脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

当归芍药散基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对阿尔茨海默病模型大鼠神经炎症的影响研究

目的研究当归芍药散对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)模型大鼠神经炎症及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法SD大鼠大脑双侧侧脑室注射Aβ1-42构建AD动物模型。实验分为假手术组、模型组、当归芍药散组和阳性药物组。假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,当归芍药散组给予当归芍药散24 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性药物组给予米诺环素36 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,连续灌胃14 d。Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力。复制模型成功后取材,HE染色检测海马神经元组织病理形态学变化,免疫荧光法检测小胶质细胞和星形胶质细胞活化情况,实时荧光定量PCR(qPCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白的表达水平,免疫组化法检测NF-κB p65核转位的情况。结果与假手术组比较,AD大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.01),海马组织神经元形态受损,小胶质细胞和星形胶质细胞活化增加(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显上升,p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显增高(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散组和阳性对照组AD大鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01,P<0.05),大鼠海马组织神经元形态功能明显恢复,小胶质细胞和星形胶质细胞活化减少(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显降低(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显减少(P<0.01)。结论当归芍药散可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制神经炎症反应,发挥神经保护作用。

黄芩苷通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛大鼠神经炎症

目的探讨黄芩苷通过抑制Toll样受体(TLR)2/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠神经炎症的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量(30 mg/kg)组、黄芩苷高剂量(60 mg/kg)组、黄芩苷高剂量+空载质粒组、黄芩苷高剂量+TLR2过表达组,每组10只,模型组和给药组通过腹腔注射树脂毒素(RTX)诱导建立PHN模型,对照组腹腔注射等剂量含10%Tween 80及10%乙醇的生理盐水,采用黄芩苷和质粒分组处理大鼠后,检测大鼠疼痛症状,比较自发缩足反射次数、缩爪阈值、热敏潜伏期;采用TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;采用免疫组织化学染色检测各组脊髓组织炎性细胞浸润,比较脊髓组织淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1阳性细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织及血清炎症因子前列腺素(PGE)2、白细胞介素(IL)-18、环氧化酶(COX)-2水平;采用免疫印迹法检测各组脊髓组织TLR2/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组、黄芩苷高剂量+空载质粒组缩爪阈值均显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著降低(均P<0.05);黄芩苷高剂量组缩爪阈值相比黄芩苷低剂量组显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(均P<0.05)。与黄芩苷高剂量组比较,黄芩苷高剂量+空载质粒组各指标无明显变化(P>0.05);黄芩苷高剂量+TLR2过表达组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。结论黄芩苷可通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路从而降低炎症因子产生释放,进而阻止PHN大鼠神经炎症,抑制脊髓神经细胞凋亡及炎性细胞浸润,最终改善大鼠长时程自发痛、机械性痛觉超敏反应与热痛觉减退症状。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用

目的 观察紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用,并基于Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)/髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 60只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,除正常组外均采用气管内滴注脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)的方法建立慢性支气管炎模型。醋酸地塞米松组给予0.075 mg·kg-1醋酸地塞米松灌胃,每天1次;紫菀散低、中、高剂量组分别给予1.5、3.0、6.0 g·kg-1紫菀散灌胃,每天1次;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,采用细胞计数板法计数BALF中白细胞数量,采用HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理改变,采用免疫组化法检测肺组织TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均升高(P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),肺组织呈病理改变且气道杯状细胞增生评分升高(P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,醋酸地塞米松组及紫菀散各剂量组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05或P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均降低(P<0.01),肺组织病理改变均减轻,气道杯状细胞增生评分均降低(P<0.05或P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);与醋酸地塞米松组比较,紫菀散中、高剂量组TGF-β1水平均降低(P<0.05或P<0.01),紫菀散低剂量组白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散中剂量组中性粒细胞数量、嗜酸性粒细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散高剂量组淋巴细胞数量减少(P<0.01),紫菀散低、中剂量组肺组织病理改变均加重,紫菀散低剂量组气道杯状细胞增生评分升高(P<0.05),紫菀散低剂量组TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。结论 紫菀散可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥抗慢性支气管炎气道炎症的作用。

