TLR4/ERK1/2信号通路在不明原因自然流产蜕膜组织中的作用研究

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)在不明原因自然流产患者蜕膜组织中的表达情况及二者的相关性。方法:分别采用免疫组织化学和Western blot技术检测32例不明原因自然流产患者(流产组)和32例正常妊娠者(对照组)蜕膜组织TLR4、ERK1/2和p-ERK1/2的表达差异及表达水平;采用Pearson等级相关性分析流产组TLR4与p-ERK1/2之间的相关性。结果:在免疫组织化学实验中,蜕膜细胞的胞质是TLR4、ERK1/2和p-ERK1/2的表达定位点,且3种蛋白表达有所差异,在流产组TLR4和p-ERK1/2的表达均明显高于对照组(P<0.01),ERK1/2的表达在两组中相较差异无统计学意义(P>0.05),流产组TLR4的蛋白水平高于对照组(P<0.05),p-ERK1/2的蛋白水平明显高于对照组(P<0.01),而ERK1/2的蛋白水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在流产组TLR4与p-ERK1/2的表达呈正相关(r=0.890,P<0.01)。结论:TLR4/ERK1/2信号通路的异常激活可能是不明原因自然流产发生机制之一。

HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

原发性喉癌血清COX-2 PTTG1 TLR4水平与临床病理特征及预后生存状况的关系探讨

目的:探究原发性喉癌血清环氧合酶-2(COX-2)、垂体瘤转化基因1(PTTG1)、Toll样受体4(TLR4)水平与临床病理特征及预后生存状况的关系。方法:选取2021年5月至2023年3月四川省达州市中心医院105例原发性喉癌患者、105例喉部良性病变患者分别作为观察组和对照组。比较两组血清COX-2、PTTG1、TLR4水平,多元线性回归分析血清COX-2、PTTG1、TLR4水平与临床病理特征的关系,随访3年,比较不同血清COX-2、PTTG1、TLR4水平患者预后生存率。结果:观察组COX-2、PTTG1、TLR4水平分别为(38.89±12.14)ng/L、(140.17±30.25)pg/mL、(13.94±3.25)ng/mL均高于对照组(17.63±5.09)ng/L、(98.49±15.63)pg/mL、(8.72±2.13)ng/mL(t=16.549、12.543、13.765,P均<0.05);多元线性回归分析显示,临床分期(偏回归系数:0.714、0.722、0.719)、肿瘤分化程度(偏回归系数:0.756、0.749、0.798)及淋巴结转移(偏回归系数:0.802、0.798、0.713)均为原发性喉癌患者血清COX-2、PTTG1、TLR4水平的影响因素(P<0.05);COX-2高水平亚组3年总生存率、总生存率分别为80.77%、71.15%,明显高于低水平亚组95.83%、87.50%(P<0.05);PTTG1高水平亚组3年总生存率、总生存率分别为80.39%、68.63%,明显高于低水平亚组95.92%、89.80%(P<0.05);TLR4高水平亚组3年总生存率、总生存率分别为78.85%、71.15%,明显高于低水平亚组97.92%、87.50%(P<0.05)。结论:原发性喉癌患者血清COX-2、PTTG1、TLR4水平均较高,且其高水平状态与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关,检测COX-2、PTTG1、TLR4水平可在一定程度上反映患者预后生存情况。

甘草酸二铵通过TLR4/NF-κB信号通路负调控LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应

目的:评价甘草酸二铵(DG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨其改善神经炎症的潜在机制。方法:采用LPS诱导BV2小胶质细胞损伤模型,给予20、60μmol/L DG处理。MTS检测细胞活力;Griess检测细胞NO分泌水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平。RT-qPCR检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平;Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、IκB-α和p-IκB-α蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS处理的BV2小胶质细胞活力明显降低(P<0.05),NO分泌显著增加(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平显著升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与LPS组相比,不同浓度DG干预的BV2小胶质细胞活力明显升高(P<0.05),NO分泌明显减少(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平明显降低(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:DG可有效减轻LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

