白芍总苷对动脉粥样硬化大鼠TNF-α/P38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路及其血清IL-17,IL-27,IL-33影响的研究

目的:观察白芍总苷(Total glucosides of paeony,TGP)对动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)大鼠TNF-α/P38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路的影响及对血清中白细胞介素-17 (Interleukin-17,IL-17),白细胞介素-27 (Interleukin-27,IL-27),白细胞介素-33 (Interleukin-33,IL-33)的调节作用。方法:30只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组和TGP组,每组10只。除正常组外,模型组和TGP组大鼠均通过喂养高脂饲料结合腹腔注射维生素D3的方法建立大鼠AS模型,共12周,同时TGP组大鼠按照200 mg/(kg·d)剂量在造模过程中同步连续灌胃给药12周,正常组和模型组则同步给予等体积生理盐水。以上各组大鼠于建立模型第12周末处死,称取各组大鼠体质量及心脏组织质量计算心脏指数(Cardiac index,CI);HE染色观察各组大鼠主动脉形态结构病理学变化;采用ELISA试剂盒测定各组大鼠血清中IL-27、IL-17、IL-33的水平;采用蛋白印记法检测大鼠主动脉中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen activated protein kinase,p38MAPK)、核因子κB (Nuclear factor kappa-B,NF-κB)、视黄醇结合蛋白4 (Retinol-binding protein 4,RBP4)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠的CI、主动脉HE染色病理评分、细胞因子水平(IL-27、IL-17、IL-33)以及TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白相对表达量均显著增加(P <0.05);与模型组比较,TGP组大鼠的CI、主动脉HE染色病理评分、细胞因子水平(IL-27、IL-17、IL-33)以及TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白相对表达量均显著降低(P <0.05)。结论:TGP对AS大鼠心脏具有显著的保护作用,可改善其主动脉粥样硬化程度,同时抑制TNF-α/P38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路相关蛋白的表达,减少IL-17、IL-27及IL-33等炎症细胞因子的表达。

基于TNF-α/P38MAPK/P53通路研究养阴润目丸对TNF-α诱导的兔泪腺细胞损伤保护作用

目的:通过TNF-α诱导兔泪腺损伤建立干眼细胞模型,观察养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞存活、凋亡和炎症因子分泌的影响,以及调控TNF-α/P38MAPK/P53通路的作用,探讨养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞的保护作用及其机制。方法:原代分离培养泪腺细胞,并分为Con组、TNF-α组、Positive组和YYRM组。制备杞菊地黄丸、养阴润目丸的含药血清和无含药血清,给予相应干预后,采用MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6)的分泌水平,Western Blot法检测细胞中TNF-α、P38MAPK、P53蛋白的表达情况。结果:与Con组比较,TNF-α组泪腺细胞存活率显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),炎症因子IL-1β和IL-6分泌显著增多(P<0.05);与TNF-α组比较,Positive组和YYRM组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),炎症因子IL-1β和IL-6分泌显著减少(P<0.05)。TNF-α诱导后激活了TNF-α/P38MAPK/P53通路的关键蛋白表达,而养阴润目丸能抑制该系列的关键蛋白表达,且与杞菊地黄丸效果相近。结论:干眼的发病可能与激活TNF-α/P38MAPK/P53通路有关,养阴润目丸可下调TNF-α、P38MAPK和P53蛋白表达,从而减少炎症因子分泌,抑制其凋亡率,改善其存活率,提示养阴润目丸可能通过抑制TNF-α激活的TNF-α/P38MAPK/P53信号通路治疗干眼。

槲皮素对硅肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1、磷酸化P38MAPK表达及血清TNF-α水平的影响

目的:观察槲皮素对硅肺纤维化大鼠血清TNF-α水平、肺组织TGF-β1和磷酸化P38MAPK(pP38MAPK)表达的影响。方法:将75只大鼠随机分为对照组、模型组和槲皮素组,每组25只。模型组与槲皮素组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)制备硅肺纤维化大鼠模型;自造模后第2天开始,对照组和模型组大鼠每天腹腔注射0.5 mL生理盐水,槲皮素组每天按50 mg/kg剂量腹腔注射槲皮素,连续14 d。造模后第3、7、14、21、28天,每组分别处死5只大鼠,应用ELISA法检测血清TNF-α水平,免疫组化SP法检测肺组织TGF-β1的表达,Western blot法检测肺组织p-P38MAPK的表达。结果:模型组大鼠造模后第7天肺组织为明显的急性炎症表现,第14、28天肺组织炎症较前有所减轻,但纤维化程度增加。槲皮素组肺组织病理变化与模型组相似,但早期炎症反应和晚期纤维化程度都轻于模型组。模型组和槲皮素组大鼠血清TNF-α水平、肺组织TGF-β1和p-P38MAPK的表达均较对照组升高(P<0.05),第7或第14天达高峰,之后逐渐降低(P<0.05),但槲皮素组各指标低于模型组(P<0.05)。结论:槲皮素可能通过抑制P38MAPK通路的激活,抑制细胞因子TGF-β1和TNF-α生成,从而抑制SiO2诱导的大鼠肺纤维化过程。

