鸡毒霉形体TM-1基因原核表达载体的构建及表达

对从含有鸡毒霉形体H3株TM 1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒,进行EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的线性原核表达载体pET 30a 1连接,转化宿主菌BL21(DE3),筛选阳性克隆。提取质粒,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确,从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达,表达产物经SDS PAGE电泳分析,证明其分子质量约为29ku;Western blotting分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有生物学活性。

TMS1/ASC基因甲基化与肿瘤的相关性

细胞凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)由PYRIN(PYD)和CARD组成,是可逆的衔接分子。DNA甲基化是一种可遗传性修饰,它有利于调节基因组的完整性并保证适当的基因表达。ASC在某些肿瘤中被甲基化而沉默,并表现生长抑制活性。本文对TMS1/ASC甲基化后表达沉默与癌之间的关系做一综述。

棉花FT基因的特征和表达分析

利用生物信息学方法对13个棉种(二倍体棉8个、四倍体棉5个)的FT基因进行鉴定,并对其序列特征、进化关系、基因结构、蛋白结构、顺式作用元件进行分析;以陆地棉TM-1为试验材料,予以3种不同的光周期处理,利用qRT-PCR技术对陆地棉中的FT基因(GhFT基因)的时空表达特征进行定量验证。结果表明,13个棉种共获得18个FT基因,并且这些FT基因的理化性质差异不大,转录本长度普遍为525 bp,编码蛋白质长度为174个氨基酸,等电点介于6.73和9.45之间,平均分子量为19.56 kD;系统进化分析显示18个FT基因分为2组,组Ⅰ仅有2个成员,组Ⅱ包含16个成员;蛋白结构分析发现,所有FT基因均含有4种模体,具有相似的功能,同一组的FT基因含有相同的保守结构域;基因结构分析发现,同一类群的基因所含外显子和内含子数量相同,结构相似。田间自然光照条件下,GhFT基因在棉花各组织中的表达量存在较大差异,在苞叶和萼片中优势表达,在根、下胚轴中几乎不表达;长日照条件下(昼16 h/夜8 h),GhFT基因在叶片中的表达随着叶龄的增长而增强;24 h内GhFT基因在叶片和根中的表达量变化呈昼夜节律变化,GhFT基因长日照处理下叶片中的表达量显著高于根中的表达量,而在短日照(昼8 h/夜16 h)处理下相反。本试验旨在为研究GhFT基因在棉花发育调控中的作用提供参考。

融合表达TM-1基因和gD基因重组腺病毒的构建及其免疫效果初步评价

为研究鸡毒支原体病和鸡传染性喉气管炎2种禽类接触性呼吸道传染病二联基因工程活载体疫苗，试验中选取鸡毒支原体TM-1基因和鸡传染性喉气管炎gD基N，经鉴定获得阳性pMD-TM-1和pMD-gD克隆质粒，酶切胶回收目的基因后分别克隆至穿梭载体构建重组pDC315-TM-1、pDC315-g D和pDC315-TM1-gD。将构建成功的重组穿梭载体和骨架质粒同时转染293细胞，经荧光显微观察、RT-PCR和Western blot检测，成功包装出能表达TM-1蛋白、gD蛋白和TM-1-gD融合蛋白的重组腺病毒pBH-TM-1、pBH-gD和pBH-TM-1-gD。Vivapure AdenoPACKTM法纯化病毒粒子，以TCID50法确定pBH-EGFP、pBH-TM1、pBH-gD和pBH-TM-1-gD的滴度分别为10T10 TCID50／mL、10^10.125 TCID50／mL、10^9.75 TCID50／mL、10^10.25 TCID50／mL，符合后续动物试验所需滴度要求。动物试验肌内免疫SFP雏鸡结果显示：重组腺病毒pBH-TM-1-gD组与常规疫苗组免疫效果无显著性差异（P〉0．05），可以成为一种替代抗生素的生物治疗方式。