TMEM16A在肿瘤中的作用

TMEM16A作为一种CaCC在多种肿瘤中过表达,TMEM16A的过表达可以促进肿瘤细胞的增殖、转移和侵袭、抑制肿瘤细胞凋亡,且与许多肿瘤的不良治疗与预后高度相关,是一种肿瘤治疗的潜在靶点和生物标志物。本文就TMEM16A的结构功能、在多种肿瘤中的体内表达情况、在肿瘤的发生发展过程中可能存在的作用机制进行综述,总结近年来TMEM16A在肿瘤的表达与调控中的研究进展,尝试为TMEM16A在肿瘤中的治疗提供新的理论依据。

表观遗传修饰介导恶性肿瘤高表达TMEM16A的机制探讨

TMEM16A作为钙激活的电压依赖性氯通道广泛分布于体内多种组织器官,介导了腺体分泌、平滑肌收缩及肠道慢波形成等多种生理功能。研究证实TMEM16A在多种恶性肿瘤组织中如乳腺癌、肺癌、胶质瘤等高表达,且与患者的预后呈负相关。其高表达的机制涉及到基因扩增、转录水平及转录后水平的调控,该文主要探讨表观遗传学介导恶性肿瘤中TMEM16A高度表达的相关信号通路,为深入探索其介导恶性肿瘤病理进程提供理论基础。

基于生信分析探究TMEM16A的表达对胶质瘤的影响及实验验证

目的探究TMEM16A在胶质瘤中的生物信息学功能及临床意义。方法利用TIMER2.0和GEPIA数据库进行泛癌分析,评价TMEM16A在肿瘤组织与正常组织中的表达差异;使用GEPIA和CGGA数据库研究TMEM16A的表达对胶质瘤患者预后的影响;利用GeneMANIA和STRING数据搭建蛋白互作网络,筛选互作蛋白;通过富集分析研究TMEM16A相关的信号通路和生物学功能;通过TIMER2.0数据库对TMEM16A与免疫细胞浸润表达水平的相关性进行研究,以评价其对肿瘤微环境的影响,然后使用MTT实验进行验证。结果TMEM16A在众多肿瘤中表达上调,对胶质瘤的进展具有促进作用,可以作为胶质瘤的独立预后因子,在蛋白互作网络中证明TEMEM16A与CFTR相互作用,共同调节胶质瘤细胞的进展;富集分析进一步显示了TMEM16A在胶质瘤中作用的分子机制,TMEM16A在TNF、AMPK信号通路上富集,与肿瘤免疫微环境相关;免疫细胞浸润水平结果表明,TMEM16A与多种免疫细胞的浸润水平呈显著正相关。体外实验结果证实,TMEM16A的抑制剂能够有效降低胶质瘤细胞的增殖。结论TMEM16A的表达与胶质瘤的进展相关,TMEM16A可能是治疗胶质瘤的潜在靶点,可作为胶质瘤治疗的生物标志物。

TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用SD小鼠分离心肌细胞，分为4组，空白组正常培养细胞，模型组建立心肌缺血再灌注损伤模型，对照组在模型建立后采用Cl-free培养，实验组在模型建立后加入终浓度为0．1mmol／LTMEM16A氯通道抑制剂，记录和观察细胞存活率，GSH—Px、SOD、MDA、LDH酶活性变化及细胞内的Ca^2＋含量，TMEM16A、NF—KB表达变化情况。结果模型组与空白组比较细胞存活率降低、LDH升高（P〈0．05），对照组、实验组与模型组相比细胞存活率均升高，LDH均降低（P〈0．05）。模型组与空白组相比，细胞悬液中MDA含量升高，SOD、GSH—Px降低（P〈0．05），对照组、实验组与模型组比较细胞悬液中MDA含量降低，SOD、GSH—Px活性升高（P〈0．05）。空白组心肌细胞Ca^2＋含量为13．44±11．43，模型组为207．13±19．33，对照组和实验组为43．55±5．39和24．59±3．19，模型组最高（P〈0．05）。模型组的TMEM16A、NF—KB蛋白相对表达水平最高，其次为对照组，实验组和空白组最低，两两对比差异都有统计学意义（P〈0．05）。结论TMEM16A氯通道在心肌缺血再灌注损伤中起了重要作用，与增加细胞内氧化应激作用、NF—KB活性、细胞内Ca^2＋含量有一定的相关性。

