中等强度有氧运动预干预下调小鼠骨骼肌TNF-R1水平并抵抗阿霉素诱导的骨骼肌萎缩

目的探讨进行长期中等强度有氧运动能否通过下调骨骼肌中TNF-α及其受体TNF-R1水平抵抗阿霉素诱导的骨骼肌萎缩,为运动抵抗阿霉素副作用提供方法建议。方法选用36只3月龄雄性C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,随机分为对照组(SED)和运动组(EXE),运动组进行8周中等强度跑台运动,对照组正常饲养;最后一次训练后进行最大跑速测试,结束后从SED和EXE组中随机抽取6只小鼠取材;剩余小鼠,SED组平均分为生理盐水组(SED-SAL)和阿霉素给药组(SED-DOX),EXE组平均分为运动后生理盐水组(EXE-SAL)和运动后阿霉素给药组(EXE-DOX)。SED-DOX组、EXE-DOX组小鼠腹腔注射阿霉素;SED-SAL组、EXE-SAL组小鼠注射对应体积生理盐水。给药结束后4组小鼠同时取材,取双侧股四头肌,H&E染色统计肌纤维横截面积,ELISA检测血浆TNF-α水平,WB检测股四头肌TNF-α、TNF-R1、PGC-1α、MuRF-1、Caspase-8蛋白表达水平。结果(1)与注射生理盐水的小鼠相比,注射阿霉素的小鼠最大跑速显著下降,体重、股四头肌质量显著下降,Ⅰ型、ⅡA型肌纤维数量显著减少,肌纤维横截面积显著减小,阿霉素给药导致小鼠骨骼肌萎缩;而8周中等强度有氧运动预干预,能显著减缓阿霉素引起的一系列骨骼肌不良反应,改善阿霉素导致的骨骼肌萎缩。(2)与注射生理盐水的小鼠相比,注射阿霉素的小鼠血浆TNF-α水平、股四头肌TNF-α及TNF-R1水平显著升高,且股四头肌中MuRF-1、Caspase-8蛋白表达水平显著升高,而8周中等强度有氧运动能显著抑制股四头肌TNF-α、TNF-R1、MuRF-1、Caspase-8水平。(3)8周中等强度有氧运动提高小鼠最大跑速,激活PGC-1α,抑制股四头肌TNF-α及TNF-R1表达水平。结论8周中等强度有氧运动抑制股四头肌TNF-α、TNF-R1表达水平,抑制阿霉素给药后TNF-α/TNF-R1通路下游的蛋白质降解和细胞凋亡反应,这可能是运动抵抗阿霉素诱导小鼠股四头肌萎缩的原因之一。

TNF-α通过TNF-R1促进小鼠肾上腺皮质细胞系Y1凋亡

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠肾上腺皮质细胞(Y1细胞)caspase8/3的影响是否主要通过TNF-R1。方法:小RNA干扰法下调Y1细胞中TNF-R1基因的表达,分光光度法分别检测一定浓度TNF-α对Y1细胞及TNF-R1基因干扰抑制后的Y1(miRNA-Y1)细胞caspase8/caspase3影响。结果:miRNA-Y1细胞TNF-R1基因的干扰效率为71.74%;TNF-α处理Y1细胞后,细胞caspase8/3活性明显升高(P<0.05);TNF-α处理miRNA-Y1细胞,细胞caspase8/3活性与未处理组相比无显著差异(P>0.05)。结论:TNF-α对Y1细胞caspase8/3活性的影响主要是通过TNF-R1受体实现的。

TNF-αmRNA、TNF-R1mRNA在慢性肝病肝组织中的表达及意义

目的 探讨TNF -α和TNF -R在慢性肝炎、肝硬化及肝癌发生、发展中的调节作用。方法 原位分子杂交法检测了 94例慢性肝病肝组织中TNF -αmRNA、TNF -R1mRNA的表达 ,其中慢性肝炎 2 8例、肝硬化 2 2例、肝癌 4 4例。结果 慢性肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌组织中TNF -αmRNA阳性率分别为 5 3.6 %、86 .4 %、4 3.2 % ;TNF -R1mRNA阳性率分别为 4 6 .4 %、90 .9%、38.6 %。两者同时阳性分别为慢性肝炎 7例 (2 5 % )、肝硬化 18例 (81.81% )、肝细胞肝癌 11例 (2 5 % ) ;两者同时阴性分别为 9例 (32 .14 % )、1例 (0 .0 5 % )、19例 (4 3.19% )。慢性肝炎与肝硬化TNF -αmRNA阳性率相比 ,P<0 .0 5 ,慢性肝炎与肝硬化TNF -R1mRNA阳性率相比 ,P <0 .0 1,差异有高度显著性 ;肝硬化与肝癌TNF -αmRNA和TNF -R1mRNA阳性率相比 ,P <0 .0 1,差异有高度显著性 ;慢性肝炎与肝癌TNF -αmRNA和TNF -R1mRNA阳性率相比 ,P >0 .0 5 ,差异无显著性。慢性肝炎的活动度越重其表达率越高 ,TNF -αmRNA和TNF -R1mRNA表达强度也强 ,肝硬化组的阳性强度最强 ,肝细胞肝癌组织表达与分化程度关系不密切。结论 TNF -α和TNF -R在肝硬化的发生、发展中起重要作用 ,对慢性肝炎亦有一定的作用 ;肝细胞肝癌时TNF -αmRNA和TNF

