解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ表达的影响

目的:观察解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ表达的影响,探讨其拮抗肝衰竭的作用机制。方法:采用D-氨基半乳糖联合内毒素腹腔注射法构建小鼠急性肝衰竭动物模型,并分别予解毒化瘀颗粒、乳果糖、安宫牛黄丸干预治疗,HE染色观察肝脏病理改变,TUNEL法检查肝细胞凋亡率,免疫组化检测小鼠肝脏TNFRⅠ与TNFRⅡ的表达。结果:解毒化瘀颗粒干预组肝组织凋亡、坏死程度轻于模型对照组,免疫组化检测的肝脏TNFRⅠ表达量少于模型对照组(P<0.05),TNFRⅡ表达多于模型对照组(P<0.05)。结论:解毒化瘀颗粒可通过下调肝组织TNFRⅠ的表达、上调TNFRⅡ的表达途径抑制肝细胞凋亡,延缓肝脏坏死的进展。

TNFR Ⅱ基因-196M/R多态性与乳腺癌易感性的相关性

目的探讨TNF-α受体Ⅱ(TNFR Ⅱ)基因第6外显子-196M/R多态性与中国北方女性乳腺癌发病的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测TNFR Ⅱ基因-196M/R多态性,分析212例乳腺癌患者(实验组),218例乳腺良性病变患者(良性组)和220例健康对照者(对照组)的TNF-α受体Ⅱ(TNFR Ⅱ)基因多态性与乳腺癌易感性的关系。结果(1)650例研究对象中存在TNFR Ⅱ基因-196M/R多态性。(2)-196M/R位点的TG+GG基因型及G等位基因频率在良性病变组与对照组间差异无统计学意义,而在乳腺癌组则显著高于良性病变组和对照组(均P(0.05)。结论TNFR Ⅱ基因-196M/R在乳腺癌组和对照组存在多态性,第6外显子-196M/R位点T/G多态性可能为乳腺癌发病的易感基因位点,G等位基因可能为中国北方女性乳腺癌发病的易感基因。

肿瘤坏死因子α受体Ⅱ196基因多态性与中国成都地区汉族早产的相关性研究

目的探讨肿瘤坏死因子α受体Ⅱ基因(TNFRⅡ基因)第6外显子196位点基因多态性与中国成都地区汉族早产的关系。方法采集四川大学华西第二医院、四川省妇女儿童医院46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)和50例正常足月分娩者的外周静脉血,采用Chelex-100法提取DNA,PCR限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测TNFRⅡ基因第6外显子196位点基因多态性。结果①TNFRⅡ基因第6外显子196位点基因型196 M/M(TT)、196 M/R(TG)+196R/R(GG)频率在早产组和正常对照组分别为71.7%、21.7%+6.5%和80.0%、20.0%+0.0%;等位基因R(G)、M(T)频率在早产组和正常对照组分别为17.4%、82.6%和10.0%、90.0%;两组基因型分布频率和等位基因出现频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。②早产组不同基因型与绒毛膜羊膜炎的相关性分析显示TNFRⅡ基因TG+GG基因型与早产绒毛膜羊膜炎的发生密切相关(χ2=11.088,P<0.05),TG+GG基因型OR值为12.65,95%CI为2.359～67.848,其发生绒毛膜羊膜炎的几率是TT基因型的12.65倍。结论TNFRⅡ基因第6外显子196位点多态性在成都地区汉族早产发病的遗传易感因素中不起主要作用,但其与早产绒毛膜羊膜炎发生相关。