TMEM16A通过激活NF-κB促进脑胶质瘤恶性进展的机制研究

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)对脑胶质瘤恶性进展的影响及作用机制。方法使用shRNA或慢病毒构建TMEM16A敲低的U87MG和LN229胶质瘤细胞系,并设置阴性对照组(Scrb shRNA)和shRNA组。使用GV141-TMEM16A质粒构建TMEM16A过表达细胞系,并设置空载体对照组(Vector)和TMEM16A过表达组。实时荧光定量PCR检测TMEM16A和IκBα的mRNA表达。Western Blot和免疫组织化学染色检测蛋白表达。CCK8、EdU、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验分析细胞活力、增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭等生物学特征。双荧光素酶报告基因系统检测TMEM16A对NF-κB活性的影响。放线菌酮追逐实验和免疫共免疫沉淀研究TMEM16A活化NF-κB信号通路的机制。颅内小鼠脑胶质瘤模型评价TMEM16A在体对胶质瘤形成的影响。结果与癌旁对照组织或与正常星形胶质细胞(NHA)相比,TMEM16A的表达在胶质瘤组织和细胞中显著增加,并且TMEM16A的表达水平随胶质瘤的等级增加而升高。与Scrb shRNA组相比,敲低TMEM16A能有效阻止U87MG和LN229细胞的增殖、迁移以及侵袭,并可引发细胞的周期性停止以及凋亡。Western Blot显示,与Scrb shRNA组相比,TMEM16A敲低组细胞中,p21、p27、Bax、cl-caspase-3和E-cadherin表达明显升高;cyclin D1、cyclin E1、CDK2、CDK4、Bcl-2、TWIST1、N-cadherin、Vimentin、Slug、MMP2和MMP9表达下调。此外,TMEM16A通过泛素化介导的IκBα蛋白降解促进NF-κB信号通路的激活。体内实验结果表明,与Scrb shRNA组相比,TMEM16A敲低组小鼠胶质瘤的形成明显受到抑制。结论TMEM16A/NF-κB轴驱动脑胶质瘤的发生发展,并为胶质瘤的治疗提供依据。

TMEM16A在结肠癌组织中的表达及其意义

目的:探讨Ca2+激活的氯离子通道(Ca2+-activated Cl-channels,CaCC)蛋白TMEM16A在结肠癌中的表达和意义.方法:收集67例结肠癌标本,采用免疫组织化学SP法检测TMEM16A的表达,以癌旁结肠黏膜组织和6例结肠腺瘤组织作为对照,1例胃间质瘤组织作为阳性对照.结果:TMEM16A表达于结肠癌细胞胞膜和胞质内,在67例结肠癌中TMEM16A呈不同程度阳性表达,其中阴性占5.97%(4/67)、弱阳性占16.42%(11/67)、阳性占29.85%(20/67)、强阳性占47.76%(32/67);在癌旁结肠黏膜腺体内大多呈阴性和弱阳性表达,其中阴性占40.30%(27/67)、弱阳性占52.24%(35/67)、阳性占4.48%(3/67)、强阳性占2.99%(2/67);在6例结肠腺瘤中均呈阳性表达.将阴性和弱阳性表达分为阴性组,将阳性和强阳性表达分为阳性组进行分析,在67例结肠癌中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")占77.61%(52/67),而在相应的癌旁组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")仅占7.46%(5/67),两者之间差异显著(P<0.005).结论:TMEM16A可高表达于结肠癌组织,可作为结肠癌的分子诊断和靶向治疗的一个新的候选靶点.

PAR2和TMEM16A在神经病理性疼痛模型大鼠背根神经节上的表达及意义

目的观察坐骨神经慢性压迫模型(CCI)的大鼠背根神经节(DRG)神经元上PAR2和TMEM16A的表达,探讨其在神经病理性疼痛中发挥的作用。方法大鼠分为假手术组(Sham)和CCI组,两组分别检测热缩足反射潜伏期(TWL);采用免疫荧光和Western blot检测大鼠DRG神经元上PAR2和TMEM16A表达。结果与Sham组比较,CCI组术前TWL差异无统计学意义,术后各时间点均明显降低且差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光结果显示:PAR2与TMEM16A在大鼠DRG神经元上共存。Western blot结果显示:与Sham组相比,CCI组术后7、14 d的PAR2和TMEM16A蛋白表达均出现明显增加(P<0.01),且CCI组14 d高于7 d的PAR2和TMEM16A蛋白表达(P<0.05)。结论神经病理性疼痛大鼠DRG神经元上PAR2和TMEM16A蛋白表达水平较Sham组显著升高,这些蛋白表达水平升高可能是导致大鼠神经病理性疼痛的原因之一。