清热利湿中药对梗阻性黄疸大鼠肝PKC及TNF-R1表达的影响

目的:观察清热利湿中药对梗阻性黄疸大鼠肝PKC及TNF-R1表达的影响。方法:制作梗阻性黄疸大鼠模型,分为中药组、生理盐水组、模型组和假手术组,分别于3、7、14、21天处死大鼠,取肝组织标本固定、包埋、染色,采用免疫组织化学SABC法检测PKC、TNF-R1的表达。结果:随着时间的变化,盐水组与中药组PKC蛋白及TNF-R1蛋白的表达逐渐升高、到14天达高峰,而中药组PKC蛋白及TNF-R1蛋白的表达较盐水组明显偏低,且有显著性差异(P<0.05)。结论:清热利湿中药对PKC及TNF-R1蛋白表达有一定的抑制作用,可对抗肝细胞凋亡,保护肝功能。

Sh-RNAi对NG108-15细胞膜受体基因TNF-R1的干扰

目的NG108-15细胞膜肿瘤坏死因子(TNF)受体(TNF-R)1在受到基因干扰后,阿黑皮素原(POMC)、神经肽(NP)Y和刺鼠相关肽(AGRP)神经内分泌基因受到干扰的情况。方法采用sh-RNAi基因干扰技术干扰TNF-R1的基因表达,并利用RT-PCR技术检测TNF-R1、POMC、NPY和AGRP基因的表达情况。结果针对TNF-R1受体的膜外半胱氨酸富集区1(CRD1)所设计的sh-1干扰序列,对TNF-R1受体的基因表达具有明显的下调作用,并进而对POMC、NPY和AGRP等神经内分泌基因产生程度不同的下调影响。结论可通过sh-RNAi干扰技术来治疗TNF-α诱发的下丘脑神经内分泌性疾病。

尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2基因克隆及表达

为揭示TNF-α受体基因TNF-R1和TNF-R2在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程的作用,本研究利用RACE技术获得了TNF-R1和TNF-R2的cDNA。结果表明,TNF-R1 cDNA全长2275 bp,ORF区1335bp,编码444个氨基酸;TNF-R2 cDNA全长1719 bp,ORF区1476 bp,编码491个氨基酸。TNF-R1含3个富含半胱氨酸结构域(cysteine-rich domain,CRD)和一个死亡结构域(death domain,DD),而TNF-R2有4个CRD,缺少DD。系统进化分析表明:其TNF-R1和TNF-R2分别与其他脊椎动物TNF-R1和TNF-R2基因同源性很高,在进化树中TNF-R1、TNF-R2各自聚类且两者之间分支明显。实时荧光定量PCR结果表明:TNF-R1和TNF-R2在该鱼体的不同组织中均有表达,其中在鳃、头肾和脾脏中表达水平最高,而在肌肉、垂体中表达量低。用脂多糖(LPS)和多聚肌苷酸-胞苷酸(PolyⅠ:C)分别刺激离体孵育的该鱼头肾和脾脏白细胞可不同程度上调TNF-α、TNF-R1和TNF-R2的表达。无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染该鱼可显著上调头肾和脾脏中3种基因的表达。本研究对揭示TNF-R1和TNF-R2免疫调控机制,提高罗非鱼健康养殖水平具有一定参考价值。

