2型糖尿病合并菌阳肺结核患者外周血单个核细胞TLRs/NF-kB通路表达研究

目的:探讨分析2型糖尿病合并菌阳肺结核患者外周血单个核细胞TLRs/NF-kB通路表达情况。方法:选择我院收治的2型糖尿病合并菌阳肺结核患者96例作为合并组,单纯糖尿病患者60例作为糖尿病组,健康受试者60例作为对照组。合并肺结核患者给予肺结核标准化治疗方案,比较三组受试者外周血单个核细胞(PBMCs)TLR2、TLR4、NF-κB mRNA表达情况,并比较TLRs/NF-kB通路表达与患者临床治疗效果的关系。结果:三组受试者TLR2、TLR4、NF-κB mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)。合并组患者治疗6个月后TLR2、TLR4以及NF-κB mRNA相对表达量均较治疗前降低(P<0.05)。治疗后痰菌阴性组患者TLR2、TLR4以及NF-κB mRNA相对表达量均低于痰菌阳性组患者(P<0.05)。结论:2型糖尿病合并菌阳肺结核患者机体处于TLRs/NF-kB通路激活状态,而经治疗后可降低TLRs/NF-kB通路表达,且TLRs/NF-kB通路的改善与患者抗结核治疗效果密切相关。

多发性硬化中TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的作用及机制

背景:多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在疾病发生发展过程中有重要作用,探究出信号通路的具体作用机制对进一步治疗该疾病,改善患者的预后至关重要。目的:综述TLRs/MyD88/NF-κB信号通路及其在多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中的作用,并就抑制该信号通路为多发性硬化的治疗提供新的思路和策略。方法:检索中国知网、万方及PubMed数据库在2002年1月至2022年12月与文章主题相关的文献,最终纳入61篇文献进行分析。结果与结论:①TLRs/MyD88/NF-κB信号通路是介导炎性免疫反应的重要信号通路;②TLRs/MyD88/NF-κB信号通路通过调节树突状细胞的抗原提呈、破坏血脑屏障的完整性、促进T细胞、B细胞和小胶质细胞的激活等途径,在多发性硬化的发展中发挥了重要的作用;③通过靶向作用于TLRs、MyD88和NF-κB分子,抑制TLRs、MyD88和NF-κB的激活或信号传导,减少促炎因子的分泌可以达到治疗多发性硬化的目的;④动物实验研究表明,中药的活性成分如黄酮类和苷类、中药复方如补阳还五汤也可通过影响TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎,这为寻找靶向TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗多发性硬化的药物指明方向。

中医药干预TLRs/MyD88信号通路治疗痛风性关节炎的研究进展

痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)作为一种炎症反应性疾病,其发病的关键是尿酸钠盐(monosodium urate, MSU)结晶沉积在关节及其周围组织,而引起的一系列炎症阶连反应。研究表明,TLRs是决定MSU结晶沉积导致GA的主要因素,TLRs/MyD88信号通路在GA的炎症反应过程中发挥着至关重要的作用,是GA最重要的信号转导通路之一,越来越多学者集中于对该通路的研究。中医药治疗充分发挥其“多途径、多环节、多靶点”的优势,近年来在GA的机制研究上取得显著成果。该文通过概述了TLRs/MyD88信号通路的结构和功能,对近5年来中医药基于TLRs/MyD88信号通路治疗GA的作用机制进行总结和分析,以期揭示现代中医药作用的靶点和调控机理,为中医药靶向防治GA及中医药现代化研究开拓思路。