Capsosiphon fulvescens suppresses LPS-stimulated inflammatory responses by suppressing TLR4/NF-κB activation in RAW264.7 murine macrophages

Objective:To evaluate the effects of Capsosiphon fulvescens(C.fulvescens)ethanolic extract on inflammation in lipopolysaccharide(LPS)-induced RAW296.7 macrophages.Methods:The protective effects of C.fulvescens ethanolic extract on LPS-induced inflammation in RAW264.7 macrophages were assessed using biochemical analysis,including enzyme-linked immunosorbent assay,quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,and Western blot analysis.To examine reactive oxygen species(ROS)production,flow cytometry analysis,and immunofluorescence staining were used.Furthermore,the modulatory effect of C.fulvescens ethanolic extract on NF-κB activation was investigated.Results:C.fulvescens ethanolic extract significantly attenuated LPS-induced levels of pro-inflammatory cytokines and notably reduced the secretion and mRNA levels of LPS-mediated matrix metalloproteinases.In addition,C.fulvescens ethanolic extract decreased ROS production and suppressed the TLR4/NF-κB signaling pathway.Conclusions:C.fulvescens ethanolic extract alleviates inflammation as well as oxidative stress by modulating the TLR4/NF-κB signaling in LPS-induced RAW264.7 macrophages.C.fulvescens can be used as a potential therapeutic agent to suppress inflammation and oxidative stress-associated diseases.

TLR4基因多态性与2型糖尿病肾病患者尿路感染易感性的关系研究

目的:研究Toll样受体4(TLR4)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)肾病患者尿路感染易感性的关系。方法:选取2020年02月-2023年02月该院收治的T2DM肾病合并尿路感染者85例(记为感染组)及同期未合并尿路感染的T2DM肾病患者81例(记为未感染组)、健康体检者30例(对照组)为研究对象,收集尿路感染者的中段尿液并予以病原菌培养和鉴定,测定其肾功能、炎症因子指标,经聚合酶链式反应(PCR)限制性片段长度多态性方法分析TLR4基因多态性,多因素Logistics回归法分析T2DM肾病患者尿路感染的危险因素。结果:85例T2DM肾病并发尿路感染患者中,中段尿样本共检出94株病原菌,包括革兰阴性菌55株(58.51%)、革兰阳性菌34株(36.17%)、真菌5株(5.32%),其中大肠埃希菌39株(占41.49%);感染组血清血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白(24 h UMA)、尿素氮(BUN)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)、Nod样受体蛋白3炎性小体(NLRP3)均高于未感染组、对照组(P<0.05);感染组的TLR4 rs10759932位点TT+TC基因型及等位基因T频率、rs11536889位点GG+GC基因型、等位基因G频率高于未感染组(P<0.05);T2DM肾病患病年限、留置尿管史、NF-κB、NLRP3水平及TLR4基因rs10759932位点、rs11536889位点基因多态性为T2DM肾病并发尿路感染的独立危险因素(P<0.05)。结论:T2DM肾病患者尿路感染的病原菌以大肠埃希菌为主,且TLR4基因多态性与T2DM肾病患者尿路感染易感性存在密切关联,可予以检测。

白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎Th1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者辅助性T细胞(helper T cell,Th)1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的影响。方法按照信封抽签法将锦州医科大学附属第一医院2021年4月至2023年12月期间接收的129例RA患者分为对照组(n=64,来氟米特片治疗)和观察组(n=65,白芍总苷胶囊联合来氟米特片治疗)。对比两组疗效、临床症状、病情评分、疾病相关指标、Th1/Th2细胞平衡和TLR4/NF-κB信号通路相关指标,同时观察两组不良反应发生情况。结果观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗2个月后晨僵时间缩短,关节肿胀数和关节压痛数减少,疼痛视觉模拟量表(visual analog scale of pain,VAS)评分和RA患者病情评价(disease activity score 28,DAS28)评分下降,C反应蛋白、红细胞沉降率、类风湿因子下降,Th2细胞升高,Th1细胞、Th1/Th2下降,TLR4信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)、NF-κB mRNA下降(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合来氟米特治疗RA患者,可促进患者症状改善,提高临床治疗效果,可能与调节Th1/Th2细胞平衡和抑制外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路激活有关。