针刺干预癌症相关性疲劳及对患者血清CRP、IL-6、TNF-α及sTNF-R1水平的影响

目的:探讨针刺干预癌症相关性疲劳的疗效及相关作用机制。方法:将80例癌症相关性疲劳患者随机分为观察组及对照组,实际完成病例67例(观察组36例,对照组31例)。对照组进行常规放化疗以及对症治疗,未采用特殊抗疲劳治疗;观察组在对照组治疗的基础上,配合针刺治疗,穴取百会、关元、气海、风池、足三里、三阴交,每日1次,5次为一疗程,疗程间休息2 d,干预4个疗程。记录两组患者干预前后中文版癌症治疗功能评估疲乏量表(FACT-F)、McGill生存质量问卷(MQOL)评分,以及干预前后血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及可溶性肿瘤坏死因子受体1(sTNF-R1)水平的变化。结果:(1)干预后,观察组FACT-F评分显著低于干预前(P<0.05),而对照组干预前后差异无统计学意义(P>0.05),观察组干预前后评分差值显著高于对照组(P<0.05)。(2)干预后,观察组MQOL中生理维度、心理维度评分降低(P<0.05),社会支持维度评分提高(P<0.05);观察组生理维度、心理维度及社会支持维度干预前后评分差值均高于对照组(P<0.05)。(3)干预后,观察组血清IL-6、TNF-α及sTNF-R1水平降低(P<0.05),对照组血清CRP、IL-6水平升高(P<0.05),且观察组血清CRP、IL-6、TNF-α水平低于对照组(P<0.05)。结论:(1)针刺可改善癌症相关性疲劳患者的低落情绪、虚弱、头痛等相关症状,并提高患者对获得社会、家庭支持方面的感知,增强患者治病的信心;(2)针刺可有效降低患者血清相关炎性细胞因子水平,这可能是针刺干预CRF的作用机制之一。

三七皂苷R1对LPS诱导的小鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨三七皂苷R1(Notoginsenoside R1)对内毒素诱导的C57BL/6J小鼠心肌损伤的保护作用,阐明其抗心肌炎症的作用机制。方法 C57BL/6J小鼠预防性给予三七皂苷R1 3 d后,注射LPS(10 mg.kg-1,ip)建立急性内毒素心肌损伤模型。采用超声心动测定射血分数(EF),缩短分数(FS)等指标,观察小鼠心功能;采用免疫组化检测心室肌中ED-1+和CD11b+炎性细胞的浸润情况;Western blot检测IκBα和NF-κB p65的表达变化;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌组织匀浆中TNF-α、IL-1β和VCAM-1、ICAM-1的表达水平。结果超声心动显示,与模型组(LPS组)相比三七皂苷R1能明显抑制LPS诱导的小鼠的左心室收缩功能减弱的情况;免疫组化可观察到R1有效抑制了ED-1+和CD11b+细胞的侵入;Western blot法显示R1对IκBα的降解具有抑制作用,同时对由此产生的NF-κB的活化也具有抑制作用;ELISA实验显示与模型组相比,R1明显降低了组织中TNF-α、IL-1β的浓度,抑制心肌组织中VCAM-1和ICAM-1的表达。结论三七皂苷R1对LPS引起的心肌炎症具有明显的抑制作用,能有效改善由此导致的心肌损伤。

三七皂苷R1对高糖诱导HK-2细胞转分化的作用及其机制研究

目的:探讨三七皂苷R1对高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)间质转分化(EMT)的作用及其可能机制。方法:传代培养HK-2细胞,并将细胞分为4组:对照组、高渗组、高糖组、高糖+三七皂苷R1组,均培养48h。采用MTT法筛选药物浓度,western blotting法检测炎症相关蛋白NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测EMT标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、人纤维连接蛋白(FN)的表达。结果:MTT显示60μmol/L以下为三七皂苷R1的安全范围。高糖组、高糖+三七皂苷R1组NF-κB p65、TNF-α、α-SMA、FN蛋白表达均显著高于对照组和高渗组(P<0.05),高渗组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与高糖组相比,高糖+三七皂苷R1组NF-κB p65、TNF-α、α-SMA、FN表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:三七皂苷R1可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,减轻炎性反应,延缓肾间质纤维化,其机制可能与抑制NF-κB/TNF-α信号通路有关。

TNF-α多肽抑制剂的合成及初步活性筛选

目的初步探究TNF-R1的胞外区第四功能域CRD4衍生多肽对TNF-α与受体TNF-R1结合过程的影响。方法以CRD4的部分序列为模板设计衍生小肽片段,采用生物活性酶联免疫吸附测定法(Bio LISA)观察所合成的小肽对于TNF-α与其受体TNF-R1结合情况的影响。结果小肽Pep 3在浓度分别为20,40,60,80,100,120μM可剂量依赖性抑制TNF-α与其受体TNF-R1的结合;然而肽段Pep 1和Pep 2均未表现明显的抑制效果。结论 TNF-R1的CRD4的A1模块衍生小肽Pep 3能够有效抑制TNF-α与其受体TNF-R1结合,提示该序列所在区域是影响TNF-α与其受体TNF-R1结合的关键部位。