TLRs-NF-kB信号通路在重症手足口病发病中的作用机制研究

目的探讨Toll样受体-核转录因子-κB(TLRs-NF-κB)信号通路在重症手足口病发病机制中的作用。方法回顾性分析2014年1月至2019年6月苏州大学附属儿童医院感染科及重症医学科收治重症手足口病患儿96例(重症组),普通型手足口病患儿102例(普通组)以及健康对照组儿童20例(健康组),观察2组手足口病患儿的临床表现及病毒检测结果;酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组血清细胞因子血清白细胞介素-6、-10(IL-6、IL-10),γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及核转录因子-κB(NF-κB)水平,采用流式细胞术检测3组TLRs细胞限制存在型(TLR2、TLR4)阳性细胞百分比。结果重症组肠道病毒71型(EV71型)感染阳性率高于普通组(62.50%vs.25.49%,P<0.05);与健康组比较,重症组和普通组患儿血清IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α、NF-κB水平以及TLR2、TLR4阳性细胞百分比均升高(P<0.05),且重症组高于普通组(P<0.05)。结论重症手足口病患儿机体免疫紊乱较为严重,血清IL-10、IL-6、IFN-γ、TNF-α、NF-κB以及TLR2、TLR4阳性细胞百分比均升高,TLRs-NF-kB信号通路在疾病的发病中的发挥了重要的作用。

叶尔羌高原鳅鳃组织TLRs基因家族成员鉴定及生物信息学分析

为探究叶尔羌高原鳅(Triplophysa yearkandensis)免疫系统中TLRs基因家族的多样性、进化关系和功能特征,基于该物种鳃组织的高通量二代转录组测序数据进行了生物信息学分析,在对该物种TLRs基因家族进行鉴定的基础上分析了其系统发育和蛋白功能。结果表明,叶尔羌高原鳅鳃组织中存在11个TLRs基因家族成员,分别为TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9、TLR13、TLR18、TLR22和TLR25,其中TLR7、TLR9和TLR13缺失5′端序列,而其余序列均完整。TLRs基因家族成员系统发育分析发现,可以将11个基因分为5个亚家族。蛋白功能分析发现,各个TLR基因都含有富含亮氨酸重复结构域以及TIR结构域。物种间系统发育分析显示,叶尔羌高原鳅与西藏高原鳅(Triplophysa tibetana)和玫瑰高原鳅(Triplophysa rosa)在TLRs基因家族成员方面分别聚为一类,说明3个物种亲缘关系相近。研究结果有助于深入了解叶尔羌高原鳅TLRs基因家族的进化关系和免疫功能,同时也为该物种的遗传资源保护和养殖利用提供理论基础。

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs)Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P<0.01),抑制IL-4、IL-10的生成(P<0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF-κB信号通路激活,从而调控炎症因子表达,使Th1/Th2细胞因子网络平衡体系向Th1方向倾斜,缓解特应性皮炎(AD)。

TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群特征与溃疡性结肠炎患者疾病活动度的关系

目的研究Toll样受体(TLRs)/核因子(NF)-κB信号通路及肠道菌群特征与溃疡性结肠炎(UC)患者疾病活动度的关系。方法前瞻性分析2021年1月至2023年1月山西白求恩医院收治的84例UC患者纳入本研究,设为观察组。将观察组患者根据Walmsley评分分为活动性溃疡性结肠炎(AUC)组(Walmsley评分>4分)45例和缓解性溃疡性结肠炎(RUC)组(Walmsley评分<4分)39例。另选同期发现为结肠息肉患者40例设为对照组。收集患者相关基线资料,比较3组患者肠道菌群分布、TLRs及NF-κB的相对表达量,分析TLRs及NF-κB的相对表达量与疾病活动度的相关性。结果3组基线资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AUC组、RUC组双歧杆菌数量分别为(7.06±0.15)、(6.25±0.31)lg CFU/g,均低于对照组[(8.45±0.53)lg CFU/g],大肠埃希菌数量分别为(8.95±0.24)、(10.12±0.43)lg CFU/g,均高于对照组[(7.46±0.47)lg CFU/g],差异均有统计学意义(P<0.05);RUC组乳杆菌数量为(5.04±0.12)lg CFU/g,低于对照组[(7.09±0.41)lg CFU/g],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。AUC组患者TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的mRNA表达量分别为2.95±0.14、2.24±0.15、3.12±0.15、2.65±0.34、2.31±0.18,RUC组TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的mRNA表达量分别为1.06±0.32、1.38±0.31、1.94±0.14、1.85±0.19、1.62±0.21,均高于对照组(1.01±0.21、1.01±0.21、0.98±0.06、1.03±0.08、0.94±0.03),AUC组患者TLRs及NF-κB的mRNA表达量均高于RUC组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的相对表达量与Walmsley评分均呈正相关(r=0.458、0.384、0.556、0.641、0.674,P<0.05)。结论不同疾病活动度患者TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群分布存在差异,提示TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群可能影响UC患者疾病活动度。