肿瘤坏死因子α及其Ⅱ型受体基因多态性在石棉肺发病中的作用

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)及其Ⅱ型受体(TNFRⅡ)基因多态性在石棉肺发病遗传易感性中的作用及其与石棉肺纤维化程度的联系。[方法]选择37例石棉肺患者和52例石棉尘接触者为研究对象,拍摄高仟伏X射线后前位胸片,按尘肺病诊断标准进行诊断和分期;采集研究对象的外周静脉血,应用PCR-RFLP技术检测TNF-α及TNFRⅡ基因多态性。[结果]TNF-α基因-308A在石棉肺患者和石棉接触者中的分布频率分别为13.5%和3.85%,P=0.018;TNFRⅡ基因196G在石棉肺患者和石棉接触者中的分布频率分别是12.2%和7.7%,P=0.317。石棉肺患者和石棉尘接触者1∶1匹配后,TNF-α(-308)突变型(G/A+A/A)的OR为8,χ2=4,P<0.05;TNFRⅡ基因196突变型(T/G+G/G)OR为3,χ2=1.125,P>0.05。[结论]TNF-α(-308)位点的基因多态性对汉族人群石棉肺的发生及其严重程度有关;TNFRⅡ(196)位点的基因多态性对汉族人群石棉肺的发病可能无关。

MIF调节巨噬细胞系RAW264.7中TNF-alpha Ⅱ型受体的表达

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在调节固有免疫和获得性免疫中发挥重要作用,在炎症、败血症和自身免疫疾病中都有它的参与.MIF可以刺激巨噬细胞表达TNF-α、IL-1#、IL-6和IL-8等多种细胞因子.在最近的研究中发现,外源性的MIF可以上调RAW264.7细胞中TNF-αⅡ型受体的mRNA水平,细胞自分泌的MIF对维持TNF-αⅡ型受体的基线水平有很大作用.这种调节作用可以被Src和JNK抑制剂所阻断.在巨噬细胞活化过程中,MIF这一新发现的功能提示它在放大炎症信号的同时,还能消减TNF-α可能引起的凋亡和细胞毒等副作用.

肿瘤坏死因子-α及其Ⅱ型受体基因多态性与煤工尘肺的遗传易感性

[目的]探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因-308位点、肿瘤坏死因子Ⅱ型受体(TNFRⅡ)基因196位点的基因多态性与煤工尘肺病遗传易感性的关系。[方法]采用病例对照研究方法,选择接尘工龄大于1年,无免疫系统疾病史, 除尘肺患者外,对照组接触工人无肺部疾病史,以问卷调查和现场体检方式收集职业接触史、既往病史、家族史和尘肺诊断史,采集每个研究对象静脉血3 ml,采用盐析法从外周静脉血的有核细胞中提取DNA。按文献报道的合成序列引物、采用PCR扩增反应和RFLP技术分析TNF-α和TNFRⅡ。[结果]TNF-α-308位点G/A+A/A基因型和TNFRⅡ196位点T/ G+G/G基因型分布频率在成组或1:1配对分析中,煤工尘肺患者和煤尘接触者两组间差异均无显著性(P>0.05)。G/A+A/A 基因型频率在Ⅲ期煤工尘肺患者中为20.00%,高于煤尘接触者(10.91%)、Ⅰ期(10.34%)和Ⅱ期煤工尘肺患者(7.50%);1:1 配对后G/A+A/A基因型携带者发展成Ⅲ期煤工尘肺的危险性是G/G基因型的3倍(95%CI:0.35-25.84)。[结论]TNF-α基因-308位点和TNFRⅡ基因196位点多态性在中国汉族煤工尘肺发病的遗传易感因素中不起主要作用。TNF-α基因-308 位点多态性可能与煤工尘肺重度纤维化相关联,值得进一步研究证实;TNFRⅡ基因196位点与煤工尘肺纤维化程度无关。

七氟醚联合瑞芬太尼用于产科全身麻醉对炎性细胞因子的影响

目的:不同全身麻醉方案应用于剖宫产手术,通过监测产妇血浆中炎性细胞因子浓度来评估应激反应的变化。方法:60例产妇随机分为七氟醚组(S组)与异丙酚组(P组),每组30例。记录产妇各时点的血流动力学数值、血中炎性细胞因子浓度、术中情况及新生儿情况。结果:P组麻醉诱导后、胎儿娩出时平均动脉压、心率与麻醉诱导前比较,差异有统计学意义(P<0.05),与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。P组术毕时及术后24 h的IL-6、TNF-α浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05);P组术毕及术后24 h的s TNFRⅡ浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :七氟醚联合瑞芬太尼的剖宫产全身麻醉方案,安全有效,能抑制应激反应,有效预防术中显性记忆的发生。