木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的观察木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响,阐明木犀草素对心力衰竭的可能作用机制。方法将51只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(S组)、心力衰竭组(H组)和木犀草素治疗组(L组),各17只大鼠。采用开胸手术建立心力衰竭动物模型,L组大鼠给予50 mg/(kg·d)木犀草素(体积3 mL)灌胃。心脏超声测定左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)。苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织形态学变化;Masson染色观察心肌组织胶原形成情况。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清脑钠肽(BNP)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蛋白免疫印迹法测定心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与S组比较,H组LVEF、FS降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV增加(P<0.05);与H组比较,L组LVEF、FS升高(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV降低(P<0.05)。HE染色:S组大鼠心肌组织正常;H组大鼠心肌坏死和炎症浸润严重;L组大鼠心肌坏死和炎症浸润明显减轻。Masson染色:与S组比较,H组胶原面积比增加(P<0.05);与H组比较,L组胶原面积比降低(P<0.05)。与S组比较,H组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平升高(P<0.05);与H组比较,L组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论木犀草素可抑制心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,发挥对心力衰竭的保护作用。

基于TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝组织TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法将50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(216、144、072 g/kg),每组10只,高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预;另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组,普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后,取肝脏行HE染色观察组织病理变化,采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大,边缘变钝,呈黄色油腻感,镜下可见大小不等的脂肪空泡形成,证实模型制备成功;茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组,茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB、IL-β、FAS mRNA表达低于模型组(P<005)。结论茯砖茶可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路来达到预防NAFLD形成的作用。

和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠炎症因子及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

【目的】观察和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只小鼠随机分为正常组,模型组,和厚朴酚低、中、高剂量组(剂量分别为96、192、384 mg·kg-1·d-1),每组10只。除正常组,其余各组小鼠通过气管滴注铜绿假单胞菌液建立肺炎模型。连续给药4周后,计算小鼠肺指数,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清白细胞介素6(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理损伤情况,实时定量聚合酶链反应(qRTPCR)法和Western Blot法分别检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达量。【结果】正常组小鼠肺组织未见明显异常改变;模型组小鼠肺组织可见严重的炎症细胞浸润、水肿、间质充血和肺泡壁增厚;和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺组织病理损伤得到不同程度的减轻。与正常组比较,模型组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),表现为和厚朴酚高剂量组<和厚朴酚中剂量组<和厚朴酚低剂量组。【结论】和厚朴酚可减轻铜绿假单胞菌肺炎小鼠肺组织损伤,降低炎症反应,其可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥作用。

干扰素-γ水平影响系统性红斑狼疮小鼠体TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的初步研究

目的探究干扰素-γ(IFN-γ)水平对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠体内Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子κB亚基p65(TLR9/MyD88/NF-κB p65)信号通路的影响。方法将30只SLE MRL/lpr小鼠随机分为模型组、空质粒组和IFN-γsiRNA组,空质粒组和IFN-γsiRNA组采用活体电转染技术分别转入空质粒、IFN-γsiRNA质粒,并鉴定转染后SLE小鼠外周血IFN-γ的表达;另取10只C57BL/6小鼠作为正常组,ELISA检测IL-6、TNF-α和自身抗体[抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗组蛋白抗体(IgM)]水平,观察各组小鼠肾组织病理变化及肾功能情况[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)],Western blot检测肾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白表达。结果与正常组比较,模型组血清IFN-γ、IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,IFN-γsiRNA组IFN-γ、IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P<0.05);但空质粒组与模型组上述指标的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染IFN-γsiRNA质粒后,可减轻SLE小鼠炎症反应与肾损伤,可能与抑制TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路有关。

食源性晚期糖基化终末产物上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对小鼠非酒精性脂肪肝炎症反应的影响

目的观察食源性晚期糖基化终末产物(AGEs)对Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路及肝脏炎症的影响,探讨其致非酒精性脂肪肝(NAFL)的作用机制。方法选取60只小鼠随机分为空白对照组、外源性晚期糖基化终末产物(AGEs)组、食源性AGEs组和阳性对照组,每组15只。空白对照组喂养普通饲料,外源性AGEs组喂养外源性AGEs饲料,食源性AGEs组喂养食源性AGEs饲料,阳性对照组喂养高脂饲料,连续喂养12 w。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4组饲料AGEs含量,用全自动生化分析仪检测小鼠血脂及肝功能指标表达水平,用苏木素-伊红(HE)染色和油红染色观察各组肝脏病理形态,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-2、IL-6含量,Western印迹检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果与空白对照组和阳性对照组比较,外源性AGEs组和食源性AGEs组饲料AGEs含量均升高,且外源性AGEs组高于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。HE染色显示,空白对照组肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐,未见脂肪变性,食源性AGEs组可见少量细小的脂肪滴空泡,外源性AGEs组和阳性对照组可见脂肪滴空泡,阳性对照组更为明显。油红染色显示,与空白对照组比较,外源性AGEs组、食源性AGEs组和阳性对照组脂滴显著增加,阳性对照组更明显。血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷草转氨酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)表达水平在空白对照组、食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组中均依次升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表达水平降低,外源性AGEs组和阳性对照组低于食源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组比较,外源性AGES组、食源性AGES组和阳性对照组血清TNF-α、IL-2及IL-6表达水平均升高,外源性AGEs组和阳性对照组高于食源性AGEs组,阳性对照组高于外源性AGEs组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western印迹检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组显著,且阳性对照组高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测肝组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平显示,食源性AGEs组、外源性AGEs组和阳性对照组较空白对照组升高,差异具有统计学意义(均P<0.05),阳性对照组MyD88 mRNA表达水平高于食源性AGEs组和外源性AGEs组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论食源性AGEs促进小鼠炎症反应,加重小鼠肝脏脂肪变性,其可能作用机制与上调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达相关。

