钨酸钠做为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅰ、光镜研究

本文通过试管实验和在尾核—黑质投射模型上的比较研究,首次提出了一种以钨酸钠作为稳定剂的新的TMB成色法(TMB-ST法)用于HRP神经束路追踪术。与现确灵敏度最高的Mesulam的TMB法相比,TMB-ST法具有灵敏度更高,产物稳定,耐酒精、耐pH小于6.3的环境,无针状结晶和点状结晶,标记结构形态细腻,组织切片不皱缩等优点。此外,本文还对稳定剂在HRP-TMB组化反应中的作用作了较全面的讨论。

钨酸钠作为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅱ、电镜研究

本文研究了各种不同锇化步骤对TMB-ST反应产物的影响。结果发现:TMB-ST法结合DAB-Co后处理步骤用于电镜束路追踪时,具有反应产物电子密度很高,呈特征性的细杆状,组织超微结构保存良好的特点,且灵敏度较高。而未后处理的TMB-ST产物锇化后大多数只具有中等电子密度。此外,通过对以硝普钠、钼酸铵、柠檬酸镍离子络合物、钨酸钠作为稳定剂的各种TMB法的比较,我们首次提出了稳定剂是影响TMB产物电子密度的最重要因素的观点。

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。

TMB对模拟氰化液中AU(Ⅰ)的静态吸附选择性的影响

测定了HW吸附树脂—TMB对模拟氰化液中Au(Ⅰ)的静态吸附选择性。结果表明Sn(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)及一些常见阴离子基本上不影响HW吸附树脂的吸附性能而Ag(Ⅰ),Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)及Ni(Ⅱ)则不同程度地影响HW吸附树脂—TMB的吸附性能,其选择系数有如下顺序:KAu(CN)_2^-·Ni(CN)_4^(2-)>>KAu(CN)_2^-·Zn(CN)_4^(2-)>KAu(CN)_2^-·Cu(CN)_4^(2-)>KAu(CN)_2^-·Ag(CN)_2^- 一般来说,TMB的加入量增大可以增加HW吸附树脂吸附Au(Ⅰ)的能力。

HRP—TMB反应中醋酸缓冲液的pH值与反应敏感性、组织超微结构保存的关系

为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过用不同pH值的醋缓配的反应液(pH3.3,4.0,4.2,4.4,4.6,4.8,5.2,5.6)后,在光镜及电镜下观察了下橄榄核区标记终末的密度及组织超微结构像。生现醋缓pH为4.0及3.3时,标记终末密度相似,或4.0时多于3.3,但4.0的组织像较3.3者有明显的改善。当pH值进一步提高时,尽管电镜下组织像逐渐改善,但标记的密度却逐步下降,至5.6时,几无阳性标记。另外,pH4.0的材料中,TMB反应产物变小,其跨膜现象也较3.3者少见。故作者认为,选用pH值为4.0的醋缓液较为合适。

TMB-8对牛基底动脉平滑肌细胞增殖的作用

采用培养乳牛基底动脉平滑肌细胞（ＢＡＳＭＣ），观察了去甲肾上腺素（ＮＥ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对细胞增殖的影响，以及８－（Ｎ，Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３，４，５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）的作用，发现ＮＥ和ＡｎｇⅡ能明显引起ＢＡＳＭＣ增殖。１０μｍｏｌ／ＬＮＥ和１μｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ可诱导最大增殖，增殖率分别为７７．８％和９７．９％，ＴＭＢ－８能浓度依赖性地抑制其作用，３０μｍｏｌ／ＬＴＭＢ－８的抑制率分别为４０．０％和５２．２％。

自来水中余氯测定之TMB配制探讨

对TMB的配制的介质浓度、配制方法及其助溶温度等诸因素进行了探讨 ,拟定了自来水中余氯测定的TMB溶液配制的具体方法、助溶温度和介质酸度等 ,解决了生活饮用水卫生规范中测定水中余氯用TMB显色无法与标准色阶进行比色的实际问题。

改良TMB比色法替代^(51)Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究

目的建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的33,’,55,’-四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法。方法利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化33,’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600 nm处的检测体系。采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞。比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照。在ADCC实验中,分别用51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率。结果显色反应结束后加硫酸酸终止测定最大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600 nm。不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075 g/L,显色时间20min,TMB最优浓度是0.62 g/L,空白吸收始终稳定的维持在<0.003的较低值。而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5 g/L。显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法。在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4 h孵育时间以及2.5×106 cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14 h并且需要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量。用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999)。结论改良TMB比色法可以代替51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应。加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测。

TMB余氯快速测试盒的实验研制

目的研制TMB余氯快速测试盒,满足现场测定生活饮用水的出厂水、末梢水、二次供水及公共场所游泳池水中余氯质量浓度的需要。方法利用余氯与TMB在酸性溶液中生成黄色醌式化合物测定水中余氯含量。①显色体系pH值的确定及总余氯读数时间的确定;②测试盒标准比色系列浓度的确定;③比色用玻璃的选择。结果①整个体系的pH值调节在1.52,在此pH值条件下可以避免体系颜色发生变化。总余氯的读数时间设定在11 min;②测试盒标准比色系列浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.8和1.0mg/L;③根据抗暴及透光性,选择用高硼玻璃来制作标准系列管及样品比色管。结论 TMB余氯快速测试盒可满足上述水中余氯质量浓度测定的需要。

