竹节参醇提物免疫佐剂作用的实验研究

目的采用高效液相色谱法(HPLC)筛选竹节参醇提物中最佳免疫佐剂活性部位,进而探讨此有效部位作为HBs Ag佐剂的作用及可能机制。方法通过HPLC初步分离和分析竹节参醇提物,MTT法检测不同浓度乙醇洗脱的竹节参皂苷中最佳佐剂活性部位,将此部位与HBs Ag共同注入到雌性Balb/c小鼠体内进行免疫,小鼠随机分为正常对照组,HBs Ag模型组和(HBs Ag+竹节参醇提物)低(300μg)、高剂量(600μg)组,末次免疫7 d后收集小鼠淋巴细胞并采集血清,CCK-8检测脾淋巴细胞增殖情况;间接ELISA法检测小鼠血清中抗体滴度;RT-PCR法检测脾淋巴细胞中相关细胞因子的表达;流式细胞仪检测细胞表面蛋白的表达。结果竹节参醇提物显著促进淋巴细胞的增殖,60%浓度的醇过大孔树脂所得竹节参皂苷对淋巴细胞的增殖最显著(P<0.01);显著增强小鼠血清中抗HBs Ag的Ig G、Ig G1和Ig G2b亚型抗体滴度;上调细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的表达;增强TLR4受体的表达。结论竹节参醇提物中60%乙醇提取物具有较强的免疫佐剂作用,作为HBs Ag抗原佐剂是通过活化TLR4受体来发挥作用的。

内毒素脂多糖对产后奶牛繁殖性能的影响及其机制

实际生产中,奶牛产后繁殖疾病高发,尤其是上生殖道产后感染疾病,对奶牛繁殖性能造成严重的不良影响。革兰氏阴性菌是产后奶牛上生殖道感染最主要的细菌之一,其细胞壁的裂解产物内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为一种病原模式分子(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),可被子宫内膜上皮细胞膜表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)识别、结合,然后激活TLR4-核转录因子p65(transcription factor p65)通路,引发盆腔炎性反应,造成子宫上皮黏膜损伤。同时,LPS能够透过已被破坏的子宫上皮黏膜移行进入血液循环,甚至进入卵泡液中,影响下丘脑-垂体-子宫/卵巢轴的正常生殖内分泌功能以及子宫和卵巢的正常机能,最终降低奶牛繁殖性能。近年来,关于LPS对奶牛繁殖性能的影响已有广泛研究,本文着重阐述脂多糖LPS对产后奶牛生殖内分泌、子宫与卵巢机能的影响及其机制,以期为奶牛生产工作中提高产后奶牛繁殖性能提供理论支持。

大黄多糖对内毒素诱导急性前葡萄膜炎TLR4/NF-κB传导通路干预作用的实验研究

目的通过观察大黄多糖对内毒素(LPS)诱导的急性前葡萄膜炎TLR4通路的影响,揭示大黄多糖对急性前葡萄膜炎TLR4通路的分子干预机制,为TLR4通路介导的炎症治疗提供新的思路和途径。设计实验研究。研究对象野生型Wistar大鼠、RAW264.7巨噬细胞系。方法野生型Wistar大鼠15只,随机分为3组,正常对照组、模型组(LPS组)、大黄多糖处理组,每组5只,大黄多糖处理组腹腔注射400 mg/kg大黄多糖,对照组和模型组注射等量PBS。各组腹腔注射2小时后模型组和大黄多糖处理组每只大鼠足底注射0.1 ml霍乱弧菌内毒素LPS,对照组注射等体积的PBS,24小时后裂隙灯下观察大鼠眼前节炎症反应并按炎症分级评分,RT-PCR观察大鼠虹膜TLR4表达的变化。RAW264.7巨噬细胞系进行体外培养,用大黄多糖、LPS分别刺激,通过Western blot、RT-PCR、ELISA、免疫荧光技术观察两者对巨噬细胞TLR4及相关分子的影响。主要指标大鼠眼前节炎症反应程度、巨噬细胞TLR4表达变化。结果裂隙灯下观察,LPS组相比于正常对照组虹膜充血严重,前房闪辉及瞳孔区纤维素渗出均较多;大黄多糖干预组大鼠仅轻度虹膜充血,瞳孔缘无明显渗出膜,瞳孔无缩小。RT-PCR示大黄多糖干预组TLR4 mRNA表达较LPS组明显降低。Western blot和RT-PCR结果显示大黄多糖在体外分别能引起巨噬细胞TLR4、髓样分化蛋白-88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白和mRNA表达量的增加;ELISA显示大黄多糖100μg/ml作用于Raw264.7细胞24小时后能引起上清液炎症因子IL-17,IL-10,TNF-α,INF-γ,IL-1β的表达增高;免疫荧光显示大黄多糖能引起培养细胞的激活、TLR4复合物及NF-κB p65表达。结论大黄多糖对内毒素诱导的大鼠急性前葡萄膜炎模型具有明显的抑制作用。体外实验显示大黄多糖同LPS一样,在体外具有激活巨噬细胞TLR4及其下游MyD88和NF-κB、调节细胞因子表达的作用。