款冬花多糖调控miR-889-3p/TLR4对IL-6诱导的乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的]探讨款冬花多糖对白细胞介素-6(IL-6)诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制。[方法] IL-6诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理。转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6处理;噻唑蓝(MTT)、平板克隆形成以及TranswellTM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-889-3p、Toll样受体4(TLR4)的表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TLR4蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4的靶向关系。[结果]款冬花多糖可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖(P<0.05)、迁移及侵袭能力(P<0.05),而提高miR-889-3p的表达(P<0.05),呈剂量依赖性;TLR4是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。[结论]款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

白藜芦醇对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用:基于抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路

目的探讨白藜芦醇(RES)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠肠道屏障的保护作用及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的分子机制。方法将52只小鼠随机分为对照组(n=12),MPTP组(n=14),RES低剂量(MPTP+RES30)组(n=13)及高剂量(MPTP+RES90)组(n=13)。利用30 mg/kg MPTP腹腔注射7 d诱导帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等剂量PBS,治疗组分别利用30 mg/kg和90 mg/kg RES干预3周。小鼠行为学测试分析RES对帕金森模型小鼠运动功能的影响。Western blotting检测RES在TLR4/MyD88/Nf-κB信号通路中发挥的作用。免疫组织化学、免疫荧光、酶联免疫吸附试验和透射电镜检测验证RES抑制炎症和保护肠屏障的作用。结果与对照组相比,MPTP组小鼠在运动功能、多巴胺能神经元数量、神经炎症、LPS和LBP水平以及肠屏障紧密连接蛋白表达水平等方面的差异具有统计学意义(P<0.05);RES治疗组与MPTP组相比,运动功能改善(P<0.01),神经元数量恢复,TH蛋白表达上调(P<0.05),GFAP、Iba-1和TLR4的表达下调,粪便、血浆中LPS、LBP水平下降(P<0.05),ZO-1、Claudin-1的表达恢复(P<0.01),结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。电镜检测结果显示,与MPTP组比较,MPTP+RES30组紧密连接复合体形态正常,肠绒毛排列整齐且紧密。结论RES通过抑制肠屏障TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应修复肠屏障,从而改善MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动功能障碍和神经病变,对多巴胺能神经元发挥保护作用。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭患者血清Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊辅助治疗老年CHF对患者Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用随机数表法将2021年3月至2023年3月平顶山市第一人民医院112例老年CHF患者分为采用沙库巴曲缬沙坦钠(诺欣妥)治疗的常规组(n=56例)和采用芪苈强心胶囊辅助治疗的联合组(n=56例)。观察两组疗效、心功能、血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Copeptin水平、Toll样受体(TLR4)、核因子-κ(NF-κB)水平及不良反应。结果:治疗3个月后,联合组的临床治疗总有效率、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)高于常规组(P<0.05);联合组TLR4、NF-κB、Gal-3、Copeptin水平低于常规组(P<0.05);两组患者用药期间不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠可调节TLR4、NF-κB水平,促进老年CHF患者心功能恢复,并抑制心肌重构,进而有效提高临床治疗疗效,且不增加患者不良反应发生风险。

恩替卡韦经治的慢性乙肝患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响

分析恩替卡韦经治的慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响。方法 按照纳排标准,将邯郸市传染病医院80例慢性乙型肝炎患者并纳入研究,收集时间为2023年01月-2023年12月,随机双盲分成对照组、观察组,均为40例,前组使用恩替,后组使用恩替卡韦加用聚乙二醇干扰素α-2a。观察两组患者的最终治疗成效。治疗成效评估指标为临床疗效,治疗前后肝功能、血清肝纤维化、CXCL13和TLR4表达指标。结果 HBV DNA转阴率进行组间比较,统计计算无差异(P>0.05);HBeAg转阴率、HBeAg血清转换率在组间进行比较,观察组均高于对照组;血清AST、ALT、LN、PCⅢ水平,CXCL13和TLR4表达指标在治疗后均表现出下降趋势,且观察组下降幅度较大(P0.05)。结论 药物联合治疗方式对慢性乙型肝炎患者临床效果良好,有利于疾病的转归,同时缓解肝功能受损情况,临床效果良好,且可调节CXCL13和TLR4的表达,利于免疫功能的改善。