P38 MAPK抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓TNF-α合成的影响

目的通过建立坐骨神经慢性压迫损伤模型,研究P38丝裂原激活蛋白激酶(P38 MAPK,P38)与TNF-α在神经病理性疼痛发生与发展中的相互作用。方法 SD大鼠分5组:1)空白对照组,2)假手术组,3)CCI手术未治疗组,4)CCI手术0.9%氯化钠注射液治疗组,5)CCI手术SB203580(P38抑制剂)治疗组。上述治疗组中,0.9%氯化钠注射液或SB203580分别于术前1天、术后第1和第7天鞘内注射。各组大鼠分别于术后3、7和14 d测定机械痛阈。采用Western blot和免疫组化方法测定脊髓中TNF-α含量及P38活化水平。结果与假手术组相比,CCI手术后3、7和14 d磷酸化P38(p-P38)水平分别增加275%±65%、267%±66%和253%±56%(P<0.05)。外周神经损伤后引起机械性触诱发痛,并且使脊髓中TNF-α浓度增加,与对照组相比术后3、7和14 d时TNF-α浓度分别增加93%±22%、73%±25%和52%±15%(P<0.05)。预先或术后立即给予SB203580抑制P38活化可以减少脊髓TNF-α合成,使其降至接近对照组水平,从而有效缓解病理性疼痛。结论外周神经损伤后,作为信号传导通路之一的P38可能通过促进脊髓TNF-α合成,引发神经病理性疼痛。

P38在LPS诱导大鼠雪旺氏(Schwann)细胞TNF-α表达中的作用

研究P38对脂多糖(LPS)诱导的大鼠雪旺氏细胞(Schwann cell)肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)表达的作用.采用Western印迹检测细胞中P38激酶的活性;用P38的特异性抑制剂(SB202190)预处理细胞后,用ELISA检测细胞中TNF-α水平;RT-PCR检测细胞中TNF-αmRNA的表达;用免疫荧光双标法检测磷酸化P38的表达定位.LPS可显著激活雪旺氏细胞中的P38信号通路,其激活高峰在LPS刺激后15～30min,60min后,P38磷酸化水平开始逐渐下降,120min时又升高;用SB202190预处理细胞后,可显著抑制细胞TNF-αmRNA以及TNF-α的表达;LPS刺激细胞后通过与细胞膜表面Toll-like receptor 4(TLR4)结合后引起P38磷酸化,SB202190可抑制该过程.P38信号通路的激活可能是LPS诱导TNF-α表达的前提.通过阻断细胞内信号转导通路来减少TNF-α及其它细胞因子的产生,为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新的思路.

基于信号通路p38 MAPK探讨疏风宣肺汤对大鼠慢性支气管炎模型TNF-α的影响

目的观察疏风宣肺汤对慢性支气管炎大鼠血清以及肺组织中肿瘤坏死因子(tumornercrosisfactor-α,TNF-α)的影响。方法将60只SPF级大鼠,随机分为空白组、生理盐水组、宣肺止咳合剂组和疏风宣肺汤组,每组15只;空白组正常饲养,余组采用脂多糖-香烟烟雾诱导法造模成功后分别予以生理盐水、宣肺止咳合剂、疏风宣肺汤灌胃,1周后行腹主动脉采血,剪下右肺,检测血清中TNF-α浓度,肺组织中TNF-αmRNA、TNF-α蛋白以及p-p38MAPK蛋白的表达。结果在药物干预7d后,各组大鼠血清中TNF-α浓度以及肺组织中的TNF-αmRNA、TNF-α蛋白、p-p38MAPK蛋白的表达差异性均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,疏风宣肺汤组,生理盐水组、宣肺止咳合剂组中各检测指标差异有统计学意义(P<0.05);与生理盐水组相比,疏风宣肺汤组和宣肺止咳含剂组差异有显著性统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论疏风宣肺汤能显著降低慢支大鼠血清中TNF-α浓度以及肺组织TNF-αmRNA、TNF-α蛋白、p-p38MAPK蛋白表达,减少p38MAPK信号通路的活化可能是疏风宣肺汤有效防治慢性支气管炎的机制之一。