EGCG调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对特应性皮炎大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照(Control)组、AD模型(AD)组、AD+EGCG治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4激动剂(TLR4)组,每组18只。根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析Th1和Th2阳性细胞比例;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及Th1细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05)。与AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th_1细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th_(2)阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05)。与EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th_1、Th_(2)细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中Th_1细胞百分比降低,Th_(2)阳性百分比及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05)。结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低AD的严重程度。

恩替卡韦经治的慢性乙肝患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响

分析恩替卡韦经治的慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响。方法 按照纳排标准,将邯郸市传染病医院80例慢性乙型肝炎患者并纳入研究,收集时间为2023年01月-2023年12月,随机双盲分成对照组、观察组,均为40例,前组使用恩替,后组使用恩替卡韦加用聚乙二醇干扰素α-2a。观察两组患者的最终治疗成效。治疗成效评估指标为临床疗效,治疗前后肝功能、血清肝纤维化、CXCL13和TLR4表达指标。结果 HBV DNA转阴率进行组间比较,统计计算无差异(P>0.05);HBeAg转阴率、HBeAg血清转换率在组间进行比较,观察组均高于对照组;血清AST、ALT、LN、PCⅢ水平,CXCL13和TLR4表达指标在治疗后均表现出下降趋势,且观察组下降幅度较大(P0.05)。结论 药物联合治疗方式对慢性乙型肝炎患者临床效果良好,有利于疾病的转归,同时缓解肝功能受损情况,临床效果良好,且可调节CXCL13和TLR4的表达,利于免疫功能的改善。

益糖康调控2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路实验研究

目的观察益糖康对2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨益糖康对2型糖尿病的抗炎作用机制。方法将SPF级SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组(不做处理),模型组(蒸馏水,5 mL/kg),益糖康组(益糖康汤剂,5 g/kg)和二甲双胍组(150 mg/kg),每组10只。所有大鼠给药途径均为经口灌胃,每日1次,连续4周。干预4周后,称量各组大鼠的体质量,快速血糖仪测定各组大鼠空腹血糖(FPG),手工法测定各组大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,称量白色脂肪(WAT)和棕色脂肪(BAT)总质量,并计算脂肪指数。酶联免疫吸附法检测肠黏膜组织中脂多糖(LPS)含量,脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western-blot法检测脂肪组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,其余3组大鼠的体质量,FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量,TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著升高(P<0.01);HDL-C、BAT的水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,益糖康组大鼠体质量显著升高(P<0.01),二甲双胍组没有显著差异(P>0.05),益糖康组和二甲双胍组大鼠FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量以及脂肪组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著降低(P<0.01),HDL-C、BAT的水平显著升高(P<0.01)。益糖康组大鼠体质量显著高于二甲双胍组(P<0.01)外,其余指标益糖康组和二甲双胍组之间比较均没有显著差异(P>0.05)。结论益糖康可能通过降低肠黏膜中LPS的含量进而抑制脂肪组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的过度活化,发挥抗炎作用,最终实现调控糖脂代谢的作用。