葛花总黄酮通过TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻糖氧剥夺对人脑血管内皮细胞损伤的机制

目的 探讨葛花总黄酮(TFG)通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化的初级应答(MyD)88/核因子(NF)-κB通路减轻糖氧剥夺(OGD)对人脑血管内皮细胞损伤的机制。方法 通过培养人脑微血管内皮细胞(HBMEC),建立OGD模型细胞模型,将细胞分为对照组(Control)组、OGD模型(OGD)组、OGD模型+TFG低、高剂量(OGD+TFG-L、OGD+TFG-H)组、OGD模型+TFG+pcDNA(OGD+TFG+pcDNA)组和OGD+TFG+TLR4(OGD+TFG+TLR4)组。采用噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(Cleaved cas)3和TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。结果 OGD组细胞活力、SOD、GSH-Px活性明显低于Control组,细胞凋亡率、IL-6、IL-10、TNF-α水平、Bax、Cleaved cas3、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达明显高于Control组(P<0.05)。OGD+TFG-L组、OGD+TFG-H组细胞活力、SOD、GSH-Px活性明显高于OGD组,细胞凋亡率、IL-6、IL-10、TNF-α水平、Bax、Cleaved cas3、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达明显低于OGD组(P<0.05)。OGD+TFG+TLR4组细胞活力、SOD、GSH-Px活性明显低于OGD+TFG+pcDNA组,细胞凋亡率、IL-6、IL-10、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved cas3蛋白表达明显高于OGD+TFG+pcDNA组(P<0.05)。结论 TFG能够减缓糖氧剥夺诱导的HBMEC凋亡、氧化应激和炎症反应,促进细胞增殖,其作用机制与TLR4/MyD88/NF-κB通路有关。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

复方钩藤降压片调节TLR4/NF-κB信号通路对自发性高血压大鼠炎症状态的影响

目的研究复方钩藤降压片对TLR4/NF-κB信号通路以及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[an-giotensin1-7, Ang(1-7)]、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)相关炎症因子表达的影响,探讨复方钩藤降压片对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensire rats, SHR)的可能降压机制。方法将21只7周龄雄性SHR随机分为模型对照组(SHR组)、复方钩藤降压片治疗组(SHR-G组)、缬沙坦片治疗组(SHR-D组),另取7只雄性WKY大鼠为空白对照组(WKY组)。所有大鼠给予相应干预,6周后采用ELISA方法检测血清中AngⅡ、Ang(1-7)和MCP-1的含量;采用免疫组织化学方法检测胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-κB p65的蛋白水平。结果 (1)SHR组血浆促炎因子AngⅡ、MCP-1的含量明显高于WKY组(P<0.05),而抑炎因子Ang(1-7)的含量明显低于WKY组(P<0.01);经复方钩藤降压片和缬沙坦片干预,可以明显降低SHR血浆中AngⅡ和MCP-1的含量(P<0.05),而增加血浆抑炎因子Ang(1-7)的含量(P<0.05 or P<0.01)。(2)SHR组胸主动脉内皮细胞中TLR4和NF-κB p65的蛋白水平明显高于WKY组(P<0.01);相对于SHR组,SHR-D和SHR-G组大鼠胸主动脉组织中TLR4和NF-κB p65的表达量显著降低(P<0.05 or P<0.01)。结论复方钩藤降压片可通过抑制胸主动脉组织内皮细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化,降低促炎因子AngⅡ、MCP-1的水平,提高抑炎因子Ang(1-7)的水平,抑制机体的炎症状态。