右心衰、结核及肿瘤性患者胸腔积液中性粒细胞内p38蛋白对IFN-γ及TNF-α表达的影响及意义

目的观察右心衰、结核及肿瘤患者胸腔积液内中性粒细胞p38蛋白对IFN-γ及TNF-α表达的影响,探寻胸腔积液内中性粒细胞分布差异的原因。方法选取71例胸腔积液患者,收集其胸腔积液内中性粒细胞。根据胸腔积液内中性粒细胞的患者病因来源,分为心衰组(HF组)、结核组(TB组)、恶性组(CA组);加入SB203580处理的结核组,记为TB+SB203580组;加入SB203580处理的恶性组,记为CA+SB203580组。收集同期健康体检20人外周血并收集其内中性粒细胞,记为对照组。裂解以上各组中性粒细胞,采用Realtime PCR检测各组IFN-γmRNA、TNF-αmRNA表达水平;Western-blot检测各组p38蛋白、磷酸化p38蛋白、IFN-γ及TNF-α表达水平。结果各组p38蛋白表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组磷酸化p38蛋白表达与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);各组IFN-γmRNA、TNF-αmRNA表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论右心衰、结核性以及恶性胸腔积液内中性粒细胞中的磷酸化p38蛋白升高,可导致中性粒细胞内IFN-γ和TNF-α在转录及蛋白表达水平升高,而SB203580通过抑制p38蛋白磷酸化降低结核组及肿瘤组的IFN-γ和TNF-α的表达水平,这种机制参与了中性粒细胞在不同病因的胸腔积液内的分布差异。

三七总皂苷通过p38 MAPK通路抑制内毒素诱导的小胶质细胞活化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS)。CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度。利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化。结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度。Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P>0.05)。此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P>0.05)。结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达。

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经p38丝裂素活化蛋白激酶及血浆肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK)及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨其神经保护及镇痛机制。方法 SD雄性大鼠60只,随机选取10只为正常组,其余大鼠采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素诱发2型糖尿病大鼠模型。成模后随机分为模型组、甲钴胺组和糖痹康低、中、高剂量组,每组10只。各给药组给予相应药物干预。16周后取大鼠一侧坐骨神经,放免法检测大鼠血浆TNF-α含量;Western blot检测大鼠坐骨神经p38、p-p38 MAPK蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经p38、p-p38蛋白表达及血浆TNF-α含量升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠血浆TNF-α含量和坐骨神经p-p38蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),各给药组p38蛋白表达降低,但只有糖痹康高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖痹康下调大鼠坐骨神经p38、p-p38 MAPK蛋白表达和血浆TNF-α含量,可能是其糖尿病周围神经病变神经保护及镇痛作用靶点之一。

槐果碱对SNI致神经病理性疼痛小鼠脊髓组织TLR4/p38 MAPK的影响

目的观察槐果碱(sohpocarpine,SC)对坐骨神经分支保留性损伤(spared nerve injury,SNI)致小鼠神经病理性疼痛的缓解作用,并探讨其部分作用机制。方法将60只♂ICR小鼠随机分为6组,分别为:假手术组(control)、神经病理性疼痛模型组(model)、普瑞巴林阳性对照组(SNI+普瑞巴林10 mg·kg^(-1))、槐果碱高、中、低剂量组(SNI+sophocarpine 40、20、10 mg·kg^(-1))。采用SNI法建立小鼠神经病理性疼痛动物模型,于术前1 d、术后d 7(给药前d 1)及给药后1、3、5、7 d测定小鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)、热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及冷缩足反射次数(cold withdrawal times,CWT);采用RT-PCR和Western blot法检测槐果碱对SNI损伤小鼠脊髓组织TLR4、p38 MAPK、IL^(-1)β、TNF-αm RNA及蛋白表达的影响。结果与假手术组比较,SNI致神经病理性疼痛模型组小鼠术后PWMT明显降低、PWTL明显缩短、CWT明显增多;小鼠脊髓组织p38 MAPK、TLR4、TNF-α、IL^(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显上调。与模型组小鼠比较,SNI+槐果碱40 mg·kg^(-1)组小鼠给药后PWMT明显升高、PWTL延长、CWT减少;小鼠脊髓组织p38MAPK、TLR4、TNF-α、IL^(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显下调。结论槐果碱对SNI致神经病理性疼痛有较好的缓解作用,其机制可能与其下调TLR4、p38 MAPK、IL^(-1)β及TNF-α表达水平有关。