紫草素调控TLRs信号通路对结核分枝杆菌感染小鼠肺部炎症、免疫功能及炎性因子的作用

目的分析紫草素对结核分枝杆菌感染小鼠肺部炎症、免疫功能及炎性因子的作用及作用机制。方法随机选取SPF级C57BL/6小鼠87只,随机抽取15只作为对照组,将剩余72只小鼠建立结核分枝杆菌感染小鼠模型,建模成功45只,成功率62.50%,随机分为模型组、紫草素组、紫草素+Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核转录因子κB(nuclear transcription factorκB,NF-κB)p65信号通路激动剂组(紫草素+LPS组)各15只,紫草素组腹腔注射40 mg/kg紫草素;紫草素+LPS组腹腔注射40 mg/kg紫草素及0.25 mg/kg LPS;对照组及模型组腹腔注射等量生理盐水。末次给药后,观察各组小鼠肺重指数及肺部组织结核菌荷菌量、肺组织病理学形态改变、免疫功能指标、炎性因子及通路相关因子表达水平。结果与对照组对比,模型组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显增多(P均<0.05);与模型组对比,紫草素组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显减少(P均<0.05);与紫草素组对比,紫草素+LPS组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显增多(P均<0.05)。对照组小鼠肺组织结构正常,细胞排列紧密,肺泡结构完整,未见炎性细胞浸润情况;模型组小鼠肺组织结构受损严重,肺泡数量减少,可见大量炎性细胞浸润,可见结核结节形成;紫草素组肺组织结构基本完整,偶见炎性细胞浸润;紫草素+LPS组肺组织结构、细胞排列、炎性细胞浸润及结核结节情况与模型组相似,但较优于模型组。与对照组对比,模型组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)水平均明显降低,CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组对比,紫草素组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-10表达水平均明显升高,CD8^(+)T淋巴细胞、IL-6、TNF-α及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显降低(P均<0.05);与紫草素组对比,紫草素+LPS组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-10表达水平均明显降低,CD8^(+)T淋巴细胞、IL-6、TNF-α及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论紫草素可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路改善结核杆分枝菌感染小鼠肺部组织结核分枝杆菌荷菌量,抑制肺部炎症反应,提高免疫功能,从而发挥一定的肺保护作用。

基于“TLR4/NF-kB”信号通路研究“加味四妙丸”治疗急性痛风性关节炎大鼠的作用机制

[目的]观察"加味四妙丸"治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠的疗效,并基于"TLR4/NF-kB"信号通路探讨"加味四妙丸"作用机制。[方法]108只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、"加味四妙丸"低、中、高剂量组,每组18只。除正常组外,其余大鼠参照Coderre造模方法膝关节腔注射尿酸钠悬浊液制作AGA模型,治疗4d后,计算各时间点受试关节肿胀指数,光学显微镜观察受试关节滑膜组织病理学变化,采用ELISA法检测关节腔冲洗液IL-1β、TNF-α的含量,免疫组化法检测关节滑膜组织TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达,RT-PCR法检测滑膜组织TLR4m RNA表达。[结果]与正常组比较,模型组大鼠膝关节肿胀指数显著升高(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量显著上调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,"加味四妙丸"中、高剂量组大鼠治疗后关节肿胀指数显著下降(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显减轻,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NFkB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量均显著下调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著下降(P<0.01)。[结论]"加味四妙丸"可能通过抑制"TLR4/NF-kB"信号通路,从而抑制IL-1β、TNF-α的产生,起到治疗AGA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性。