Ki67、Tmem16a和ILK在眼睑基底细胞癌中的检测意义

目的探究Ki67增殖指数(Ki67)、Tmem16a蛋白(Tmem16a)和整合素连接激酶(ILK)在眼脸基底细胞癌患者组织中的检测价值。方法分析2011年5月至2014年10月在我院接受治疗的52例(52只眼)眼睑基底细胞癌患者的手术标本(观察组)。另外分别选取基底细胞乳头状瘤患者手术后的蜡块组织和切缘、正常的鳞状上皮手术后对应的蜡块组织各38例(38只眼)作为本实验的对照组和正常组。比较3组的基线资料、Ki67、Tmem16a和ILK的阳性表达率等。结果本研究发现3组基线资料的组间差异无统计学意义(P>0.05)。3组中Ki67、Tmem16a和ILK阳性表达率组间差异有统计学意义(P<0.05),且正常组阳性率最低,观察组最高。观察组中的Ki67、Tmem16a和ILK的阳性表达与脉管的转移及侵犯、肿瘤体积相关(P<0.05)。结论眼睑基底细胞癌患者手术后组织中呈高表达状态的Ki67、Tmem16a和ILK对肿瘤的发展起共同促进的作用,其中Tmem16a和ILK能通过对ki67表达的促进来发挥一定的作用。

TMEM16A调控血管平滑肌功能的研究进展

钙激活性氯离子通道(CaCC)存在于多种不同组织中,介导了众多的生理病理过程。跨膜蛋白16A(TMEM16A)为CaCC重要的分子基础,主要表达于血管平滑肌细胞,影响血管重塑。对TMEM16A进行研究可以为多种疾病提供新的治疗靶点。本文就TMEM16A的分子结构、TMEM16A在血管平滑肌细胞中的表达以及调节血管平滑肌细胞的作用机制等进行综述。

TMEM16A在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨TMEM16A氯通道在食管鳞状细胞癌发生发展中的意义。方法运用RT-PCR、Westernblot方法分别从mRNA水平、蛋白水平检测食管鳞状癌细胞TE-1细胞株中TMEM16A的表达;运用免疫组织化学PV法,检测食管癌组织TMEM16A蛋白的表达。结果 TE-1细胞株及食管癌组织均表达有TMEM16A通道,并且免疫组化结果表明不同分化程度的食管鳞癌组织中,高、中、低分化程度的阳性表达率分别为38.5%、62.5%、90%,三者比较差异有显著性(P<0.05)。TMEM16A在淋巴结转移组中的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(71.4%vs 22.2%,P<0.05)。结论 TMEM16A的表达可能在肿瘤发生发展过程中发挥了一定的作用,TMEM16A在食管癌组织中的表达有望为食管癌的分子诊断和基因治疗提供新的靶点。

TMEM16A通道结构、功能与药物靶点

TMEM16A(也称ANO1)是钙激活氯离子电流(CaCCs)的分子基础。研究表明,TMEM16A参与调节卵母细胞的受精、气道和外分泌腺分泌、嗅觉和感觉信号的传导、平滑肌的收缩以及心脏细胞的兴奋。TMEM16A的功能障碍或表达异常与多种疾病的发生发展有关,包括胃肠道功能障碍、神经性疼痛和多种癌症。本文综述了本课题组和其他课题组对TMEM16A通道的研究进展,主要聚焦于TMEM16A通道的结构和功能,TMEM16A通道的生理、病理功能及以该通道作为靶点的药物发现。最终讨论了TMEM16A药理调节剂可能的药理作用方案。TMEM16A的结构和相关疾病的知识将对TMEM16A调节剂药物的发现和应用产生积极影响。

稳定表达TMEM16A蛋白TE-1细胞株的构建与鉴定

目的建立稳定表达TMEM16A蛋白的TE-1肿瘤细胞株。方法用Lipofectamine 2000转染试剂将TMEM16A基因转染到TE-1细胞,经G418筛选,使用激光共聚焦显微镜和Western blot技术检测TMEM16A基因是否在TE-1细胞中已经稳定表达。结果通过使用G418进行筛选,阳性克隆于4周后培养形成。激光共聚焦显微镜观察稳定表达TMEM16A蛋白的TE-1细胞可见细胞发出绿色荧光。Western blot结果表明,未稳转细胞和稳转细胞系统均表达有TMEM16A蛋白,而稳转细胞系统的蛋白水平明显高于未转染细胞系统的蛋白水平。结论利用脂质体转染方法成功构建了稳定表达TMEM16A基因的TE-1细胞系。