Fas/FasL、p38 MAPK通路在溃疡性结肠炎大鼠中的表达及雷公藤多苷的作用

目的探讨Fas/FasL及p38 MAPK信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达变化,以及雷公藤多苷(TWP)对其的影响。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型。对大鼠结肠炎症进行评分;以表达谱技术分析Fas/FasL的差异表达,并用real-time PCR技术进行验证;继而DAVID数据库信号通路分析显示,Fas/FasL调节UC的炎症活动涉及p38 MAPK信号通路,同时在表达谱中分析此信号通路中的相关分子,并以real-time PCR法加以验证;最后采用RT-PCR法及Western blot法检测该信号通路末端炎症因子的表达。结果 UC大鼠结肠炎症评分明显升高,TWP能明显降低其炎症评分; Fas/Fas L系统及p38 MAPK通路中的Fas L、MAPK14(p38α)、TNF-α、IL-1β在UC大鼠炎症活动时均呈上调表达,TWP能够明显下调上述指标的表达。结论 TWP能够通过Fas/Fas L系统及p38MAPK信号通路对UC炎症活动进行调控。

电针对痛觉敏化诱发大鼠脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶/肿瘤坏死因子-α的影响

[目的]观察电针(electroacupuncture,EA)对痛觉敏化诱发模型大鼠造模侧热痛阈(thermal paw-withdrawal latency,TPWL)、机械性痛阈(mechanical paw-withdrawal threshold,MPWT)及脊髓背角p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。[方法]第一部分:按完全随机法将健康雄性SD大鼠分为3组,其中空白组5只、假敏化组5只、敏化组6只用于MPWT检测;各组其余6只大鼠分别用于用于TPWL检测。造模方法:敏化组采用1%角叉菜胶100μL左后足足底皮下注射,待痛阈恢复至基础水平后,以100ng·25μL^-1前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)25μL注射于左足足背中央,建立痛转化模型;空白组两次均注射等量0.9%氯化钠注射液;假敏化组第1次注射等量0.9%氯化钠注射液,第2次注射等量PGE2,浓度与剂量同敏化组。大鼠造模前、第1次注射后4、24、48、72h和7d,第2次注射(第1次注射后8d)后1、4、24、48h检测MTWP和TPWL。以Western blot法检测第2次注射后48h造模侧脊髓背角p38MAPK和TNF-α蛋白表达。第二部分:将大鼠随机分为假敏化组、敏化组、EA组、假电针(sham electroacupuncture,sham EA)组,每组12只,其中6只用于MPWT检测;其余6只用于TPWL检测。假敏化组和敏化组造模方法同第一部分,EA组和sham EA组造模方法同敏化组。第1次注射后,EA组大鼠于双侧"足三里""昆仑"穴行EA干预,1次/d,共10次;sham EA组仅针刺入大鼠皮下。各组大鼠痛阈检测时间同第一部分。以Western blot法检测第2次注射后48h造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α蛋白表达。[结果]与空白组和假敏化组比较,第1次注射后4、24、48和72h,第2次注射后4、24、48h,敏化组造模侧MPWT和TPWL显著降低(P<0.01,P<0.01),说明痛觉敏化诱发模型造模成功。与空白组和假敏化组比较,敏化组大鼠造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α表达增高(P<0.01,P<0.01)。与敏化组比较,第1次注射后24、48、72h及第2次注射后4、24、48h,EA组造模侧的MPWT和TPWL明显升高(P<0.01,P<0.01),而sham EA组并不能提高大鼠痛阈,痛阈变化趋势与敏化组一致。与假敏化组比较,敏化组造模侧脊髓背角中p38 MAPK和TNF-α表达增高(P<0.01,P<0.01)。与敏化组比较,EA组造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α表达减低(P<0.05,P<0.05),而sham EA组p38 MAPK和TNF-α表达高于假敏化组(P<0.01,P<0.01),与敏化组无统计学差异(P>0.05,P>0.05)。[结论]EA具有良好的镇痛作用并能够干预痛转化效应,其机制可能与下调造模侧脊髓背角p38 MAPK和TNF-α的表达有关。