黄芩苷对实验性结肠炎小鼠TLRs/MyD88通路的作用研究

本文研究黄芩苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型的疗效,并从TLRs/MyD88通路探讨其作用机制。C57BL/6小鼠24只,分为空白对照组、模型组和黄芩苷组,用3.5%DSS诱导结肠炎模型,黄芩苷(30 mg/kg)干预7天,记录小鼠的疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察病理改变并评分,检测结肠髓过氧化物酶(MPO)活性,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-6浓度,Real-time PCR法检测TLR2、TLR4和MyD88 mRNA表达水平。结果显示黄芩苷能有效抑制结肠炎小鼠DAI评分、结肠组织病理学评分和MPO活性,降低IL-6和TNF-α表达,降低TLR2、TLR4和MyD88 mRNA的表达。表明黄芩苷能有效缓解DSS诱导的结肠炎小鼠模型的症状,降低炎症反应,其作用机制可能是与TLRs/MyD88通路相关。

痛风泰对TLRs/NF-κB信号通路中关键基因的调控作用

目的研究痛风泰颗粒对TLRs/NF-κB信号通路中关键基因的调控作用,探究该药物抗炎的作用机制。方法将24只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、痛风泰颗粒低剂量组、中剂量组及高剂量组。除正常对照组外,均向每组大鼠踝关节腔注射尿酸钠混悬液,造成急性痛风大鼠模型,随后按照分组和剂量灌胃给药5 d。末次灌服后分别采用ELISA及免疫组化法测定大鼠血清中TNF-α的含量和关节滑膜组织中NF-κB p65的表达。另将15只大鼠随机分为A、B、C、D、E组,分别灌服生理盐水、戴芬溶液、低剂量痛风泰颗粒、中剂量痛风泰颗粒及高剂量痛风泰颗粒,得到5种含药血清。取8只大鼠,构建痛风大鼠模型后取关节滑膜组织培养炎性的原代滑膜细胞,分别用A、B、C、D、E组血清刺激相应的A、B、C、D、E组细胞,利用RT-PCR检测不同组别血清刺激8 h后TLR2、TLR3及TLR4基因mRNA的表达。结果与正常对照组相比,模型对照组血清中TNF-α含量、关节滑膜组织中NF-κB p65表达量均升高(P<0.01);与模型对照组相比,阳性对照组、低、中、高剂量组的大鼠血清中TNF-α含量、关节滑膜组织中NF-κB p65表达量都有所下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001);血清刺激后,与A组相比,B、C、D、E组细胞TLR4 mRNA的相对表达量均有所降低,呈现出一定变化趋势(P<0.05,P<0.001)。但TLR2和TLR3基因的mRNA相对表达量无任何趋势及表达差异。结论痛风泰颗粒能够降低TLRs/NF-κB信号通路中关键基因TLR4、TNF-α及NF-κB的表达,作用效果与戴芬相近。该药物可能通过这一通路发挥抗炎作用,达到治疗痛风的效果。

小鼠侵袭性肺曲霉病发病过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活

目的:研究小鼠侵袭性肺曲霉病(IPA)发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活,探讨IPA的发病机理。方法:小鼠随机分为正常组(N)、正常接菌组(N+Af)和IPA模型组(IPA),经鼻吸入烟曲霉(Af)孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织行病理切片、Af菌落计数,RT-PCR法检测TLR2和TLR4 mRNA、蛋白印迹法检测NF-κBp65、IL-1β的表达。结果:(1)鼻吸入Af后72小时时,IPA组肺组织出现严重炎症反应,并有大量的菌丝生成,同时各时相点的菌负荷均高于N+Af组;(2)与N+Af组比较,IPA组TLR2 mRNA后期异常高表达,TLR4 mRNA持续低表达,NF-κBp65早期骤然升高后又持续下降,IL-1β一直呈低表达状态。结论:TLRs的异常激活导致宿主下游信号的低反应性,宿主不能清除Af促使了IPA的发生发展。