TNFRⅡ转基因诱导喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子受体2(tumor necrosis factor receptor 2,TNFRⅡ)转基因结合TNFα局部注射诱导喉鳞状细胞癌裸鼠模型肿瘤细胞的凋亡和杀伤肿瘤的效果,为喉鳞状细胞癌的基因治疗开辟新途径。方法:在利用人喉鳞状细胞癌Hep2细胞建立人喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型的基础上,以脂质体为载体采用体内转基因技术,活体转染人类TNFRⅡ并联合局部TNF-α注射,采用肿瘤大体观察、流式细胞术、免疫组织化学、TuneⅠ、透射电镜等方法观察TNFRⅡ转染前后肿瘤细胞TNFRⅡ表达水平、肿瘤细胞凋亡情况,综合评价对肿瘤杀伤和抑制的效果。结果:裸鼠喉癌移植瘤模型的成瘤率为94.5%。活体转基因48hTNFRⅡ表达水平达最高峰并在72h内维持较高水平。免疫组织化学方法证实TNFRⅡ主要表达在肿瘤细胞的细胞膜上,空质粒转染组肿瘤细胞几乎无TNFRⅡ表达。2000UTNFα局部注射对肿瘤的诱导凋亡和杀伤的抑制效率最高,表现为在TNFRⅡ转基因组动物治疗结束时肿瘤的体积为(1161.333±166.555)mm3,瘤体重量为(1.100±0.832)g,瘤/鼠重为0.044±0.332,凋亡率为(38.226±13.671)%,与空质粒转染对照组相比具有明显差别。Tunel和超微结构观察发现前者的细胞凋亡明显高于后者。结论:通过TNFRⅡ活体转基因提高其蛋白表达水平可以明显提高TNFα局部注射杀伤喉癌移植瘤模型动物肿瘤细胞的效果,其机制是通过更有效诱导细胞凋亡来实现的。活体TNFRⅡ转基因结合TNFα局部注射有可能成为喉癌基因治疗的一个有效方法。

感染性早产患者血清、胎盘组织TNFRⅡ的表达水平及其与TNFRⅡ 196基因多态性的关系

目的探讨肿瘤坏死因子α受体Ⅱ(TNFRⅡ)基因第6外显子196T→G多态性与早产合并绒毛膜羊膜炎遗传易感性的关系。方法对46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)母血、胎盘组织和同期50例足月正常产母血、20例胎盘组织进行研究。应用RT-PCR技术测定胎盘组织中TNFRⅡmRNA的表达水平;采用ELISA法测定母血清可溶性TNFRⅡ(sTNFRⅡ)水平。采用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对TNFRⅡ第6外显子196位点进行基因分型,分析该位点不同基因型间早产患者胎盘TNFRⅡmRNA和母血sTNFRⅡ水平的差异。结果①在早产患者中TNFRⅡ基因196位点TG(GG)基因型与TT基因型比较,其对应的TNFRⅡmRNA、sTNFRⅡ均有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。②孕妇胎盘组织中TNFRⅡmRNA及血清中sTNFRⅡ水平在早产感染组增高,差异有统计学意义(P<0.05),在早产非感染组和正常足月产组间差异无统计学意义(P>0.05)。早产组不同基因型与绒毛膜羊膜炎的相关性分析显示,TNFRⅡ基因TG+GG基因型与早产绒毛膜羊膜炎的发生可能相关(χ2=11.088,P<0.05),TG+GG基因型OR值为12.65,95%CI为2.359～67.848,其发生绒毛膜羊膜炎的几率是TT基因型的12.65倍。结论 TNFRⅡ基因第6外显子196位点突变不引起早产孕妇TNFRⅡ转录、翻译水平改变,该基因196位点多态性却与感染性早产孕妇血清sTNFRⅡ、胎盘组织TNFRⅡmRNA表达水平的增高有关,该位点多态性可以成为早期预测、诊断感染性早产的指标。