当归芍药散基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对阿尔茨海默病模型大鼠神经炎症的影响研究

目的研究当归芍药散对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)模型大鼠神经炎症及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法SD大鼠大脑双侧侧脑室注射Aβ1-42构建AD动物模型。实验分为假手术组、模型组、当归芍药散组和阳性药物组。假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,当归芍药散组给予当归芍药散24 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性药物组给予米诺环素36 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,连续灌胃14 d。Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力。复制模型成功后取材,HE染色检测海马神经元组织病理形态学变化,免疫荧光法检测小胶质细胞和星形胶质细胞活化情况,实时荧光定量PCR(qPCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白的表达水平,免疫组化法检测NF-κB p65核转位的情况。结果与假手术组比较,AD大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.01),海马组织神经元形态受损,小胶质细胞和星形胶质细胞活化增加(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显上升,p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显增高(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散组和阳性对照组AD大鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01,P<0.05),大鼠海马组织神经元形态功能明显恢复,小胶质细胞和星形胶质细胞活化减少(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显降低(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显减少(P<0.01)。结论当归芍药散可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制神经炎症反应,发挥神经保护作用。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

双氢青蒿素抑制TLR4/NF-κB信号通路对高糖刺激的足细胞功能障碍的改善作用

目的探究双氢青蒿素通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞(HGPC)炎症、增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养HGPC细胞,将HGPC细胞分为对照组(5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)和不同浓度双氢青蒿素组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+5、10、20、40μmol·L^(-1)双氢青蒿素),筛选出合适的双氢青蒿素作用浓度;随后将细胞分为对照组、高糖组、双氢青蒿素组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素)、抑制剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+5μmol·L^(-1)NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082)、双氢青蒿素+抑制剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素+5μmol·L^(-1)BAY 11-7082)和双氢青蒿素+激活剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素+1μmol·L^(-1)NF-κB通路激活剂Prostratin),干预24 h。细胞计数试剂盒细胞8(CCK-8)法检测细胞活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β和IL-8的表达水平;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞的增殖能力;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果CCK-8法检测结果显示20μmol·L^(-1)双氢青蒿素对D-葡萄糖HGPC细胞活力恢复效果最好,因此选择20μmol·L^(-1)双氢青蒿素用于后续实验。与对照组比较,高糖组细胞增殖率和CyclinD1蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),炎症因子(IL-1β和IL-8)、迁移数、侵袭数、MMP-9、TLR4和磷酸化(p)-NF-κB p65蛋白相对表达量明显升高(P<0.05);双氢青蒿素组、抑制剂组、双氢青蒿素+抑制剂组及双氢青蒿素+激活剂组中双氢青蒿素和BAY11-7082明显抑制了D-葡萄糖对HGPC细胞的上述作用(P<0.05);与双氢青蒿素组比较,双氢青蒿素+抑制剂组中BAY11-7082增强了双氢青蒿素对D-葡萄糖诱导的HGPC细胞的作用(P<0.05),双氢青蒿素+激活剂组中Prostratin则削弱了双氢青蒿素对D-葡萄糖诱导的HGPC细胞的作用(P<0.05)。结论双氢青蒿素能抑制D-葡萄糖诱导的HGPC细胞迁移和侵袭,并促进其增殖,能有效改善D-葡萄糖刺激对HGPC细胞的炎症损伤,其作用机制可能与阻滞TLR4/NF-κB信号通路信号转导有关。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨槲皮素对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响

目的探究槲皮素介导Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响。方法饲养SD大鼠,二甲基肼构建直肠癌模型,用不同浓度的槲皮素(25、50、75 mg/kg)处理7 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理学变化,qRT-PCR和Western印迹检测TLR4、NF-κB p65的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;结果与NC组相比,Model组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达显著升高;结肠组织上皮细胞不规则,结构被破坏;TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著升高;G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多,细胞凋亡率明显减少(P<0.05);与Model组相比,槲皮素处理各组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α显著降低,组织病理结构稍微有所改善,TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达明显降低,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞明显减少,细胞凋亡率明显增多(P<0.05),以上病理指标随着槲皮素浓度的增大而改善。结论槲皮素可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,抑制直肠癌模型大鼠的炎症反应和应激反应。