TLR2和TLR4在维持性血液透析合并肺部感染患者外周血中的表达及意义

目的探究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在维持性血液透析合并肺部感染患者外周血中的表达及意义。方法选择2016年1月至2021年1月太仓市中医医院重症医学科收治的维持性血液透析患者60例为对象,根据患者是否合并肺部感染分为感染组(n=13)、未感染组(n=47),分析维持性血液透析患者合并肺部感染的危险因素,评估外周血TLR2和TLR4表达对维持性血液透析患者肺部感染的预测价值。结果感染组年龄≥60岁占比、外周血TLR2、TLR4表达水平较未感染组明显高,血红蛋白、红细胞体积较未感染组明显低,差异有统计学意义(χ^(2)=21.502、2.158、2.844、28.283、29.875,P<0.05)。二元Logistic回归分析提示年龄、血红蛋白、红细胞体积、外周血TLR2和TLR4表达是维持性血液透析患者合并肺部感染的高危因素(P<0.05)。外周血TLR2和TLR4表达是维持性血液透析患者合并肺部感染的高危因素(P<0.05)。外周血TLR2和TLR4联合检测预测维持性血液透析合并肺部感染的ROC曲线下面积(0.767)和特异度(81.1%)较两者单一检测的高(P<0.05)。结论维持性血液透析合并肺部感染患者外周血TLR2、TLR4表达水平明显增高,两者联合检测可有效预测肺部感染风险,可为肺部感染的有效防治提供新思路。

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。

牙周炎经TLR4/NF-κB影响2型糖尿病中医证候的实验研究

目的通过动物实验分析慢性牙周炎对2型糖尿病虚证-血瘀证中医证候演变的影响。方法2022年6—12月选用30只8周龄雄性健康的清洁级白色封闭群大鼠(sprague dawley,SD),体质量为180~220 g。将所有SD大鼠分为糖尿病组及糖尿病合并牙周炎组,使用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)+高脂饲料喂养的方式建立糖尿病动物模型,丝线结扎+Pg涂菌法构建牙周炎动物模型。通过大鼠多项外观表征信息进行中医证候分析,检测血糖、血脂、血清炎症因子水平等及血液流变学分析;动物安乐死后取主动脉组织进行病理切片分析,逆转录聚合酶链反应(reverse tran-scriptase PCR,RT-PCR)检测Toll样受体-4(Toll like receptor-4,TLR-4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白、肿瘤坏死因子α(α-tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)mRNA表达水平,Westernblot检测TLR-4、NF-κB、人核因子κB抑制蛋白α(inhibitory subunit of NF kappa B alpha,IκBα)、磷酸化IκB激酶-α(phosphorylationiκBkinase-αP-iκBα,p-IκBα)蛋白的水平。结果两组大鼠证候分型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组大鼠空腹血糖(fastingplasma glucose,FPG)、总胆固醇(totalcholestero,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、全血低切黏度、全血中切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、纤维蛋白原、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-1(interleukin 1,IL-1)、IL-6、TNF-α,TLR-4、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平与TLR-4、NF-κB、IκBα、p-IκBα蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论牙周炎可经由TLR4/NF-κB信号通路参与糖尿病发生发展,因此基于TLR4/NF-κB通路对牙周炎与糖尿病的互作机制探究,进一步加强对糖尿病患者的牙周管理、对症治疗及口腔卫生指导对糖尿病牙周炎患者进行有效预防和联合治疗。

鱼腥草挥发油和甲基正壬酮对LPS-TLR4/MD-2-TNF-α炎症通路的影响

目的探讨鱼腥草挥发油及其单体甲基正壬酮对LPS-TLR4/MD-2-TNF-α炎症通路的影响。方法以TLR4/MD-2阻断剂封闭TLR4/MD-2位点,分别运用蛋白免疫印迹法（Western blot）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）对鱼腥草挥发油和甲基正壬酮干预后细胞中TLR4蛋白和炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素10（IL-10）的表达进行检测。同时建立二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型,对鱼腥草挥发油和甲基正壬酮的体内抗炎药效进行比较。结果在1～10μg·mL^-1浓度范围内短时干预时,鱼腥草挥发油对LPS诱导的RAW264.7细胞中TLR4蛋白的抑制作用优于甲基正壬酮,对炎症因子的作用与甲基正壬酮有一定差异。LPS＋TLR4/MD-2阻断剂＋药物干预组与LPS＋TLR4/MD-2阻断剂组比较,以挥发油干预后细胞中TLR4蛋白的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,而以甲基正壬酮干预后细胞中TLR4蛋白的表达明显减少。表明鱼腥草挥发油通过LPS-TLR4/MD-2-TNF-α通路发挥其抗炎作用,而甲基正壬酮可能通过其他途径发挥其抗炎作用。在相同剂量下鱼腥草挥发油的体内抗炎活性优于甲基正壬酮。结论鱼腥草挥发油与甲基正壬酮存在抗炎作用及机制的差异性,应是挥发油中多成分协同作用的结果。

