ERK／AP-1途径在蛋白酶激活受体2促进肝癌细胞增殖中的作用

目的探讨胰蛋白酶和蛋白酶激活受体2（PAR-2）激动剂SLIGKV．NH，对肝癌细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制。方法免疫荧光及逆转录（RT）-PCR法检测HepG2细胞PAR-2蛋白及mRNA的表达；用SLIGKV—NH2、胰蛋白酶、反PAR-2激动肽VKGILS—NH2及PD98059干预细胞生长。用流式细胞术检测细胞周期改变情况；噻唑蓝（MTr）法检测对细胞增殖能力的影响；RT—PCR法检测PAR-2、c-fos及增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA表达变化；Western印迹检测c．fos和PCNA蛋白表达变化。结果肝癌HepG2细胞存在PAR-2蛋白和mRNA的表达。50μmol／ LSLIGKV—NH2、25nmol／L胰蛋白酶处理细胞后，PAR一2mRNA表达量（PAR-2／[3．肌动蛋白）分别为0．70±0．04，0．994-0．05，高于对照组（0．35-t-O．05，F=135．534，P〈0．01）。胰蛋白酶、SLIGKV—NH2组G0／G1期比例均明显低于对照组[（56．11±O．85）％、（57．85±0．46）％比（79．12±0．67）％，均P〈0．01]，s期、G：／M期细胞比例和细胞增殖指数（PI）则明显高于对照组（均P〈0．01）。胰蛋白酶、SLIGKV-NH2可以诱导肝癌HepG2细胞增殖（F=319．287，P〈0．01），上调c-fos、PCNAmRNA和蛋白的表达（均P〈0．01），且这些作用可被ERK激活性蛋白激酶（MEK）抑制剂PD98059抑制（均P〈0．01）；反PAR-2激动肽VKGILS—NH2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显，与对照组相比差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论肝癌HepG2细胞表达PAR-2。胰蛋白酶、SLIGKV—NH，可以通过激活PAR-2诱导HepG2细胞的增殖活性，且该过程部分由ERK／AP．1信号通路所介导。