市售单组分TMB显色液质量比较

目的比较市售单组分TMB显色液的质量。方法选购4种国内外代表性产品,从外观、灵敏度、稳定性等几个方面进行对比。结果两种进口试剂的灵敏度高于两种国产试剂,但本底高于国产试剂。37℃5d加速稳定试验发现,进口试剂和国产试剂均保持稳定,但进口试剂本底显著升高。结论市售单组分TMB显色液质量参差不齐,价格相差甚远。

TMB氧化荧光法测定痕量Cr(Ⅵ)

在酸性介质中,TMB(3.3,5,5-四甲基联苯胺)在Cr(Ⅵ)的强氧化作用下(两个CN被氧化成C—N,生成H2O)形成蓝色的TMBox,当λex=283 nm在λem=402 nm的位置产生的荧光峰,随着Cr(Ⅵ)浓度的增加,生成的蓝色产物越多,荧光信号逐渐上升,在一定范围内呈现良好的线性关系,采用此反应建立了一种可靠,灵敏的荧光测定Cr(Ⅵ)痕量新方法。

TMB为ELISA底物检测血吸虫病的研究

ＴＭＢ为ＥＬＩＳＡ底物检测血吸虫病的研究戴晓斌张世雯吴子松黄启华四川省寄生虫病防治研究所在诊断血吸虫病中，我们参照张素娥报道的ＥＬＩＳＡ〔１〕，将底物改为３，３，５，５－四甲基联苯胺（ＴＭＢ），用于血吸虫病抗体检测，结果满意，现报道如下。１材料１．１...

一种新的HRP-AChE双重染色法-TMB-ST法结合Karnovsky和Roots法联合反应

乙酰胆硷酯酶(AChE)和辣根过氧化物酶(HRP)联合反应是追踪胆硷能神经通路的常用方法之一.但目前所用的方法仍存在HRP的反应灵敏度不高、有较多背景沉淀的缺点.为此,本文试验了以显示HRP的高灵敏度的四甲基联苯胺(TMB)-钨酸钠(ST)和AChE显色法联合反应的程序,以期得到一种较理想的HRP-AChE联合反应方法.

工艺配方对PE-HD/E-TMB共混物MFR的影响

用自制增韧母料(E-TMB)和PE-HD热机械共混制得PE-HD/E-TMB共混物,研究了E-TMB中弹性体不同配比[乙丙弹性体(M)/丁苯弹性体(N)]、基体树脂和弹性体不同配比(H/E)、不同阻交联剂、阻交联剂二甲亚砜(DMSO)的不同用量,以及PE-HD/E-TMB共混物中弹性体含量对共混物熔体流动速率(MFR)的影响。结果表明,PE-HD/E-TMB共混物的MFR随M/N中丁苯弹性体比例的增加而减小,随H/E中弹性体比例的增加而增大,随共混物中弹性体含量的增加而减小;含3种不同阻交联剂的E-TMB所得PE-HD/E-TMB共混物的MFR值差别不大且均低于纯PE-HD,当E-TMB中DMSO用量为0.024 mol时,PE-HD/E-TMB共混物的MFR值出现极小值为2.8 g/10 min。

母料中阻交联剂对HDPE/E-TMB共混物力学性能及熔体流动速率的影响

以HDPE为基体树脂,乙丙弹性体(M)和丁苯弹性体(N)为增韧剂,加入适量引发剂、阻交联剂等,通过化学反应研制出2种聚乙烯增韧母料E1-TMB和E2-TMB,将2种增韧母料与HDPE热机械共混制得HDPE/E1-TMB和HDPE/E2-TMB共混物。研究了阻交联剂类型及用量对共混物力学性能和熔体流动速率的影响。结果表明,当增韧体系中弹性体含量为8%,使用阻交联剂3且含量为1.7%时,HDPE/E2-TMB共混物的综合力学性能最好。

TMB-8对去甲肾上腺素和BHQ引起新生大鼠单个脑细胞内游离钙增高的影响

应用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统，研究ＴＭＢ８对体外新生ＳＤ大鼠单个脑细胞内游离钙的抑制作用及其机制。结果表明，在无细胞外钙情况下，静息［Ｃａ２＋］ｉ为７９±１３ｎｍｏｌ·Ｌ－１。ＴＭＢ８１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１能明显降低静息［Ｃａ２＋］ｉ。ＴＭＢ８１００μｍｏｌ·Ｌ－１对高钾去极化引起的［Ｃａ２＋］ｉ显著增高无明显影响。在细胞外钙为１３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，去甲肾上腺素诱导的细胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高可部分被ＴＭＢ８抑制；ＴＭＢ８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对ＢＨＱ引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高无明显抑制作用。而当细胞外液［Ｃａ２＋］ｉ为０时，ＴＭＢ８几乎完全抑制了去甲肾上腺素和ＢＨＱ的作用。提示ＴＭＢ８降低脑细胞内游离钙的作用机制是通过促使细胞内钙进入肌浆网以抑制内钙的释放，并通过饱和肌浆网内Ｃａ２＋间接地阻滞细胞膜钙通道。