利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域

脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的防治具有重要意义.运用基于强度的三通道荧光共振能量转移技术(FRET)及基因突变和转染技术,研究了活细胞TLR4与MD-2作用的结构域.结果表明:N端Glu24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降;LPS刺激后TLR4聚合迅速增加,而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合.上述结果提示,TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域,并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用.

早期脓毒症大鼠肝TLR4和MD-2基因的表达及丙泊酚对其的影响

目的观察早期脓毒症大鼠肝Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)基因的表达,并以丙泊酚进行干预,比较肝TLR4、MD-2基因表达的差异。方法采用大鼠尾静脉注射脂多糖复制脓毒症模型。按完全随机化原则分为正常对照组(N组)、脂多糖组(L组)、脂多糖+丙泊酚组(LP组),每组20只。每组再依照注药后1、2、4、8 h随机分为4个亚组,各亚组5只。分别于相应时间点处死动物,留取肝脏标本,取肝右叶制成肝组织匀浆液(-20℃保存备用)。用凝胶定量分析软件Gel-Pro analyzer 4.0检测RT-PCR扩增产物电泳条带的光密度值,分析计算基因相对表达值。结果 (1)N组大鼠肝组织可见少量TLR4、MD-2 mRNA表达;(2)L组注射脂多糖后1 h TLR4、MD-2 mRNA表达较N组明显升高(P<0.05),之后渐下降(P<0.05);(3)与L组比较,LP组各时间点肝TLR4、MD-2 mRNA表达明显降低(P<0.05),但高于N组水平(P<0.05);(4)各组组内比较,肝TLR4、MD-2 mRNA表达水平均于1 h最高,之后逐渐下降(P<0.05);(5)TLR4 mRNA与MD-2 mRNA表达呈正相关(r=0.461,P=0.041)。结论 (1)正常大鼠肝组织内可见少量TLR4、MD-2 mRNA表达,脂多糖可迅速上调肝组织中TLR4、MD-2基因的广泛表达,丙泊酚干预后TLR4、MD-2 mRNA表达明显下调,对脓毒症大鼠有明显的治疗作用;(2)肝组织中TLR4、MD-2基因的表达与早期脓毒症的发生、发展密切相关,两种基因的mR-NA表达呈显著正相关,动态监测TLR4、MD2 mRNA改变对脓毒症发病及治疗过程具有一定的意义。

抗感染免疫中CD14/TLR-MD-2复合体的信号转导作用

TOLL样受体(TOLL-likereceptor,TLR)是近年发现的一族天然受体,在机体内其主要成员可与MD-2蛋白及CD14结合形成CD14/TLR-MD-2复合体,特异性识别多种病原微生物,通过偶联信号转导途径,激活机体的免疫细胞,产生一系列的炎症反应,在抗感染免疫中发挥重要作用。

TLR2/TLR4-NF-κB信号通路在痛风中的研究进展

痛风是由于血尿酸浓度升高,尿酸钠晶体在关节、肌腱和周围组织中沉积,从而导致炎症性关节炎间歇性发作。Toll样受体是先天免疫系统中模式识别受体的一种。痛风性关节炎是由于过饱和的尿酸钠晶体在血液中析出,并与巨噬细胞产生作用,导致中性粒细胞的趋化、聚集,从而激活TLR2/TLR4-NF-κB信号通路,释放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子和蛋白酶,导致痛风性关节炎的发生、发展。该文以痛风及TLR2/TLR4-NF-κB信号通路为主线,综述了TLR2/TLR4-NF-κB信号通路与痛风的相关性以及以该信号通路为靶点的治疗方法。