艾灸对慢性溃疡性结肠炎小鼠内脏高敏及结肠组织炎性反应的影响

目的:观察艾灸“足三里”对慢性溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)、瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)表达的影响,探讨艾灸改善慢性UC内脏高敏的可能机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠按体质量随机分为正常组、正常+艾灸组、模型组、模型+艾灸组,每组10只。以2.5%的葡聚糖硫酸钠循环3个周期饮用法建立慢性UC模型。正常+艾灸组和模型+艾灸组小鼠予以“足三里”艾灸,每次20 min,每周连续干预5 d,休息2 d,共4周。评价各组小鼠治疗前后的疾病活动指数(DAI)评分;测定各组小鼠腹壁回撤反射(AWR)最小容量阈值以观察小鼠肠道敏感性;测量各组小鼠结肠长度;HE染色观察各组小鼠结肠组织病理变化;过碘酸雪夫染色检测各组小鼠结肠组织杯状细胞中的黏液素分泌;Masson染色观察各组小鼠肠道纤维化情况;免疫荧光染色法检测各组小鼠结肠组织类胰蛋白酶阳性细胞数(即肥大细胞数)及TNF-α表达水平;免疫组织化学法检测各组小鼠结肠组织TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平。结果:艾灸治疗后,与正常组相比,模型组小鼠DAI评分升高(P<0.001),AWR最小容量阈值降低(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.001),结肠组织炎性浸润明显,深入基底层,黏液素分泌减少(P<0.01),胶原纤维增加(P<0.001),结肠组织中肥大细胞数量增加(P<0.001),TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平均明显升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,模型+艾灸组小鼠DAI评分降低(P<0.01),AWR最小容量阈值升高(P<0.001),结肠长度增加(P<0.001),炎性细胞浸润减少,黏膜肠腺结构完整性增加,黏液素分泌增多(P<0.01),胶原纤维减少(P<0.001),结肠组织中肥大细胞数量减少(P<0.001),TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达水平均明显降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。正常+艾灸组小鼠各项指标与正常组相比差异无统计学意义。结论:艾灸可减轻慢性UC小鼠内脏高敏,减轻肠道肥大细胞炎性浸润及纤维化损伤,该效应可能与艾灸下调结肠TNF-α、TNF-R1、P38 MAPK、TRPV1表达有关。

PKC在人肾小球系膜细胞IP3R1表达中的作用

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF-α）对人肾小球系膜细胞（HMCs）IP，R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用，以期为肝肾综合征（HRS）肾小球滤过率下降的发生机制提供理论依据。方法用实时定量PCR和免疫印迹检测IP3R1mRNA和蛋白表达的情况，并分别用蛋白激酶c（PKC）激动剂PMA、PKCct、PKCB特异性抑制剂及HA—DN—PKCct质粒转染干预上述诱导实验检测IBRl的表达变化。此外，免疫印迹检测TNF-α对P-PKCct蛋白的表达影响。结果TNF-α明显上调IRRl蛋白和mRNA表达。PMA、PKCcx抑制剂Safingol和HA-DN-PKCoL质粒瞬时转染预处理HMCs后，均能明显阻断TNF-α诱导IP3R1蛋白的表达，而PKCB抑制剂Rottlerin预处理后，对IRR1蛋白表达无明显影响。此外，TNF-α刺激HMCs，各不同时间组总PKCct蛋白表达无明显差异，而TNF-α刺激8hp-PKCα蛋白表达明显增加。结论TNF-α能上调人系膜细胞IP3R1蛋白及mRNA的表达，TNF-α活化PKCct是TNF-OL上调帔R1表达的重要上游信号。

β-细辛醚对氧糖剥夺/复糖复氧诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用机制研究

目的:研究β-细辛醚对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导人源性神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的影响。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组、OGD/R组、β-细辛醚(10、20、40、80μg/mL)组和依达拉奉(15μg/mL)组。CCK-8法检测细胞存活率,微量酶标法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,以确定β-细辛醚最佳作用剂量;倒置相差显微镜观察细胞形态;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α);免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体-1(TNF-R1)蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,OGD/R组的细胞存活率显著下降(P<0.01),LDH释放率显著增加(P<0.01),细胞形态明显受损,TNF-α浓度和TNF-R1蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。与OGD/R组比较,β-细辛醚(20、40、80μg/mL)均可增加细胞存活率和降低LDH释放率(P<0.01),其中β-细辛醚20μg/mL作用最佳。β-细辛醚20μg/mL可使细胞形态得到改善,细胞内TNF-α浓度和TNF-R1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:β-细辛醚能够改善OGD/R诱导SH-SY5Y细胞损伤,并且该作用机制可能是通过抑制OGD/R损伤中的TNF-α和TNF-R1实现改善神经损伤。