基于TLR4/MyD88/NF-KB通路探讨中医超声药透电疗改善脑缺血大鼠炎症反应的实验研究

目的探讨中医超声药透电疗仪对脑缺血大鼠炎症反应的影响。方法建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、中药片组、空白片+电疗组、中药片+电疗组、丁苯酞组,造模24 h后连续给予相应治疗1周。治疗后,评估大鼠的神经功能评分,TTC计算脑梗死体积百分比;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素—1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平;免疫组化和Western blotting法检测大鼠梗死侧皮质TLR4、MyD88、NF-KBp65的表达。结果与模型组比较,中医超声药透电疗可改善MCAO大鼠神经功能缺损症状,减轻脑梗死体积百分比,差异有统计学意义(P<0.05),降低皮质区TLR4、MyD88、NF-KBp65的表达及血清炎症因子TNF-α、IL-1β的释放,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中医超声药透电疗能够改善脑缺血大鼠的炎症反应,其机制可能与TLR4/MyD88/NF-KB通路有关。

前列地尔对2型糖尿病患者外周血单核细胞TLRs信号通路及糖代谢、肾功能的影响

目的观察前列地尔注射液对2型糖尿病患者外周血单核细胞TLRs(Toll样受体)通路及糖代谢、肾功能的影响。方法选取2014年3月-2016年3月昌吉州人民医院2型糖尿病患者80例,根据其是否愿意使用前列地尔注射液,分为观察组和对照组,每组各40例。2组患者均给予糖尿病常规治疗,观察2组外周血单核细胞TLRs信号通路表达情况,比较2组糖代谢指标、肾功能及炎性因子等的影响。结果治疗后,2组患者Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)水平均降低,且观察组明显低于对照组(t=-8.09、-8.52、-8.09,P均=0.00);治疗后,2组患者Glu、FIN、HOMA-IR、HbA_(1c)均改善,且观察组改善更明显(t=-6.51、8.53、-6.96、11.87,P均=0.00)。治疗后观察组患者尿素氮、尿蛋白、β_2-MG明显优于对照组(t=-2.07、-8.65、-13.89,P=0.04、0.00、0.00);观察组患者TNF-α、IL-6、IL-8水平明显低于对照组(t=-18.67、-5.40、-8.09,P均=0.00)。结论前列地尔注射液抑制糖尿病患者TLRs信号通路活化,改善糖代谢、肾功能。

不同卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞CD14、TLRs表达的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)和牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)对成骨细胞表达CD14和TLRs的影响。方法:10μg/mLP.e-LPS和P.g-LPS刺激MC3T3-E1细胞,应用RT-PCR检测不同时间(0、1、3、6、12及24h)后,细胞CD14、TLR2及TLR4 mRNA表达的变化;流式细胞术检测P.e-LPS和P.g-LPS作用24h后,细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:P.e-LPS作用1h后,MC3T3-E1细胞CD14和TLR4 mRNA的表达量明显增加,TLR2 mRNA的表达量随着P.e-LPS作用时间的增加并无明显变化。P.g-LPS作用于MC3T3-E1细胞后,其CD14、TLR2、TLR4 mRNA的表达量均明显增加;流式细胞术分析显示,P.e-LPS作用24h后,与未加LPS组相比,CD14和TLR4蛋白的表达量均显著增加,但TLR2蛋白的表达量无显著增加。P.g-LPS作用24h后,细胞CD14、TLR2、TLR4蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论:P.e-LPS可能是通过CD14和TLR4受体对成骨细胞发挥作用,而P.g-LPS对成骨细胞的刺激作用则可能依赖于CD14、TLR2和TLR4受体。

