的影响

目的观察五味子乙素(Schisandrin B,SchB)通过TLR2/MyD88信号通路对酵母聚糖诱导的小鼠全身炎症反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的影响。方法采用腹腔注射酵母聚糖方法造模,记录小鼠体温及白细胞变化,应用酶联免疫吸附法检测血清中TNF-α、IL-1β及IL-6水平,应用试剂盒检测ALT、AST、Cr、BUN含量;HE染色观察各组织病理学变化;应用Western Blot法检测组织中TLR2、MyD88、NF-κB、HMGB1蛋白表达水平。结果SchB使小鼠体温升高显著(P<0.01),白细胞数量增多明显(P<0.01);SchB能显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、ALT、AST、Cr、BUN水平(P<0.001);Western Blot结果显示,SchB能显著降低组织中TLR2、MyD88、NF-κB、HMGB1的表达水平(P<0.01)。结论SchB能够减轻由酵母聚糖导致的SIRS,其作用机制主要是通过调控TLR2/MyD88信号通路缓解炎症。

高脂肪饮食促进TLR2的表达促进3T3L1脂肪细胞分泌IFN-γ诱导胰岛素抵抗的发生及发展

目的:探讨高脂饮食诱导胰岛素抵抗的机制,以及了解高脂饮食诱导胰岛素抵抗的脂肪细胞的表型变化。方法:雄性C57 BL/6 J小鼠,给予正常饮食和高脂饮食。从正常饮食或高脂饮食喂养2周的小鼠中分离附睾脂肪组织。实时荧光定量RT-PCR检测γ-干扰素(Interferonγ,IFN-γ)和toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)mRNA的表达。流式细胞术来检测表达TLR2或IFN-γ的脂肪细胞的数量。苏木精-伊红染色分析胰腺组织。免疫组化分析脂肪组织中TLR2和IFN-γ的表达。FFA或Zymosan A处理3T3-L1脂肪细胞,并通过实时荧光定量RT-PCR检测IFN-γ和TLR2 mRNA的表达。结果:对脂肪细胞中基因表达谱的分析表明,高脂肪摄入诱导了IFN-γ和TLR2的表达提高。流式细胞术分析显示存在共表达TLR2和IFN-γ的脂肪细胞(TLR2/IFN-γ脂肪细胞),与皮下脂肪组织相比,高脂肪摄入增加了内脏脂肪组织中TLR2/IFN-γ脂肪细胞的数量。游离脂肪酸通过TLR2信号增加3T3-L1脂肪细胞中IFN-γ的表达。结论:TLR2/IFN-γ脂肪细胞可能通过诱导内脏脂肪组织IFN-γ的表达,参与高脂诱导的胰岛素抵抗的发生。

TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。

miR-143-3p靶向调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的研究miR-143-3p对LPS+ATP诱导HCT-116细胞焦亡的影响。方法双荧光素酶检测miR-143-3p与TLR2基因靶向关系。转染miR-143-3p mimic后建立焦亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡,生化法检测Caspase-1活性及LDH含量;ELISA法检测IL-1β、IL-18含量。q-PCR检测NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA水平;免疫荧光检测NLRP3、ASC蛋白表达;Western blot检测TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1蛋白表达。结果双荧光素酶检测发现miR-143-3p靶向调控TLR2表达。miR-143-3p mimic组和si TLR2组较模型组细胞中NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA表达及TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低;Caspase-1活性及LDH、IL-1β、IL-18含量降低。结论miR-143-3p靶向TLR2基因调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路调控溃疡性结肠炎细胞焦亡。

文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响

通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。

清渣汤对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5表达的影响

目的:观察清渣汤口服对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体2(TLR2)、激肽释放酶5(KLK5)表达的影响。方法:7周龄健康雄性小鼠36只,用随机数字表法将其分为6组:清渣汤高剂组、中剂组、低剂组、阳性对照组(多西环素片)、模型对照组、正常对照组,每组6只。除正常组外,其余各组均进行玫瑰痤疮造模。造模24 h后给药,模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,清渣汤3剂组分别给予25 mg/kg(低剂量组)、50 mg/kg(中剂量组)和100 mg/kg(高剂量组)清渣汤灌胃,阳性对照组给予30 mg/kg盐酸多西环素溶液灌胃,每日1次,共给药4周。免疫组化法检测皮损部位皮肤组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平。结果:模型组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达较正常组明显增强(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和清渣汤高、中、低剂量组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:清渣汤能够抑制玫瑰痤疮小鼠模型皮损部VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平,从而减轻炎症反应。