基于TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝组织TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法将50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(216、144、072 g/kg),每组10只,高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预;另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组,普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后,取肝脏行HE染色观察组织病理变化,采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大,边缘变钝,呈黄色油腻感,镜下可见大小不等的脂肪空泡形成,证实模型制备成功;茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组,茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB、IL-β、FAS mRNA表达低于模型组(P<005)。结论茯砖茶可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路来达到预防NAFLD形成的作用。

miR-146调控TLR4/NF-κB通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的探究miR-146通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰(premature ovarian failure,,POF)的机制。方法野生小鼠实验:60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=30)和POF组(n=30)。POF组建立卵巢早衰模型,造模后15天qPCR检测2组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40只C57BL/6小鼠和20只miR-146敲除小鼠分为三组:对照组(n=20)、野生型POF组(n=20)和miR-146敲除POF组(n=20),野生型POF组和miR-146敲除POF组建立POF模型,建模后15天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平;Western blot检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)和TLR4信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果野生鼠实验表明与对照组相比,POF组小鼠卵泡中miR-146表达水平下调(0.51±0.14 vs 1.52±0.21),差异具有统计学意义(t=7.338,P<0.01);基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF组和miR-146敲除POF组原始卵泡(9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11)、初级卵泡(6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12)、次级卵泡(5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34)均降低,闭锁卵泡(10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64)升高,差异具有统计学意义(F=7.787,8.214,9.726,7.811,均P<0.01)。与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织TLR4(68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml),NF-κB(74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml),TNF-α(72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml)和IL-6(69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml)分泌显著升高,差异均有统计学意义(F=6.281,7.264,8.724,6.817,均P<0.01);与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织Bax蛋白表达水平降低(1.18±0.19.0.61±0.14 vs1.81±0.21),Bcl2蛋白表达升高(0.59±0.05,0.91±0.05 vs 0.58±0.02),TLR4(1.10±0.12,0.41±0.04 vs 1.13±0.11)和NF-κB(0.81±0.02,0.31±0.06 vs 0.87±0.27)降低,差异均有显著性统计学意义(F=7.235,6.714,7.612,7.737,均P<0.01)。结论miR-146具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。

SIRT1-TLR4信号通路在MPTP帕金森病小鼠模型炎症反应中的作用

目的探索SIRT1-TLR4信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)帕金森病(PD)小鼠模型炎症反应中的作用。方法选用MPTP处理C57BL/6小鼠构建帕金森病小鼠模型,将小鼠随机分为对照组(Con组)、模型组(MPTP组)、激活剂组(RV+MPTP组)、抑制剂组(EX527+RV+MPTP组)。腹腔注射MPTP建立帕金森病小鼠模型,并给予白藜芦醇(RV)灌胃、SIRT1特异性抑制剂EX527腹腔注射处理,通过爬杆实验、旷场实验评估小鼠行为学改变,利用免疫荧光、Western blot等检测酪氨酸羟化酶(TH)、SIRT1、TLR4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等相关蛋白表达。结果和Con组相比,MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显增加,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显减少(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显缩短,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显增加(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显增加,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显减少(P<0.05)。免疫荧光检测发现,和Con组相比,MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显减少,TLR4表达明显增加(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显增加,TLR4表达明显减少(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显降低,TLR4表达明显增加(P<0.05)。蛋白质印迹检测发现,和Con组相比,MPTP组小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显降低,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显升高,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显降低,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论SIRT1-TLR4信号通路可能参与PD神经炎症反应过程,可能在PD的发生、发展中有重要作用,可能参与了PD的疾病过程。

和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠炎症因子及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

【目的】观察和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只小鼠随机分为正常组,模型组,和厚朴酚低、中、高剂量组(剂量分别为96、192、384 mg·kg-1·d-1),每组10只。除正常组,其余各组小鼠通过气管滴注铜绿假单胞菌液建立肺炎模型。连续给药4周后,计算小鼠肺指数,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清白细胞介素6(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理损伤情况,实时定量聚合酶链反应(qRTPCR)法和Western Blot法分别检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达量。【结果】正常组小鼠肺组织未见明显异常改变;模型组小鼠肺组织可见严重的炎症细胞浸润、水肿、间质充血和肺泡壁增厚;和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺组织病理损伤得到不同程度的减轻。与正常组比较,模型组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),表现为和厚朴酚高剂量组<和厚朴酚中剂量组<和厚朴酚低剂量组。【结论】和厚朴酚可减轻铜绿假单胞菌肺炎小鼠肺组织损伤,降低炎症反应,其可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥作用。

白藜芦醇调控TLR4/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响

目的探讨白藜芦醇调控Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响。方法选取50只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组。观察大鼠结肠组织病理学变化;观察大鼠结肠黏膜大体评分和病理组织学;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-10表达;采用Western印迹和PCR检测大鼠结肠组织TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及基因表达,并利用分子对接技术对白藜芦醇与TLR4/NF-κB信号通路的结合进行验证。结果与空白组相比,模型组病理评分、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较高,IL-10水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇各剂量组TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较低,IL-10水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);分子对接验证白藜芦醇与TLR4、NF-κB分子的结合能分别为-6.37、-5.31。结论白藜芦醇可以减轻溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应,其机制可能是通过调控TLR4/NF-κB信号通路实现的。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用