口腔扁平苔藓中TLRs/NF-κB信号通路的表达及环孢菌素A对其调节作用

目的探索TLRs/NF-κB信号通路在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病理过程中的作用及环孢菌素A在OLP治疗中的抗炎机制。方法①LPS刺激HaCaT细胞建立体外OLP炎症模型,采用逆转录聚合酶链技术检测TLRs/NF-κB信号通路相关基因NF-κBP65、TLR4在该模型中的表达情况;②先以LPS刺激HaCaT细胞,再以环孢菌素A处理HaCaT细胞检测NF-κBP65、TLR4、TNFαmRNA表达情况。结果体外OLP炎症模型,NF-κBP65、TLR4 mRNA表达量上调,且表达量随着LPS作用浓度和时间的增加呈上升趋势,10μg/ml LPS组作用24 h表达量最高(P<0.05)。环孢菌素A能够下调TLR4、NF-κBP65、TNFα的表达,10μg/ml环孢菌素A作用24 h时mRNA表达量下调最大(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路可能调控OLP免疫病理过程;环孢菌素A可能通过抑制TLR4的激活,调控NF-κB的表达,最终抑制OLP炎症介质活化与黏膜损伤。

4种临床抗结核药物对A549细胞TLRs信号通路和炎症因子表达的影响

目的:探讨2种一线[利福平(RFP)和异烟肼(INH)]和2种二线[阿米卡星(AMK)和对氨基水杨酸(PAS)]抗结核药物对肺泡上皮细胞Toll样受体(TLRs)信号通路信号分子和炎症因子表达的影响。方法:分别采用不同剂量RFP、INH、AMK和PAS作用于A549细胞,qRT-PCR、Western blot和ELISA在核酸和蛋白水平分析TLRs信号通路相关信号分子和炎症因子表达变化。结果:当在细胞培养液中加入10.54μg/ml RFP时,可抑制A549细胞TLRs受体信号通路,降低IL-12表达;当添加5.00μg/ml INH时,可促进NFκB表达及IL-8与IL-12分泌,但TLR2和MyD88表达被抑制;AMK可激活A549细胞TLRs信号通路,并通过其他途径抑制炎症因子IL-8和IL-12表达;PAS可激活A549细胞TLRs信号通路,并促进IL-8、IL-12表达及分泌。结论:RFP和AMK分别抑制和促进TLRs信号通路活化,并抑制炎症因子分泌;INH可激活MyD88非依赖性通路,PAS可活化TLRs信号通路,进而促进炎症因子分泌,为抗结核药物的临床应用提供参考。

从TLRs介导的炎症信号通路研究补肾方的抗肝损伤机制

目的:从TLRs介导的炎症信号通路探讨补肾方的抗肝损伤机制。方法:将42只SPF级健康成年C57BL小鼠,雌雄各半,随机分为正常组、模型组、补肾全方组和拆方组(补肾阴组、补肾阳组、清化湿热组、引经药组)。每天给药1次,连续给药7天,第7天给药后4h,除正常组外,均给予刀豆蛋白A 15mg/kg尾静脉注射,注射后18h摘眼球处死老鼠。检测肝功能,肝组织HE染色,ELISA法检测外周血相关炎症介质,Western Blot法检测TLR3/4/9相关信号通路链中关键蛋白。结果:肝功能指标中,补肾全方组的ALT、AST均显著下降(P<0.05)、ChE显著上升(P<0.05);补肾阳组在AST中下降明显(P<0.05),补肾阴组在ALT中下降明显(P<0.05)。肝组织HE染色表明,各组均具有一定的改善肝组织炎症坏死的作用,与模型组相比,补肾全组、补肾阳组中坏死区域的面积显著减小。外周血主要炎症介质结果表明,补肾全方组的IL-6、IL-1、TNF-α、TNF-β均显著下降(P<0.05),补肾阳组的TNF-β和IL-1显著下降(P<0.05),而补肾s阴组的TNF-α、TNF-β和IL-6显著下降(P<0.05)。Western Blot检测结果表明,ConA处理后TLR3/4/9相关信号通路链中的关键蛋白如TBK1、IRF3、TLR9、TLR4、TLR3、TRAF6、NF-κB、TIRP、myd88的表达均增加,补肾全方及其拆方处理后,TBK1、IRF3、TLR9、TLR4、TLR3、NF-kB、MyD88在补肾全组中表达减少,TLR9、TLR4、TRAF6、NF-κB、MyD88在补肾阳组中表达减少,TLR9、TLR3、TRAF6、NF-kB在补肾阴组中表达减少,TRAF6在清化湿热组中表达减少。结论:补肾方能通过影响TLRs介导的炎症信号通路,下调炎症介质,发挥其抗肝损伤作用。