基于生物信息学分析miR-143调控TLR2信号通路对溃疡性结肠炎的影响

目的基于生物信息学分析miR-143调控Toll样受体2(TLR2)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)的影响。方法在GEO数据库中下载GSE75214、GSE53306、GSE48958基因数据集及miRNA数据集GSE68306进行分析。将符合标准的差异miRNA用miRDB软件预测靶基因并与筛选的差异基因映射,挑选出UC中关键miRNA进行实验。按随机数字表法将20只小鼠分为正常组及UC组,每组10只。用葡聚糖硫酸钠进行造模,苏木精-伊红染色法观察病理变化,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot检测结肠TLR2、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白含量,实时荧光定量PCR检测结肠组织miR-143、核转录因子-κB(NF-κB)、髓样分化因子(MyD88)含量。结果通过分析发现,共85个差异基因(包括34个下调及51个上调)及19个差异miRNA(5个DEMs高表达,14个DEMs低表达),其中miR-143为关键miRNA。实验显示,与正常组比较,UC组血清中TNF-α含量显著升高,结肠组织miR-143表达显著降低(P<0.05),TLR2、IL-1β蛋白表达明显升高,NF-κB、MyD88 mRNA含量升高(P<0.05)。结论miR-143为UC的重要miRNA,其可能通过调控TLR2通路影响UC发生发展。

黄芩苷通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛大鼠神经炎症

目的探讨黄芩苷通过抑制Toll样受体(TLR)2/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠神经炎症的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量(30 mg/kg)组、黄芩苷高剂量(60 mg/kg)组、黄芩苷高剂量+空载质粒组、黄芩苷高剂量+TLR2过表达组,每组10只,模型组和给药组通过腹腔注射树脂毒素(RTX)诱导建立PHN模型,对照组腹腔注射等剂量含10%Tween 80及10%乙醇的生理盐水,采用黄芩苷和质粒分组处理大鼠后,检测大鼠疼痛症状,比较自发缩足反射次数、缩爪阈值、热敏潜伏期;采用TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;采用免疫组织化学染色检测各组脊髓组织炎性细胞浸润,比较脊髓组织淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1阳性细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织及血清炎症因子前列腺素(PGE)2、白细胞介素(IL)-18、环氧化酶(COX)-2水平;采用免疫印迹法检测各组脊髓组织TLR2/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组、黄芩苷高剂量+空载质粒组缩爪阈值均显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著降低(均P<0.05);黄芩苷高剂量组缩爪阈值相比黄芩苷低剂量组显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(均P<0.05)。与黄芩苷高剂量组比较,黄芩苷高剂量+空载质粒组各指标无明显变化(P>0.05);黄芩苷高剂量+TLR2过表达组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。结论黄芩苷可通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路从而降低炎症因子产生释放,进而阻止PHN大鼠神经炎症,抑制脊髓神经细胞凋亡及炎性细胞浸润,最终改善大鼠长时程自发痛、机械性痛觉超敏反应与热痛觉减退症状。

TLR2和TLR4在维持性血液透析合并肺部感染患者外周血中的表达及意义

目的探究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在维持性血液透析合并肺部感染患者外周血中的表达及意义。方法选择2016年1月至2021年1月太仓市中医医院重症医学科收治的维持性血液透析患者60例为对象,根据患者是否合并肺部感染分为感染组(n=13)、未感染组(n=47),分析维持性血液透析患者合并肺部感染的危险因素,评估外周血TLR2和TLR4表达对维持性血液透析患者肺部感染的预测价值。结果感染组年龄≥60岁占比、外周血TLR2、TLR4表达水平较未感染组明显高,血红蛋白、红细胞体积较未感染组明显低,差异有统计学意义(χ^(2)=21.502、2.158、2.844、28.283、29.875,P<0.05)。二元Logistic回归分析提示年龄、血红蛋白、红细胞体积、外周血TLR2和TLR4表达是维持性血液透析患者合并肺部感染的高危因素(P<0.05)。外周血TLR2和TLR4表达是维持性血液透析患者合并肺部感染的高危因素(P<0.05)。外周血TLR2和TLR4联合检测预测维持性血液透析合并肺部感染的ROC曲线下面积(0.767)和特异度(81.1%)较两者单一检测的高(P<0.05)。结论维持性血液透析合并肺部感染患者外周血TLR2、TLR4表达水平明显增高,两者联合检测可有效预测肺部感染风险,可为肺部感染的有效防治提供新思路。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

