TLR7和TLR8在家畜性控技术中的研究进展

哺乳动物性别控制(sex control)技术在畜牧生产中有着重要的意义,在畜牧生产实践中,通过性别控制技术人类可以获得预想性别的优秀家畜后代,从而使家畜的泌乳性能、繁殖性能和生产性能发挥到最大。目前,传统的哺乳动物性别控制技术主要分为两类:受精前X/Y精子分离技术和受精后早期胚胎性别鉴定。这些方法都有各自的特点和局限性,如处理时间长、分离效率低、对精子活力和胚胎发育有损伤等,因此,这些技术有待进一步优化和完善。本文总结并分析了哺乳动物的传统性控技术,简述其各自特点及存在的问题。此外,利用激活Toll样受体7和Toll样受体8分离X/Y精子的新技术引起了广泛关注,与传统方法相比,该方法无需添加外源药物,具有高效、快速、无毒副作用等优点。尽管该技术已经成功应用于小鼠、羊、牛等动物的性别控制中,但在大规模应用上仍有一些问题需要进一步解决。本文总结了该技术的研究进展,分析了目前将该方法应用于实际生产中的可行性,并对该技术未来的发展趋势进行展望。

TLR7基因多态性与儿童手足口病易感性及严重程度的关系

目的探讨Toll样受体7(TLR7)基因多态性与儿童手足口病(HFMD)易感性及严重程度的关系。方法选取304例肠道病毒71型(EV71)感染HFMD患儿纳入HFMD组,根据病情严重程度分为轻症组和重症组;另同期选择300例正常健康儿童纳入对照组。比较各组TLR7基因rs3853839、rs179016、rs179009位点基因型和基因频率。Logistic回归分析基因多态性是否HFMD发生的危险因素,比较与否携带C基因患儿的外周血单个核细胞TLR7 mRNA表达水平。结果HFMD组、重症组女童、男童TLR7基因rs3853839位点、rs179016位点C基因型及基因频率分别高于对照组、轻症组(P<0.05)。TLR7基因rs3853839位点、rs179016位点携带C基因是儿童HFMD发生和重症的危险因素(P<0.05)。HFMD轻症和重症患儿rs3853839位点、rs179016位点携带C基因者外周血单个核细胞TLR7 mRNA表达水平均低于未携带C基因者(P<0.05)。结论TLR7基因rs3853839位点、rs179016位点携带C基因是儿童HFMD发生的独立危险因素,且与其严重性相关。

双峰驼TLR7的原核表达及其多克隆抗体制备

Toll样受体7(TLR7)可介导机体抗病毒等免疫应答,是重要的胞内模式识别受体之一。为获取双峰驼TLR7多克隆抗体,从双峰驼TLR7序列(GenBank Accession:XM_010966214.1)选取编码区,经过跨膜结构与信号肽分析,取膜外序列构建重组质粒pET-28a-TLR7,并转化进感受态细胞BL21(DE3)中,对IPTG诱导表达的蛋白进行纯化及SDS-PAGE鉴定,将纯化蛋白免疫家兔,制备兔抗双峰驼重组TLR7多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western blot检测分析。结果:诱导表达的重组双峰驼TLR7约为47 kDa,与预期大小一致,IPTG最佳诱导浓度为0.3 mol/L,最佳诱导时间为6 h,以包涵体形式表达;间接ELISA检测显示,制备的兔抗重组双峰驼TLR7多克隆抗体效价为1∶32 000,经Western blot鉴定可知抗体特异性良好;在成年双峰驼的空肠淋巴结中检测验证TLR7,根据SABC免疫组化试验得到该抗体的最佳工作浓度为1∶800,并通过光学显微镜观察到TLR7在淋巴结的副皮质区的树突状细胞中表达,证明本试验已制备出高效价和特异性较好的兔抗重组双峰驼TLR7的多克隆抗体。重组双峰驼TLR7的成功表达及其多克隆抗体的制备,为进一步研究双峰驼体液免疫及抗感染治疗奠定了基础。