LX A4和BML-111对巨噬细胞内TLR4/NF-κB信号通路的作用

目的:肠道巨噬细胞定位于肠黏膜相关淋巴组织及黏膜固有层,在保持肠道稳态及免疫防御中发挥重要作用。研究脂氧素(LXs)A4及其受体激动剂BML-111对脂多糖(LPS)作用巨噬细胞RAW264.7存活和TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:CCK-8法观察LPS对RAW264.7的毒性作用,RT-q PCR法检测细胞内TLR4、TRAF6 m RNA的表达,Western blot法检测细胞内TLR4、TRAF6和p NF-κB p65的蛋白水平。结果:在1 000 ng/m L浓度LPS组,作用6 h后,LX A4组和BML-111组对RAW264.7细胞存活率显著增高(P<0.05)。在LPS作用下,LX A4组和BML-111组对RAW264.7细胞的TLR4 m RNA及蛋白水平显著高于相对应的无LPS组(P<0.05),TRAF6 m RNA的表达均高于相对应的无LPS组(P<0.05);而LX A4组和BML-111组的TRAF6蛋白水平则低于对照组(P<0.05),高于相对应的无LPS组(P<0.05)。在LPS作用下,LX A4组和BML-111组p NF-κB p65蛋白水平低于对照组(P<0.05),而对照组又高于相对应的无LPS组(P<0.05);且LX A4和BML-111作用无差异(P>0.05)。结论:LX A4和BML-111能够抑制LPS对RAW264.7细胞的作用及TLR4/NF-κB信号通路的激活,有助减轻炎症反应;性质稳定的BML-111更有望成为IBD治疗的新契机。

黄芩-黄连通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路稳定动脉粥样硬化的易损斑块

目的:观察黄芩-黄连对动脉粥样硬化(AS)小鼠斑块稳定性的影响,并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:10只正常C57BL/6J小鼠作为正常组,同品系的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠高脂饲料喂养12周构建动脉粥样硬化模型,随机分为5组,即模型组、阿托伐他汀组、黄芩-黄连低、中、高剂量组,每组10只。正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,黄芩-黄连低、中、高剂量组分别给予1.95、3.9、7.8 g·kg^(-1)药物灌胃8周。观察小鼠一般状态;苏木素-伊红(HE)染色观测主动脉根部斑块病理情况并计算斑块面积百分比;马松(Masson)染色、油红O染色联合F4/80、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检测主动脉根部斑块组分并计算斑块易损指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与模型组比较,各用药组小鼠一般状态改善,未见明显不良反应;与模型组比较,黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠主动脉根部斑块面积百分比明显降低(P<0.05);黄芩-黄连高剂量组斑块中胶原纤维及平滑肌细胞含量显著增多(P<0.01),脂质及巨噬细胞含量明显减少(P<0.05),黄芩-黄连各剂量组斑块易损指数明显降低,其中黄芩-黄连中、高剂量组显著降低(P<0.01);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组AS小鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);黄芩-黄连中、高剂量组主动脉组织中TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05),其NF-κB p65磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:黄芩-黄连可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥抗炎稳斑的作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨通络蠲痹颗粒对骨关节炎炎症损伤和细胞凋亡的影响

目的:观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法:30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组(4.1、8.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、塞来昔布组(10.9 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组6只。采用内侧半月板失稳法(DMM)建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法(TUNEL)荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高(P<0.01),关节液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.01),软骨细胞凋亡数量增加(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调(P<0.01);与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低(P<0.01),IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.01),软骨细胞凋亡数量减少(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论:通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。

TLR4/MyD88通路与高血压及中药干预此通路的研究进展

探讨信号通路TLR4/MyD88在高血压病中的作用,及以信号通路中相关蛋白及相应RNA为靶点进行高血压病的中药抗感染治疗。介绍信号通路系统组成及激活途径,信号通路与炎症、炎症与高血压的关系,以信号通路相关蛋白及相应RNA为靶点,中药进行高血压的抗感染治疗。信号通路在高血压炎症的发生机制中可能发挥着一定的作用,这为高血压治疗提供了新的治疗靶点。