破裂型椎间盘突出重吸收过程中P38MAPK信号通路的作用

目的 :构建大鼠自体尾椎破裂型椎间盘突出冲吸收动物模型,探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinases,P38MAPK)信号通路在破裂型椎间盘突出重吸收中的作用。方法 :将40只3月龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组20只。采用刺破大鼠自体尾椎椎间盘,包埋至L4-5背部肌肉的方法制作破裂型椎间盘突出重吸收模型。实验组从造模至取材之日予腹腔注射P38MAPK特异性阻断剂SB203580;对照组予腹腔注射生理盐水,分别在造模1周和4周后处死并取出包埋的椎间盘,电子天平称重。计算1周末和4周末椎间盘减少质量,镜下观察椎间盘形态退变情况。Real Time PCR法检测P38MAPK、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的m RNA表达。Western Blot法检测TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-9及磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated p38mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)的蛋白表达。结果 :实验组1周时椎间盘质量减小0.47±2.90mg,4周时减少1.11±3.05mg,两组之间无统计学差异(P>0.05),对照组1周时椎间盘质量减小4.15±1.84mg,4周时减少10.56±3.29mg,两组之间存在统计学差异(P<0.05)。镜下可见,实验组4周时与1周时相比,组织形态无明显退变,对照组4周时与1周时相比,组织形态出现明显退变。Real Time PCR检测,1周时,实验组椎间盘髓核组织中TNF-α、p38MAPK、MMP-3、MMP-9的m RNA表达低于对照组(P<0.05);4周时,实验组TNF-α、IL-1β、p38MAPK、MMP-3的m RNA表达低于对照组(P<0.05)。Western Blot法检测,4周时,实验组椎间盘组织中TNF-α、P38MAPK、P-p38MAPK、MMP-3的蛋白表达低于对照组(P<0.05);对照组4周时椎间盘组织中TNF-α、IL-1β、P-p38MAPK的蛋白表达均高于1周时(P<0.05)。对照组髓核组织中P-p38MAPK与MMP-3、IL-1β、TNF-α的蛋白表达呈正相关(0<r<1,P<0.05)。结论 :P38阻断剂可能通过抑制髓核组织中P38MAPK的磷酸化,降低TNF-α、IL-1β、MMP-3、MMP-9的m RNA和蛋白体表达,从而抑制突出椎髓核组织重吸收。

p38 MAPK抑制剂对急性肺损伤的治疗作用

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对LPS诱导的兔急性肺损伤（ALl）的保护作用及其机制。方法用大肠杆菌内毒素（LPS）制备兔ALI模型；测定不同时间点的动脉血气分析、血清TNF—α和ICAM-1浓度；测量肺干／湿质量比值（肺D／W）及观察肺组织病理学改变。结果动物注射内毒素1h后PA-aO2、血浆TNF—α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显升高（P〈0．05），肺D／W下降（P〈0．05）；应用SB203580治疗后，PA-aO2、血浆TNF—α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显下降（P〈0．05），肺D／W升高（P〈0．05）。结论本研究结果表明，p38 MAPK抑制剂SB203580对内毒素诱导的ALI，可以明显减轻低氧血症、减轻肺水肿、改善组织病理学和减轻炎症反应。

大承气汤对脓毒症大鼠p38MAPK信号转导通路的影响

目的观察大承气汤对脓毒症大鼠肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）表达水平的影响，进一步揭示大承气汤治疗脓毒症的机制。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=20）、脓毒症组（n=20）、大承气汤组（n=20），应用大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）复制脓毒症模型。假手术组开腹轻扰肠管后关腹，脓毒症组、大承气汤组均为脓毒症模型。大承气汤组在术前2h和术后每4h予以大承气汤灌胃。分别于术后2、6、12、24h每组取5只大鼠，腹主动脉采血，用ELISA方法检测大鼠血浆IL-6、TNF—α浓度，取肝组织进行免疫组化检测及观察p38MAPK表达。结果与脓毒症组比较，大承气汤组大鼠肝脏p38MAPK表达水平受到抑制，炎症因子释放减少（P〈0．05）。结论大承气汤对脓毒症大鼠的肝脏产生保护作用，可能是由于抑制大鼠肝脏p38MAPK表达来实现的。