S100A9激活NF-кB促进小胶质细胞TLR7表达和炎症因子释放

目的:S100钙结合蛋白A9(S100A9)激活核因子κB(NF-κB)促进小胶质细胞toll样受体7(TLR7)的表达和炎症因子释放的作用及其机制研究。方法:CCK-8实验检测BV2小胶质细胞的增殖率;转录组测序并结合GO分析、KEGG富集分析和STRING数据库对差异基因(DEGs)进行比对并从差异表达基因中筛选出目标基因;Real time RT-PCR验证TLR7的表达;免疫荧光染色检测CD68、CD206的表达;Western Blot检测CD68、CD206、TLR7、p65、p-p65的表达;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:中等浓度的S100A9对小胶质细胞无增殖抑制效应;实验组CD68蛋白的表达水平较对照组明显增加,而CD206蛋白的表达水平明显下降,提示S100A9促进BV2小胶质细胞向促炎型激活;Toll样受体4(TLR4)的抑制剂TAK-242明显抑制S100A9刺激BV2小胶质细胞后TNF-α和IL-6的表达水平;TLR4/NF-κB通路激活促进TLR7蛋白表达。结论:中等浓度的S100A9可以促进小胶质细胞向促炎型极化,通过激活TLR4/NF-κB通路促进TLR7表达和包括TNF-α和IL-6在内的多种炎症因子的释放,S100A9具有明显的促炎作用。

红嘴鸥TLR7蛋白多克隆抗体制备及在DF-1细胞中的表达特征分析

【目的】制备红嘴鸥Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)蛋白多克隆抗体,分析红嘴鸥TLR7蛋白在DF-1细胞中的表达特征,为深入了解红嘴鸥TLR7蛋白功能及作用机制提供材料。【方法】设计引物扩增红嘴鸥TLR 7基因CDS区,并构建其原核表达载体与真核表达载体。将重组原核表达质粒pET32a-TLR7转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞进行重组蛋白体外诱导表达,并对其诱导温度、诱导时间和IPTG浓度进行优化筛选。选用新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测血清抗体价效,利用Western blotting鉴定抗体特异性。将真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7转染至DF-1细胞中过表达,利用间接免疫荧光技术检测红嘴鸥TLR7蛋白在转染DF-1细胞后不同时间点的表达特征。【结果】红嘴鸥TLR 7基因CDS区长约1182 bp,双酶切结果显示出2组大小不同的2条片段,分别为5900、1182 bp(原核表达载体)和5428和1182 bp(真核表达载体),测序后表明原核表达载体与真核表达载体构建成功。体外诱导温度为30℃、IPTG终浓度为1.0 mmol/L时培养5 h得到以包涵体形式大量表达的重组蛋白,蛋白大小为63 ku。间接ELISA法检测抗血清效价为1∶256000以上。Western blotting检测结果表明,制备的多克隆抗体具有较好的特异性。间接免疫荧光结果显示,转染DF-1细胞2 h后即可观察到绿色荧光,随着时间增加绿色荧光密度逐渐增加,且绿色荧光大部分聚集在细胞核及周围,少部分散布在细胞质中。【结论】原核表达的红嘴鸥TLR7蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,TLR7蛋白可在DF-1细胞中成功表达。

内质网驻留蛋白UNC93B1及TLR7在系统性红斑狼疮发病中的作用及治疗进展

多通道跨膜蛋白UNC93B1是一种内质网驻留蛋白,能将TLR3、TLR7、TLR8、TLR9和TLR13从内质网运输到它们的最终细胞位置,它们识别核酸并定位于内体。UNC93B1中的错义突变破坏了内体中TLR水平的平衡,可导致自身免疫。系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病,可以影响皮肤、心脏及肾脏等多脏器,导致严重的器官并发症甚至死亡。本文对胞内UNC93B1与TLR7在系统性红斑狼疮中作用及相关治疗进行综述,可能为SLE及其它自身免疫性疾病提供新的治疗途径。

DF-1细胞中TLR7编码基因的敲除及其抗FAdV-4感染的天然免疫应答

旨在构建高质量的禽源细胞系,应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除,构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系。采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效应分子进行检测,选择转录水平显著上调的基因TLR7作为研究对象;构建sgRNA载体与Cas9表达载体共转染DF-1细胞,经绿色荧光蛋白(GFP)阳性特征分选单克隆,PCR验证及增毒试验筛选后获得TLR7编码序列敲除的DF-1-TLR7-KO#3单克隆细胞系,命名为DF-1-TLR7-KO细胞。对敲除前后DF-1细胞的天然免疫系统对FAdV-4感染的拮抗效应和病毒在不同细胞中增殖效率的差异进行了研究。结果表明:成功构建的TLR7编码序列敲除的DF-1细胞系,与原始细胞相比病毒增殖能力提高。试验对细胞的天然免疫系统与FAdV-4感染的互作机理进行了初步探索,为更好地研究宿主对病毒入侵的应答机制,提高疫苗生产效能提供了研究基础和生物材料储备。