目的 观察紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用,并基于Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)/髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 60只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,除正常组外均采用气管内滴注脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)的方法建立慢性支气管炎模型。醋酸地塞米松组给予0.075 mg·kg-1醋酸地塞米松灌胃,每天1次;紫菀散低、中、高剂量组分别给予1.5、3.0、6.0 g·kg-1紫菀散灌胃,每天1次;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,采用细胞计数板法计数BALF中白细胞数量,采用HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理改变,采用免疫组化法检测肺组织TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均升高(P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),肺组织呈病理改变且气道杯状细胞增生评分升高(P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,醋酸地塞米松组及紫菀散各剂量组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05或P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均降低(P<0.01),肺组织病理改变均减轻,气道杯状细胞增生评分均降低(P<0.05或P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);与醋酸地塞米松组比较,紫菀散中、高剂量组TGF-β1水平均降低(P<0.05或P<0.01),紫菀散低剂量组白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散中剂量组中性粒细胞数量、嗜酸性粒细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散高剂量组淋巴细胞数量减少(P<0.01),紫菀散低、中剂量组肺组织病理改变均加重,紫菀散低剂量组气道杯状细胞增生评分升高(P<0.05),紫菀散低剂量组TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。结论 紫菀散可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥抗慢性支气管炎气道炎症的作用。

基于TLR4/TAK1/NF-κB途径探讨MCAO大鼠缺血局部脑皮质微血管新生的内在机制

目的 探讨Toll样受体4/转化生长因子(TGF)-β激活激酶1/核因子(TLR4/TAK1/NF)-κB途径对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠缺血局部脑皮质微血管新生的内在机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、阴性病毒(NC)组和siRNA-TLR4转染(siRNA-TLR4)组各10只,除Sham组外,其余各组均采用线栓法建立MCAO大鼠模型,造模后1h假手术组与模型组均给予尾静脉注射等量生理盐水,阴性病毒组给予尾静脉注射阴性对照病毒,siRNA-TLR4转染组给予尾静脉注射siRNA-TLR4腺病毒。苏木精-伊红(HE)染色观察缺血局部脑皮质病理变化;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积;末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠缺血局部脑皮质细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测微血管内皮细胞数目;免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、Ang-1、促血管生成素(Ang)-2表达水平;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测TLR4、转化生长因子(TGF)-β、TAK1、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western印迹检测TLR4、TAK1和NF-κB p65蛋白表达。结果 沉默TLR4表达可改善脑组织损伤程度,明显降低脑梗死面积和脑皮质细胞凋亡率(P<0.01,P<0.05),明显促进脑皮质微血管内皮细胞(BMECs)增殖(P<0.05),明显上调血管新生相关因子VEGF、Ang-1和Ang-2表达(P<0.05),明显下调TLR4、TAK1、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 TLR4/TAK1/NF-κB途径通过增加缺血局部脑皮质新生血管形成,从而改善脑缺血对脑组织的损伤。

丹参有效成份配伍对ApoE^(-/-)小鼠心脏的保护作用及TLR4/NF-κB通路的影响

目的研究丹参4种主要的水溶性成分丹参素(DSS)、丹酚酸(Sal)-A、Sal-B和原儿茶醛(PAL)的有效配伍组合(SABP)对ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠心脏的保护作用及其机制。方法6周龄雄性的ApoE^(-/-)小鼠被随机分为:模型(Model)组、SABP组、阳性药瑞舒伐他汀(RC)组。雄性的C57BL/6J小鼠作为正常对照(Control)组。所有的小鼠正常饮食。RC组每天腹腔注射0.4 mg/kg的RC,SABP组每天腹腔注射丹参4种水溶性成分的有效组合(DSS:5 mg/kg,Sal-A:0.233 mg/kg,Sal-B:10.000 mg/kg,PAL:17.000 mg/kg)。Control组和Model组每天腹腔注射等剂量的生理盐水。8 w后,通过全自动生化分析仪检测血清脂类水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心脏的形态学变化。免疫组化和Western印迹检测心脏组织中Toll样受体(TLR)4、转化生长因子β激活激酶(TAK)1、核转录因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达的变化。结果SABP可以有效地降低血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,改善心脏损伤,减少心脏中TLR4、TAK1、IL-6和TNF-α蛋白表达,抑制NF-κB的磷酸化。结论SABP对ApoE^(-/-)小鼠心脏具有保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。