钙激活氯通道TMEM16A在大鼠心房和心室中的表达差异

目的探究钙激活氯通道(Ca CCs)TMEM16A在大鼠心房和心室组织中的表达情况,为临床治疗心肌缺血、心律失常以及心力衰竭等疾病提供新的治疗靶点。方法 2014年10月—2015年9月,将18只清洁级SpragueDawley大鼠适应性饲养1周,采用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉后取心脏,分离心房和心室组织进行实验。采用Western blotting法和实时荧光定量反转录PCR(RT-q PCR)法分别检测大鼠心房和心室组织中TMEM16A及其mRNA水平。结果大鼠心房和心室组织TMEM16A水平分别为(0.46±0.02)和(0.33±0.03),心房和心室组织TMEM16A mRNA水平分别为(3.55±0.17)和(1.00±0.03),大鼠心房组织中TMEM16A及其mRNA水平高于心室组织(P<0.01)。结论 Ca CCs TMEM16A在大鼠心房和心室组织中均有表达,其在心房组织中的水平高于心室组织。

Notch-1和TMEM16A在食管鳞癌组织中表达及临床意义

目的探讨Notch-1和TMEM16A在食管鳞癌组织中表达及临床意义。方法采用免疫组化S-P法检测55例食管鳞癌组织中Notch-1和TMEM16A蛋白表达,并分析二者与食管鳞癌患者临床病理特征之间关系。结果食管鳞癌组织中Notch-1表达显著低于正常食管组织(P<0.05),而TMEM16A表达显著高于正常食管组织(P<0.05),二者表达呈负相关(r=-0.497,P=0.001)。二者表达均与食管鳞癌分化程度和淋巴结转移有关。Notch-1蛋白表达还与TNM分期、肿瘤浸润深度有关(P<0.05),结论食管鳞癌组织中Notch-1和TMEM16A蛋白表达呈负相关,二者在食管鳞癌发生、发展及生物学行为过程中可能起重要作用。

TMEM16A与肺动脉高压大鼠肺血管重构和增殖关系

目的探讨肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重构、增殖与TMEM16A蛋白表达的关系。方法将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为对照组、模型2周组和模型4周组,每组各10只。对照组单次腹腔注射体积分数为0.01的DMSO溶剂,模型组单次腹腔注射野百合碱50 mg/kg。应用小动物超声系统测定各组的肺加速时间(PAT)、射血时间(ET)、PAT/ET间接评估肺动脉压力,测定3组大鼠的右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红染色检测肺血管重塑等病理学指标,采用Western blot方法检测TMEM16A和PCNA蛋白的相对表达量,免疫荧光化学法检测各组肺血管平滑肌组织TMEM16A的表达。结果模型4周组PAT/ET较对照组明显降低(F=20.98,t=5.76,P<0.05)。对照组、模型2周组和模型4周组RVHI、血管横截面管壁面积与血管面积比值(WA%)和肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比(WT%)逐渐增高,且3组间RVHI、WT%、WA%比较差异均有统计学意义(F=166.60~234.26,t=4.37~21.03,P<0.05)。3组间TMEM16A和PCNA蛋白表达比较差异均有显著性(F=286.00、427.03,t=7.50~26.00,P<0.05)。对照组、模型2周组、模型4周组肺血管平滑肌组织TMEM16A的表达逐渐增加。3组的TMEM16A与WA%、PCNA,PCNA与WA%之间均呈正相关(r=0.901~0.969,P<0.05)。结论 TMEM16A表达水平均随造模时间延长而升高。TMEM16A表达与野百合碱诱导的PAH大鼠肺血管重构与增殖呈正相关,提示TMEM16A可能是PAH疾病进展中的重要蛋白。