TLR7基因rs3853839、rs179010多态性与EV71手足口病男性患儿易感性及病情严重程度相关

目的探讨Toll样受体7/髓样分化因子88(TLR7/My D88)信号通路基因多态性与肠道病毒71型(EV71)手足口病(HFMD)易感性及重症化的关联性。方法收集在西安交通大学第二附属医院和西安市儿童医院感染科收治的EV71 HFMD标本180例和健康对照标本201例。采用SNPscan多重SNP分型方法对381个样本的TLR7基因rs3853839、rs179010和My D88基因rs7744位点进行基因分型检测。结果男性患儿中TLR7基因rs3853839 C等位基因的易感性(OR=2.343,95%CI:1.516~3.621)与重症化(OR=1.939,95%CI:1.064~3.521)风险升高。男性患儿中TLR7rs179010 T等位基因的易感性(OR=1.701,95%CI:1.142~2.535)与重症化(OR=1.852,95%CI:1.038~3.305)风险升高。女性患儿中TLR7基因rs3853839、rs179010等位基因分布在病例组与对照组无明显差异。My D88基因rs7744多态性与EV71 HFMD易感性及病情轻重程度无明显关联性。结论 TLR7基因rs3853839、rs179010多态性与EV71 HFMD男性患儿易感性及病情严重程度相关。

传染性腔上囊炎疫苗免疫鸡TLR7基因表达的动态变化

给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎(IBD)弱毒疫苗(法贝灵,IBD-Blen)1和3头份后,于不同时间采集脾和腔上囊组织,分离纯化淋巴细胞,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测两种组织中鸡Toll样受体7(ChTLR7)基因的表达动态。结果显示,接种IBD弱毒疫苗前,试验鸡脾和腔上囊组织中均有ChTLR7的微量表达,疫苗接种后第7 h,脾中ChTLR7 mRNA的表达开始显著上调,至接种后第12 h达峰值,此后迅速下降,至第130 h时降至疫苗接种前的水平;而腔上囊组织中ChTLR7 mRNA的表达自接种后第12 h开始增加,第24 h时达峰值,随后迅速下降,约72 h后恢复至疫苗接种前水平。表明ChTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程。

细菌脂多糖诱导小鼠DC2.4细胞TLR7蛋白的表达

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4TLR7蛋白表达的诱导作用。方法:用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达。结果:LPS刺激前后,细胞中均有TLR7 mRNA转录。LPS刺激前,细胞较小而透亮,树突较少,无TLR7蛋白表达;LPS刺激后,细胞体积增大,树突增粗增多,刺激后12h、24h、48h,TLR7蛋白均有表达,且在3个时间点的表达量基本一致。结论:LPS可诱导DC2.4中TLR7蛋白的表达。

TLR7、MyD88在皮肤肿瘤及癌前病变中的表达及意义

目的研究Toll样受体7(Toll-like receptor-7,TLR7)及髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)在光化性角化病(actinic keratosis,AK)、Bowen病(Bowen disease,BD)、皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,SCC)组织中的表达及意义。方法免疫组化法检测22例AK、20例BD、23例SCC及15例正常皮肤组织中TLR7、MyD88的表达情况。结果 TLR7表达在细胞质中,其在SCC、BD、AK组及正常皮肤组中的阳性表达量用积分光密度值(integrated option density,IOD)计算,表达量分别为195.68±3.30、37.93±1.91、26.12±1.68、5.05±0.62,各组之间均有差异(P<0.01)。MyD88表达在细胞质中,在SCC、BD、AK、正常皮肤中的IOD值分别为146.70±3.65、55.36±6.65、8.65±1.14、3.03±0.83,组间比较有差异性(P<0.01),且TLR7及MyD88的表达呈正相关(r=0.973,P<0.01)。结论 TLR7及MyD88表达增高可能在上述3种疾病的发生发展中起一定的作用,且两者可能有协同作用。

TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究

目的将TLR7激活基序ssRNA加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssRNA,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬率;无菌TritonX-100裂解细胞,罗氏培养基培养计数活细菌;电镜观察细胞内自噬小体;ELISA检测细胞上清中IL-12、TNF-α与IL-4的含量。结果感染3h后RAW264.7细胞吞噬率最高(P>0.05);处理3h后电镜观察,ssRNA组细胞状态明显好于对照组;36h后ssRNA组IL-12(P<0.05)、IL-4(P<0.05)水平高于对照组,细胞内活菌数量ssRNA组低于对照组(P<0.05),48h后IL-4(P<0.05)水平下降,TNF-α的含量上升(P<0.05)。结论TLR7能通过诱导细胞自噬、调节细胞因子产生等机制增强细胞杀结核分枝杆菌的能力,TLR7激活基序ssRNA可以用于治疗结核分枝杆菌感染。

红嘴鸥TLR7基因克隆与生物信息学分析

【目的】克隆野生鸟类红嘴鸥Toll样受体7(TLR7)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,为后期TLR7蛋白的抗病毒活性研究做准备。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增红嘴鸥TLR7基因全序列,通过生物信息学软件分析TLR7基因序列、稀有密码子、相似性及其编码蛋白的理化性质、跨膜区域、信号肽、N-糖基化位点、磷酸化位点和亚细胞定位,分别利用SOPMA和SWISS-MODEL软件预测TLR7蛋白的二级结构和三级结构。【结果】试验成功克隆红嘴鸥TLR7基因(GenBank登录号:MZ668652),全长1720 bp,开放阅读框(ORF)大小为1182 bp,存在39个稀有密码子,其中含8个连续稀有密码子,编码393个氨基酸;红嘴鸥TLR7基因与GenBank中原鸡、红腹角雉、鹌鹑、绿头鸭、黑天鹅、山雀、白鹭、帝企鹅、红喉潜鸟和巴布亚企鹅的TLR7基因相似性分别为85.7%、84.9%、85.4%、87.0%、87.8%、86.8%、91.0%、93.1%、93.1%和93.1%。系统进化树结果显示,其与白鹭的亲缘关系最近。TLR7蛋白分子式为C_(2080)H_(3256)N_(556)O_(567)S_(19),分子质量约为63 ku,理论等电点为9.25;该蛋白不存在跨膜结构和信号肽,含有6个N-糖基化位点和33个磷酸化位点,是疏水性蛋白,主要存在于细胞质中;TLR7蛋白二级结构主要以α-螺旋为主,约占48.09%,其次为无规则卷曲(32.06%)、延伸链(13.23%)和β-转角(6.62%),TLR7蛋白的三级结构与二级结构一致,且与模型蛋白人TLR7蛋白相似性为68.78%。【结论】红嘴鸥TLR7基因与白鹭进化关系较近,含有8个连续稀有密码子,体外表达较难,研究为进一步探索红嘴鸥TLR7蛋白抗病毒免疫机制提供重要参考。

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR7 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织中Toll样受体7(TLR7)mRNA、蛋白表达的影响。方法将BALB/c小鼠分为RSV感染后72 h组和144 h组两大实验组,每大组分为正常组、RSV感染模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组、金欣等效剂量组,每组15只小鼠。72 h组RSV滴鼻3 d、灌胃3 d,144 h组RSV滴鼻3 d、灌胃5 d,末次灌胃24 h后采集肺组织,Realtime PCR检测肺组织中TLR7 mRNA表达水平,Western Blot法检测肺组织TLR7蛋白表达水平。结果 RSV感染后72 h组内,与RSV模型组相比,金欣高剂量组、等效剂量组能下调肺组织TLR7 mRNA的表达及蛋白表达(P<0.01、P<0.05);RSV感染后144 h组,TLR7 mRNA及蛋白的表达均较72 h同法处理组下降,但各组间TLR7 mRNA及蛋白的表达无差异。结论 RSV感染BALB/c小鼠72 h后,金欣口服液能下调肺组织中TLR7 mRNA及TLR7蛋白的表达;感染晚期(144 h后),金欣口服液下调TLR7表达,使之趋向正常。

TLR7/8激动剂及其在肿瘤免疫治疗中的研究进展

0引言TLRs在固有免疫系统中是宿主对抗入侵病原体的第一道屏障。TLRs不但在免疫细胞上有表达,近年来发现,其在肿瘤细胞上也有不同组合的表达。肿瘤细胞上表达的TLRs对肿瘤的发展起着十分重要的作用。

CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用

目的探讨TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用。方法体外实验采用ELISA法检测CpG-c41对TLR7激动剂ssRNA83刺激RAW264.7细胞24 h诱发的炎症介质TNF-α和IL-6表达的影响,Western blot检测CpG-c41对TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα蛋白表达的影响;体内实验采用ELISA法检测CpG-c41对ssRNA83攻击BALB/c小鼠2 h诱发血清中TNF-α和IL-6表达的影响作用。结果体内、体外实验均表明,CpG-c41分子能够显著抑制经ssRNA83刺激诱发TLR7-MyD88依赖型信号通路介导的炎症介质TNF-α和IL-6的释放(P<0.01),体外实验表明抑制作用具有量效关系;而Western blot检测显示在CpG-c41作用下,TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的降解受干扰。结论 TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子通过干扰TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的磷酸化降解,抑制炎症介质的释放,发挥对ssRNA攻击小鼠的免疫保护作用。

TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖

目的探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响。方法使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响;Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平的影响。结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加。结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖。

TLR7激活对HepG2.2.15细胞株炎症因子TNF-α和IL-6表达的上调作用

目的比较乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组稳定转染细胞株HepG2.2.15和肝癌细胞株HepG2中TLR7表达,分析HepG2.2.15细胞中TLR7激活后诱导炎症因子表达。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR分析HepG2和HepG2.2.15中TLR7受体、IL-6和TNF-αmRNA水平表达。TLR7配体Gardiquimod刺激20min后,Western blot分析激活的信号通路;刺激6h,Real-timePCR分析TLR7激活后IL-6和TNF-αmRNA水平表达变化;刺激48h,ELISA法分析IL-6和TNF-α蛋白质水平表达变化。结果HepG2.2.15细胞株中TLR7mRNA水平表达比HepG2中的表达高约30倍(P<0.01)。在没有任何刺激的条件下,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA水平表达比HepG2中的表达分别高约7.5和9.3倍;Gardiquimod刺激6h后,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显升高,并具有剂量依赖关系(P<0.01),而HepG2细胞在相同的刺激下IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高并不明显(P<0.05);刺激48h后,IL-6和TNF-α蛋白质表达水平变化与其mRNA水平变化一致(P<0.01)。HepG2.2.15细胞株经Gardiquimod刺激后NF-κBp65亚单位进入细胞核中量显著增加。结论TLR7激活后能够上调HepG2.2.15细胞中IL-6和TNF-α的表达,提示TLR7可能在乙型病毒性肝炎的病理生理过程中发挥作用。

TLR7激动剂Imiquimod减弱转染IL-10的小鼠髓样树突状细胞的负向调节功能

目的 :观察Toll样受体7(Toll like receptor 7,TLR7)激动剂Imiquimod对白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)转染小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone-marrow derived dendritic cell,mDC)免疫功能影响。方法:转染IL-10至小鼠m DC,TLR7激动剂Imiquimod刺激48 h,利用流式细胞仪检测DC表面标志MHCⅡ、CD80、CD86及Fas L等分子的表达;ELISA检测细胞产生IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果 :IL-10抑制m DC表达MHCⅡ、CD80、CD86分子,降低其分泌IL-6、TNF-α,促进其表达Fas L,而TLR7激动剂刺激增加了IL-10转染m DC表达MHCⅡ、CD80、CD86分子,促进其产生IL-6、TNF-α,抑制Fas L表达。结论:TLR7激动剂可逆转IL-10诱发的DC免疫应答低下。

接种鸡IBD弱毒疫苗后鸡脾脏TLR7基因表达的动态变化

给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎（IBD）弱毒疫苗（法贝灵，IBD-Blen）1头份和3头份后，于不同时间采集脾脏组织分离纯化淋巴细胞，用常规法抽提总RNA，以鸡B-aetin基因为内参，采用半定量RT-PCR法检测脾脏组织中鸡Toll样受体7（chTLR7）基因的表达动态。结果表明：接种IBD弱毒疫苗前，试验鸡脾组织中chTLR7有微量表达；疫苗接种后，脾脏中chTLR7mRNA的表达开始显著上升；接种后12小时达峰值，此后迅速下降；130小时降至疫苗接种前的基础水平。说明chTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程。