ERAP1、TNFR-Ⅰ、TNFR-Ⅱ在寻常型银屑病皮损组织中的表达

目的探讨内质网氨肽酶(ERAP1)、肿瘤坏死因子受体Ⅰ(TNFR-Ⅰ)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNFR-Ⅱ)在寻常型银屑病皮损组织中的表达及意义。方法选取新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科2015年至2017年期间经临床、病理明确诊断为寻常型银屑病的皮损石蜡组织标本共20例及15例正常皮肤组织,应用免疫组化Envision法检测其组织中ERAP1、TNFR-Ⅰ、TNFR-Ⅱ的表达,并检验其相关性。结果⑴正常皮肤组织中,ERAP1主要表达于表皮基底层;在寻常型银屑病皮损组织中,ERAP1呈弥漫阳性表达。寻常型银屑病皮损组织中ERAP1阳性表达的细胞数多于正常皮肤组织,两组间差异有统计学意义(Z=-4.170,P<0.001)。⑵TNFR-Ⅰ在正常皮肤组织呈弥漫阳性表达。在寻常型银屑病皮损组织表皮中,TNFR-Ⅰ主要表达于表皮棘层,表现为上强下弱型,棘层的表达较基底层强,两组间表达差异有统计学意义(χ2=17.740,P<0.001)。⑶正常皮肤组织中,TNFR-Ⅱ不表达;在寻常型银屑病皮损组织表皮中,TNFR-Ⅱ在基底细胞层及棘层呈不同程度弥漫阳性表达,两组之间的表达差异有统计学意义(χ2=17.500,P<0.001)。⑷寻常性银屑病皮损组织表皮中ERAP1的表达与TNFR-Ⅰ呈负相关(rs=-0.662,P=0.001);ERAP1的表达与TNFR-Ⅱ无明显相关性(P=0.139)。结论 ERAP1、TNFR-Ⅰ、TNFR-Ⅱ可能在寻常型银屑病的发病机制中起重要作用,它们之间可能相互作用,调节靶细胞增殖和凋亡,以维持寻常型银屑病表皮的异常增殖及良性增生状态。

肿瘤坏死因子-α及其Ⅱ型受体基因多态性与煤工尘肺

目的 探讨肿瘤坏死因子 α(TNF α)及其Ⅱ型受体 (TNFRⅡ )基因多态性在煤工尘肺发病遗传易感性中的作用及其与煤工尘肺纤维化程度的联系。方法 选择 2 34例汉族煤工尘肺患者和4 4 0例煤尘接触者为研究对象 ,拍摄高仟伏X射线后前位胸片 ,按尘肺病诊断标准进行诊断和分期 ;采集研究对象的外周静脉血 ,应用多聚酶链反应 -限制片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测其TNF α及TNFRⅡ基因多态性。结果 TNF α - 30 8位点G A +A A基因型和TNFRⅡ 196位点T G +G G基因型分布频率在成组或 1∶1配对分析中 ,煤工尘肺患者和煤尘接触者两组间差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。G A +A A基因型频率在Ⅲ期煤工尘肺患者中为 2 0 .0 0 % ,高于煤尘接触者 (10 .91% )、Ⅰ期(10 .34% )和Ⅱ期煤工尘肺患者 (7.5 0 % ) ;1∶1配对后 ,G A +A A基因型携带者发展成Ⅲ期煤工尘肺的危险性是G G基因型的 3倍 (95 %CI:0 .35～ 2 5 .84 )。结论 TNF α和TNFRⅡ基因多态性在汉族煤工尘肺发病的遗传易感性中不起主要作用。TNF α基因多态性可能与煤工尘肺纤维化严重程度相关。

重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白联合甲氨蝶呤治疗中重度活动性类风湿关节炎的临床和放射学疗效评估