高糖对HK-2细胞缺氧复氧损伤的影响及TLR7-MyD88-NF-κB信号通路的作用

目的:探讨高糖对HK-2细胞缺氧复氧损伤的影响及TLR7-My D88-NF-κB信号通路的作用。方法:随机将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为低糖组(LG组)、低糖缺氧复氧组(LH/R组)、高糖组(HG组)及高糖缺氧复氧组(HH/R组)4组,每组n=6。采用高糖刺激72 h建立高糖模型,缺氧4 h复氧2 h建立缺氧复氧模型。采用CCK-8和LDH释放实验检测细胞活性,ELISA法检测细胞IL-6和TNF-α水平,免疫荧光法检测肾脏细胞TLR7、My D88和NF-κB蛋白的表达。结果:与LG组相比,LH/R组、HG组、HH/R组的CCK-8活性下降,LDH、IL-6、TNF-α、TLR7、My D88及NF-κB蛋白表达增加(均P<0.05);与LH/R组相比,HG组LDH、IL-6、TLR7、My D88及NF-κB蛋白表达增加(均P<0.05),HH/R组CCK-8活性下降,LDH、IL-6、TNF-α、TLR7、My D88及NF-κB蛋白表达增加(均P<0.05);与HG组相比,HH/R组CCK-8活性下降,LDH、IL-6、TNF-α、TLR7、My D88及NF-κB蛋白表达增加(均P<0.05)。与HG组相比,HH/R组My D88及NF-κB蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:TLR7-My D88-NF-κB信号通路激活参与了HK-2细胞的缺氧复氧损伤,高糖导致该损伤进一步加重。

分子对接与体内验证联合探讨穿山龙复方对痛风模型大鼠TLR4/MyD88/NF-kB信号通路的影响

目的:探讨穿山龙复方对痛风性关节炎(GA)合并高尿酸血症(HUA)模型大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法:先运用分子对接技术预测穿山龙复方中主要活性成分与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关靶蛋白的分子间相互作用,再建立痛风性关节炎合并高尿酸血症大鼠复合模型进行体内实验验证。将48只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、阳性对照秋水仙碱0.3 mg/kg组及穿山龙复方0.2、0.4、0.8 g/kg组。用尿酸钠、氧嗪酸钾和10%酵母饲料造模的同时,分别给予相应的药物灌胃。7 d后取材,测定踝关节肿胀度;HE染色观察踝关节病理学变化,血清白细胞介素-8(IL-8)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;以Real-timePCR法测定大鼠踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达。结果:分子对接结果表明复方的主要活性成分与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的靶蛋白均有良好的结合活性,其中薯蓣皂苷与TLR4结合活性最强。体内实验结果表明,与正常对照组相比,模型对照组大鼠血尿酸含量以及踝关节损伤程度均显著增加,血清IL-1、IL-8、TNF-α的含量显著升高(P<0.01),踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,穿山龙复方各剂量组和秋水仙碱组对GA&HUA复合模型大鼠血尿酸含量以及踝关节损伤程度显著减轻,血清中IL-1β、IL-8、TNF-α的含量显著降低(P<0.01),踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:穿山龙复方可以通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路达到抗痛风性关节炎和高尿酸血症的作用。

黄芩苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻大鼠肝纤维化的作用

目的观察黄芩苷对肝纤维化(HF)大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的相关因子表达,探讨其干预HF的分子机制。方法将清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组和造模组,造模组每周2次腹腔注射40%CCl4溶液,连续8周。造模成功后,将造模大鼠随机分为模型组、黄芩苷组和TAK-242组,每组10只。黄芩苷(25 mL·kg^(-1))及TAK-242组(5 mg·kg^(-1))每天给药一次,连续5 d。苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察各组大鼠肝组织病理变化;生化仪检测大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)含量;ELISA检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、III型前胶原(PCⅢ)和IV型胶原(CⅣ)及肝组织中羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;Real-time RT-PCR检测大鼠肝脏中MyD88、TLR4、NF-κB mRNA表达;Western blot检测大鼠肝组织MyD88、TLR4和NF-κB蛋白表达。结果HE及Masson染色结果显示模型组的肝组织有炎性细胞浸润及纤维组织增生,黄芩苷组和TAK-242组的肝组织部分细胞肿胀,有纤维间隔,黄芩苷组改善效果优于TAK-242。生化仪检测结果显示,同正常组比,模型组血清中AST、ALT和ALP含量显著增加(P<0.01),ALB的含量显著降低(P<0.01);同模型组相比,黄芩苷可显著降低血清中AST、ALT、ALP含量(P<0.01),升高ALB含量(P<0.01);ELISA检测结果显示,同正常组比,模型组血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、HA、LN、PCⅢ和CⅣ及肝组织中HYP、MDA含量显著增加(P<0.01),SOD的含量显著降低(P<0.01)。同模型组比,黄芩苷可明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α、HA、LN、PCⅢ和CⅣ及肝组织中HYP、MDA含量(P<0.01),增加SOD的含量(P<0.01)。与正常组比,模型组TLR4、MyD88和NF-κB表达显著升高(P<0.01)。与模型组比,黄芩苷可显著降低TLR4、MyD88和NF-κB表达(P<0.01)。结论黄芩苷组可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的活化,对HF发挥潜在治疗效果。