不同品种羊血液和肺脏中TLRs基因转录水平差异分析

【目的】分析不同品种羊Toll样受体(TLRs)基因转录水平的差异性,为揭示TLRs基因转录水平与羊疫病间的关联性提供参考依据。【方法】选取贵州省主要饲养的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊、波尔山羊和湖羊为研究对象,根据GenBank已公布的TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性扩增引物及TaqMan探针引物,利用TaqMan探针荧光定量PCR检测不同品种羊血液和肺脏中TLR1~TLR10基因转录水平差异。【结果】TLR1~TLR10基因在不同品种羊血液和肺脏中均有转录表达。不同品种羊血液和肺脏中的TLRs基因转录水平均存在差异性,在波尔山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因转录水平均极显著低于其他4种羊(P<0.01,下同),TLR7和TLR8基因转录水平则极显著低于除黑山羊外的其他3种羊;在白山羊血液中TLR4、TLR7、TLR8和TLR9基因转录水平极显著高于其他4种羊;在湖羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平极显著低于其他4种羊,而在黔北麻羊肺脏中TLR5和TLR8基因转录水平极显著高于其他4种羊。此外,在5种羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因转录水平均极显著高于其他TLRs基因转录水平;羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,在贵州白山羊、贵州黑山羊和波尔山羊均表现为极显著高于其他TLRs基因转录水平。【结论】不同品种羊血液和肺脏中TLRs基因转录水平具有差异性,以TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,提示TLRs在不同品种羊机体中发挥着清除病原体及维持机体稳态的作用,而TLRs基因转录水平差异可能是造成不同品种羊对疫病易感差异的原因之一。

养阴活胃合剂对CAG大鼠胃黏膜细胞TLRs及相关信号转导通路的影响

目的:观察养阴活胃合剂对CAG大鼠胃黏膜细胞TLRs及其信号转导通路的影响,揭示养阴活胃合剂治疗CAG的治疗途径与作用靶点,分别从分子水平、蛋白水平阐述养阴活胃合剂治疗CAG的作用机制,并通过测定炎症因子的变化情况观察养阴活胃合剂在抗炎方面的作用。方法:将实验动物随机分为6组:空白对照组、模型组、阳性药物对照组及中药低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组16只。除空白对照组常规饲养、自由进食水之外,其余5组将2 g水杨酸钠加入100 m L的30%乙醇溶液中,给大鼠灌胃,1次/d,3 m L/次,配合隔日喂食不禁水法建立大鼠萎缩性胃炎模型,模型复制成功后中药治疗低、中、高剂量组分别喂饲养阴活胃合剂水煎剂0.74 g/kg·d、1.48 g/kg·d和2.22 g/kg·d。12周后测定血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)诱导型一氧化氮合成酶(NOS2)四种炎症因子含量,测定TLRs及其下游转导元件m RNA及蛋白的含量。结果:养阴活胃合剂能够改善大鼠胃黏膜病理状态,使病变胃黏膜趋于正常。与空白对照组比较,各组炎症因子及TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均明显升高(P<0.05),证明模型复制成功。与模型组相比,中药高剂量组TNF-α、IL-6、NOS2含量均明显降低,阳性药物对照组及各中药剂量组对TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。而各养阴活胃剂量组之间比较,中药中剂量组IFN-β降低,中药高剂量组TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1)养阴活胃合剂可以通过调控TLR样受体及其下游转导元件基因及蛋白水平,降低因TLRs通路激活所释放的炎症因子对胃黏膜的损伤,从而达到治疗慢性萎缩性胃炎的目的。2)养阴活胃合剂可降低慢性萎缩性胃炎大鼠血清中炎症因子水平,而抑制炎性反应可能有助于慢性萎缩性胃炎病情的改善。