肺纤方通过调控HMGB1/TLR2信号通路抑制特发性肺纤维化的实验研究

目的探讨肺纤方通过调控高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)/Toll蛋白受体2(toll protein receptor 2,TLR2)信号通路对特发性肺纤维化的抑制作用。方法选取健康雄性SD大鼠80只,分为对照组16只和造模组64只。造模组采用博来霉素气管注射法建立特发性肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水气管注射。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、肺纤方低、高浓度组及泼尼松组,各16只。模型组和对照组分别给予生理盐水10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;肺纤方低、高浓度组分别给予0.72、2.9 g/mL肺纤方药液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;泼尼松组给予1.0 mg/mL醋酸泼尼松溶液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药。所有大鼠均连续给药4周。对大鼠肺纤维化程度、血清血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及肺泡灌洗液炎症因子水平、肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平进行检测。结果治疗后,与模型组比较,各组大鼠肺纤维化程度评分较低,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平较低,血清PDGF、TGF-β1水平较低,肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平较低,且肺纤方低浓度组>泼尼松组>肺纤方高浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤方能明显减轻特发性肺纤维化模型大鼠肺纤维化程度,降低血清细胞因子PDGF、TGF-β1水平,抑制肺部炎症反应,且药物浓度越高效果越明显,其作用可能与下调HMGB1/TLR2信号通路活性有关。

基于TLR2/NF-κB信号通路探讨平喘方及拆方改善哮喘小鼠气道重塑作用机制

目的基于TLR2/NF-κB信号通路研究平喘方及拆方改善卵清蛋白诱导的哮喘小鼠气道重塑的作用机制。方法将75只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组和平喘祛瘀方组,每组15只。除空白组外,其余组小鼠于第1日和第14日采用卵清蛋白联合氢氧化铝凝胶腹腔注射致敏,第21~27日连续予5%卵清蛋白雾化激发哮喘,每次雾化激发1 h后灌胃相应药液,连续7 d,空白组和模型组予等量蒸馏水灌胃。末次给药24 h后取材,HE染色观察小鼠肺组织病理变化,Masson染色观察肺组织支气管周围胶原纤维沉积,RT-qPCR检测肺组织平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、钙调蛋白(Calponin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Toll样受体2(TLR2)、核因子(NF)-κB抑制因子α(IκBα)、NF-κBp65 mRNA表达,Western blot检测肺组织纤维连接蛋白1(FN1)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、TLR2、IκBα、NF-κBp65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠支气管管腔狭窄,炎性浸润明显,肺间质可见大量胶原纤维沉积,肺组织SM-MHC、Calponin、IκBαmRNA表达显著降低(P<0.01),α-SMA、TLR2、NF-κBp65 mRNA表达显著升高(P<0.01),FN1、CollagenⅠ、TLR2、NF-κBp65蛋白表达显著升高(P<0.01),E-cadherin、IκBα蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组、平喘方组及平喘祛瘀方组小鼠肺组织病理损伤减轻,炎性浸润及胶原纤维沉积减少,肺组织SM-MHC、Calponin、IκBαmRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05),α-SMA、TLR2、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),FN1、CollagenⅠ、TLR2、NF-κBp65蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),地塞米松组IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论平喘方及拆方能明显改善哮喘小鼠气道重塑,其机制可能与抑制TLR2/NF-κB信号通路相关。

杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响

目的观察杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响。方法将35只SD大鼠分为正常对照组、模型组、杜仲低剂量组(杜仲提取物200 mg/kg)、氨甲蝶呤组(氨甲蝶呤0.75 mg/kg)、杜仲高剂量组(杜仲提取物800 mg/kg),每组7只,连续给药3周。采用冷水游泳+足跖部皮内注射CFAO制备类风湿关节炎模型。记录各组大鼠关节肿胀程度及关节指数评分,ELISA检测血清免疫球蛋白水平;流式细胞仪检测T淋巴细胞水平;HE染色观察关节病变;Western blotting检测大鼠踝关节滑膜组织中Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α升高,CD4+、CD4+CD25+Treg水平降低(P<0.05),与模型组相比,杜仲低剂量组、氨甲蝶呤组、杜仲高剂量组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低,CD4+、CD4+CD25+Treg水平升高(P<0.05),杜仲低剂量组与氨甲蝶呤组差异无统计学意义(P>0.05),与氨甲蝶呤组相比,左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低,CD4+、CD4+CD25+Treg水平升高(P<0.05)。结论杜仲提取物可通过调节大鼠血清免疫球蛋白及T淋巴细胞水平,抑制类风湿TLR2、NF-κB信号通路,降低炎性水平。

TLR2/TLR4-NF-κB信号通路在痛风中的研究进展

痛风是由于血尿酸浓度升高,尿酸钠晶体在关节、肌腱和周围组织中沉积,从而导致炎症性关节炎间歇性发作。Toll样受体是先天免疫系统中模式识别受体的一种。痛风性关节炎是由于过饱和的尿酸钠晶体在血液中析出,并与巨噬细胞产生作用,导致中性粒细胞的趋化、聚集,从而激活TLR2/TLR4-NF-κB信号通路,释放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子和蛋白酶,导致痛风性关节炎的发生、发展。该文以痛风及TLR2/TLR4-NF-κB信号通路为主线,综述了TLR2/TLR4-NF-κB信号通路与痛风的相关性以及以该信号通路为靶点的治疗方法。