目的评价重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白（TNFRⅡ-Fc，商品名：安佰诺）治疗中重度活动性类风湿关节炎（RA）的临床和影像学疗效。方法396例RA患者随机分为联合用药组、TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组，疗程均为24周，单因素方差分析美国风湿病学会（ACR）-N、ACR20、ACR50、ACR70、疾病活动指数（DAS）28和治疗前后双手的X线sharⅡ评分（SHS）等疗效和安全性指标。结果治疗24周后，ACR—N的年改善率联合组为（12．79±9．24）％，TNFRⅡ-Fc组为（9．56±11．16）％，甲氨蝶呤组为（5．08±11．10）％，联合用药组优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组（P〈0．05），TNFRⅡ-Fc组优于甲氨蝶呤组（P〈0．05）。ACR20的达标率联合组（80．4％）优于TNFRⅡ-Fc组（71．1％）和甲氨蝶呤组（56．7％），差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。治疗24周后，联合组ACR50和ACR70的达标率分别为53．6％和27．7％，TNFRⅡ-Fc组为41．2％和15．8％，甲氨蝶呤组为30．8％和7．7％，联合组ACR50达标率优于甲氨蝶呤组（P〈0．01），联合组ACR70达标率优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组（P〈0．05或P〈0．01）。联合组的DAS28-红细胞沉降率（ESR）改善优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组，差异有统计学意义（P〈0．05）。双手SHS评分治疗前后差值联合组（-11．7±11．2）较甲氨蝶呤组（2．1±11．5）显著下降（P=0．03）。联合组不良反应发生率（40．9％）高于甲氨蝶呤组（28．8％），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究显示TNFRⅡ-Fc联合甲氨蝶呤较单独使用TNFRⅡ-Fc或甲氨蝶呤能更有效控制RA的活动性和影像学进展。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对类风湿关节炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞亚群的调节作用

目的观察活动期类风湿关节炎（RA）患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞数量和比例的变化，探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（TNFRⅡ-FC）对调节性T细胞亚群的调节作用。方法①选择40例活动期中重度RA患者，按随机、双盲、平行、安慰剂对照的原则分为TNFRⅡ-Fc＋甲氨蝶呤联合治疗组和甲氨蝶呤对照治疗组，共治疗12周，采用流式细胞术分析并比较2组患者治疗前后外周血CD4^＋D25^＋FOXP3^＋调节性T细胞的表达比例，并同期选择40名健康体检者作平行比较。②比较2组患者治疗不同时期疼痛视觉模拟评分法（VAS）、28个关节疾病活动指数（DAS28）、健康评估问卷（HAQ）平均分。计量资料组间比较采用配对t检验。结果①活动期RA患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例显著低于健康对照组[（5．4±1．4）％与（7．5±1．5）％，P〈0．01]；TNFRⅡ-Fc^＋甲氨蝶呤联合治疗12周后，CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例显著高于治疗前[（7．0±1．2）％与（5．2±1．6）％，P〈0．01]。联合治疗组CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例增高的幅度显著高于甲氨蝶呤治疗组[（7．0±1．2）％与（5．6±0．7）％，P〈0．01]。②治疗12周后，联合治疗组VAS评分、DAS28评分、HAQ平均分均优于甲氨蝶呤组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TNFRⅡ-Fc联合甲氨蝶呤治疗的疗效优于单纯甲氨蝶呤治疗，TNFRⅡ-Fc可提高活动期RA患者血中CD4^＋D25^＋调节性T细胞比例，可能是其治疗RA的一个重要机制。

rhTNF-α对人精子凋亡率和膜表面肿瘤坏死因子受体Ⅱ表达量影响的实验研究

目的：研究重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）在体外对人精子凋亡率和精子膜表面肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNFR-Ⅱ）表达量的影响，探讨rhTNF—α在体外对人精子质量影响的作用机制。方法：26例检验合格精液标本经Percoll液洗涤处理，Ham，sF10液将精子密度调整为10x10。／ml，每份标本各取3m1分装于两支无菌试管（1．5ml／管），分为空白对照组和实验对照组两组，每组26份标本。空白对照组试管内不加rhTNF—α，实验对照组加入终浓度为270μg／ml的rhTNF-α，置37℃、5％CO2培养箱孵育2h，然后用流式细胞仪分别检测两组的精子凋亡率和精子膜表面TNFR-Ⅱ表达量，每份标本均检测10000个精子，比较两组精子凋亡率和TNFR-Ⅱ表达量的差异。结果：实验对照组与空白对照组人精子凋亡率分别为8．28％和5．07％，人精子膜表面TNFR-Ⅱ表达率分别为52．09％和73．79％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：rhTNF-α体外作用后使精子凋亡率明显升高，膜表面TNFR-Ⅱ的表达量明显降低，TNF-α与精子膜表面受体结合后可能促使精子凋亡而影响精子的质量。