莫西沙星抑制内毒素诱导THP-1产生TNF-α和IL-8的分子机制

目的探讨莫西沙星抑制炎症反应的分子机制。方法培养THP-1单核细胞,使之与莫西沙星孵育后再用内毒素刺激,ELISA检测产生情况和westernblot分析p38信号通路的激活情况。结果莫西沙星能明显抑制内毒素诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-8,并能抑制p38的激活。结论莫西沙星能抑制TNF-α和IL-8的产生可能与其抑制p38的激活有关。

p38 MAPK在腹泻型肠易激综合征大鼠中的变化及其免疫调控作用

目的探讨p38 MAPK信号在腹泻型肠易激综合征大鼠中的免疫调控作用。方法将40只SPF级Wistar大鼠(雌雄各半),随机分为D-IBS模型Ⅰ(造模7 d)组、Ⅱ(造模14 d)、III(造模21 d)组及空白对照组,每组10只。模型组采用慢性束缚联合番泻叶灌胃法建模,空白对照组灌服同等体积的纯净水。D-IBS大鼠分别于建模第7天、第14天和第21天剖杀,空白对照组于第21天剖杀。心脏采血,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;剖取结肠组织,HE染色观察大鼠结肠组织形态学,免疫组化法测大鼠结肠组织中p38 MAPK的蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量和结肠p38 MAPK蛋白表达阳性率增高(P<0.05,P<0.01),且p38 MAPK的表达与IL-1β、IL-6和TNF-α的水平呈正相关。结论慢性束缚联合番泻叶灌胃法复建的D-IBS大鼠模型,可能存在通过激活p38 MAPK信号通路,可上调p38 MAPK的表达,促进IL-1β、IL-6和TNF-α的释放,诱发肠黏膜低度炎症反应。

CpG-ODN对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用研究

目的探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂——含Cp G基序的寡核苷酸(Cp G-ODN)对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用机制。方法 50只健康7日龄新生Wistar大鼠,♀♂不限,随机分为5组,假手术组、缺血/缺氧性脑损伤(HIBD)组、Cp G-ODN低剂量组(0.35m L·kg-1)、Cp G-ODN中剂量组(1.40 m L·kg-1)、Cp GODN高剂量组(5.60 m L·kg-1)。术后48 h对大鼠神经功能进行评分,光学显微镜下观察脑组织病理学改变。免疫印迹法检测缺血/缺氧侧脑组织中磷酸化p38 MAPK、TLR9表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α的表达。结果 Cp G-ODN低、中剂量组较模型组神经行为学评分降低,病理学损伤减轻,而高剂量组较模型组神经行为学评分升高(P<0.05),病理学损伤加重;Western blot分析结果表明,缺血/缺氧侧脑组织中磷酸p38 MAPK、TLR9蛋白表达逐渐上调,TNF-α在脑组织中含量逐渐升高(P<0.05)。结论 TLR9激动剂Cp G-ODN低、中剂量可改善新生大鼠脑缺血/缺氧损伤神经行为学评分及神经系统功能,减轻新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤,其机制可能是通过适度激活p38 MAPK信号通路,并分泌适量TNF-α发挥作用。

聚合度7-15的壳寡糖抑制脂多糖刺激的单核细胞产生TNF-α和IL-8的作用研究

本文通过建立脂多糖刺激的单核细胞炎症损伤模型,观察聚合度7-15的壳寡糖对炎性单核细胞白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,及对p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)信号通路磷酸化的影响。采用p38信号通路抑制剂(SB203580)验证抑制p38信号通路对脂多糖诱导的单核细胞表达IL-8和TNF-α的作用,从而探索壳寡糖抑制单核细胞炎性损伤的分子机制。结果表明壳寡糖可抑制脂多糖诱导的单核细胞表达IL-8和TNF-α,并且抑制p38信号蛋白的磷酸化水平。因此,初步认为壳寡糖可能通过抑制炎性U937细胞中p38MAPK信号通路抑制IL-8和TNF-α的表达。

肿瘤坏死因子-α抑制剂doramapimod的合成工艺改进

以4-硝基-1-萘酚为起始原料经烷基化、还原、成脲得到新型肿瘤坏死因子-α抑制剂doramapimod,总收率为31.1%。目标化合物和中间体的结构经1H-NMR和FAB-MS确证。该合成路线原料易得,路线短,成本低廉,操作简单。