尼氟灭酸对CCI模型鼠DRG神经元TMEM16A表达的抑制作用

目的：观察尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）干预后,TMEM16A在坐骨神经压榨性损伤（chronic constriction injury,CCI）模型鼠背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）神经元上的表达,研究TMEM16A是否参与神经病理性疼痛。方法：制备CCI模型,热板实验检测热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）。在模型制备后第1 d开始以腹腔注射形式给予不同浓度的NFA干预14 d,取大鼠L4-6 DRG神经元进行实验。免疫荧光实验明确TMEM16A在DRG神经元中的分布;运用RTPCR技术和Western Blot技术在给予不同浓度NFA干预后,检测CCI模型DRG神经元上TMEM16A的mRNA水平和蛋白的表达。结果：（1）CCI组的TWL较正常组明显缩短,给予10μM、50μM和300μM的NFA干预后,各组TWL较CCI组均明显延长（P〈0.01,n=6）;50μM的NFA干预组较10μM的NFA干预组TWL也明显延长（P〈0.05,n=6）;但300μM的NFA干预组与50μM的NFA干预组相比,TWL时间差异无统计学意义。（2）免疫荧光显示TMEM16A主要存在于DRG神经元上;（3）CCI组mRNA水平较正常组明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元TMEM16A的mRNA水平较CCI组逐渐降低,差异具有统计学意义（P〈0.01,n=6）。（4）CCI组TMEM16A蛋白表达较正常组的明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元上TMEM16A蛋白表达较CCI组逐渐减低,差异具有统计学意义（P〈0.01,n=6）。结论：尼氟灭酸能抑制神经病理性疼痛大鼠DRG神经元TMEM16A的表达,而且与尼氟灭酸的剂量相关,提示钙激活氯通道可能参与或调控神经病理性疼痛的发生。

钙激活氯通道蛋白TMEM16A在小鼠心肌组织的表达

目的探讨钙激活氯通道蛋白TMEM16A在小鼠心肌组织的表达。方法采用RT-PCR和免疫荧光染色方法,检测小鼠心肌组织中TMEM16A的表达。结果小鼠心肌组织中检测到TMEM16A mRNA和蛋白的表达。结论小鼠心肌存在TMEM16A通道蛋白。

TMEM16A：一种钙离子激活的氯离子通道

钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)是一类在多种细胞中广泛表达的氯离子通道,介导一系列重要的生理功能。TMEM16A(transmembrane protein 16A)于2008年被确认为CaCCs的分子身份之一。TMEM16A在多种病理生理过程中发挥重要的作用,如卵母细胞多重受精、分泌上皮细胞的液体分泌、平滑肌收缩、神经元兴奋、膜电位调节、感官信号传导以及肿瘤的发生和细胞迁移。近年来,TMEM16A在病理生理学中的作用及其在疾病治疗中的药靶地位受到高度重视。本文对TMEM16A研究的最新进展进行综述。

TMEM16A与p-p38在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义

目的探讨TMEM16A和磷酸化p38(p-p38)的相互关系及在乳腺浸润性导管癌组织中表达的临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测60对乳腺浸润性导管癌及相应癌旁组织中TMEM16A和p-p38蛋白的表达情况,对TMEM16A和p-p38表达与乳腺癌临床病理特征关系进行统计学分析,并分析TMEM16A和p-p38表达的相关性,探讨其表达与乳腺癌患者预后的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织中TMEM16A的表达阳性率明显高于相应癌旁组织中TMEM16A的表达阳性率。TMEM16A表达与乳腺癌患者组织学分级、淋巴结转移显著相关。乳腺浸润性导管癌组织中p-p38的表达阳性率为60%,而相应癌旁组织中未见明显p-p38的阳性表达。p-p38表达与乳腺癌患者TNM分期、淋巴结转移显著相关。乳腺浸润性导管癌组织中TMEM16A和p-p38的表达呈正相关关系。TMEM16A和p-p38高表达的乳腺浸润性导管癌患者术后无复发生存期低于低表达者的生存期。结论TMEM16A与p-p38表达与乳腺浸润性导管癌恶性表型有关,TMEM16A可能通过激活p38促进乳腺浸润性导管癌的转移,TMEM16A和p-p38的表达可辅助用于乳腺浸润性导管癌的预后评估。

TMEM16A的表达下调对骨骼肌细胞分化的影响

TMEM16A(Transmembrane Protein 16A)是一种钙离子(Ca^2+)激活的氯离子通道(Calcium-activated Chloride Channels,CaCCs),在机体内广泛表达,具有重要的生理功能.迄今为止,TMEM16A在骨骼肌发育中的作用及机制尚无报道.本研究利用TMEM16A特异性抑制剂T16A inh-A01首次探讨了其表达下调对骨骼肌细胞分化的影响.研究发现,T16A inh-A01处理显著抑制C2C12和原代成肌细胞的肌分化.进一步研究发现,T16A inh-A01明显抑制肌分化过程中生肌素Myogenin的表达.研究结果提示,TMEM16A的钙激活氯通道活性可能参与了骨骼肌细胞的分化过程,具体的作用机制有待进一步研究.