血清骨钙素、TP1NP、25(OH)D3水平在绝经后女性T2DM患者并发DKD中的应用价值探讨

目的 分析血清骨钙素(OC)、总I型前胶原N端前肽(TP1NP)、25-羟维生素D3[25(OH)D3]水平在绝经后女性2型糖尿病(T2DM)并发糖尿病肾病(DKD)患者中的应用价值。方法 收集122例绝经后女性T2DM患者临床资料,其中合并DKD 41例(DKD组),无DKD 81例(对照组),比较两组血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清OC、TP1NP、25(OH)D3对绝经后女性T2DM患者合并DKD的诊断价值;并比较不同尿白蛋白/肌酐比值(UACR)的DKD患者血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平差异。结果 DKD组血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平均低于对照组(P<0.05)。OC、TP1NP、25(OH)D3对绝经后女性T2DM患者合并DKD均有较高诊断价值(P<0.05),且3项联合诊断价值更高(P<0.05)。绝经后女性DKD患者中,UACR>300mg/g者血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平明显低于UACR≤300mg/g者(P<0.05)。结论 血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平对评估绝经后女性T2DM患者DKD发生、发展进程有利。

应用基因表达谱芯片技术筛选NS3TP1转染细胞差异表达基因

目的:应用基因芯片技术,检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活基因1(NS3TP1)的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步NS3TP1蛋白可能的分子生物学功能. 方法:设计并合成NS3TP1基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS3TP1蛋白编码基因片段, 以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)- NS3TP1.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较. 结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 152个基因表达谱的筛选中,发现有26个基因表达水平显著上调,14个基因表达水平显著下调. 结论:应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS3TP1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS3TP1蛋白可能的生物学功能及HCV的致病机制提供理论依据.

应用微阵列技术筛选PS1TP1基因转染细胞差异表达基因

阐明乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白1(PS1TP1)的表达对于肝细胞的基因表达谱的影响。应用基因芯片技术对于pcDNA3.1()和pcDNA3.1()PS1TP1分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析。以肝癌细胞系HepG2基因作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PS1TP1基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1()PS1TP1。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总RNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1()的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。在4096个基因表达谱的筛选中,发现有8个基因表达水平显著上调,14个基因表达水平显著下调。PS1TP1基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式调节靶基因的有效技术途径。

血清RANKL、tP1NP、N-MID、B-CTX及25-羟维生素D在骨质疏松患者中的变化及诊断价值

目的探讨骨质疏松患者血清核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、总1型胶原氨基酸延长肽(tP1NP)、N-端骨钙素(N-MID)、B-胶原特殊序列(B-CTX)及25-羟维生素D的水平变化及其诊断价值。方法选取我院2016年5月-2017年4月收治并确诊的骨质疏松患者89例(病例组)、同期健康体检正常无骨质疏松人群90例作为对照组,检测并对比两组研究对象的血清RANKL、tP1NP、N-MID、B-CTX及25-羟维生素D的水平。结果病例组患者的血清RANKL显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);病例组患者的血清25-羟维生素D显著的低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);病例组患者的血清tP1NP、N-MID、B-CTX与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);血清RANKL鉴别诊断骨质疏松的最佳临界点值为0.175ng/ml,诊断灵敏度为82.14%、特异度为85.06%、ROC曲线下面积(AUC)为0.833;血清25-羟维生素D鉴别诊断骨质疏松的最佳临界点值为30.50nmol/ml,诊断灵敏度为79.92%、特异度为83.47%、ROC曲线下面积AUC值为0.814;血清RANKL+25-羟维生素D别诊断骨质疏松的灵敏度为87.42%、特异度为94.01%、ROC曲线下面积AUC值为0.916。结论骨质疏松患者血清RANKL、25-羟维生素D水平较正常人群变化较为明显,二者联合应用对于鉴别诊断骨质疏松具有一定的临床价值。

武定鸡APOB、ADFP、FATP1基因表达量变化及其与脂肪沉积的相关性

采用荧光定量PCR技术,联合分析了不同日龄(28、49、70、91和112日龄)武定鸡载脂蛋白B基因(APOB)、脂肪酸转运蛋白1基因(FATP1)和脂肪分化相关蛋白基因(ADFP)在皮脂、腹脂、肝脏、胸肌等组织中的表达量变化,及其与活重、皮脂厚、冠重等脂肪性状形成的相关性。结果显示,ADFP基因在腹脂49日龄时的表达量显著低于28、70、91和112日龄(P<0.05),及该基因在112日龄时胸肌中的表达量显著高于皮脂、腹脂和肝脏(P<0.05);FATP1基因在28日龄时胸肌中的相对表达量显著高于皮脂、腹脂和肝脏(P<0.05);APOB基因在肝脏49日龄时的表达量显著高于28、70和91日龄(P<0.05),并且该基因在49、70、91和112日龄时肝脏中的表达量显著高于皮脂、腹脂和胸肌(P<0.05)。ADFP基因和APOB基因在皮脂中的表达存在显著相关(P<0.05),ADFP基因和FATP1基因在肝脏中的表达存在显著相关(P<0.05),推断这三个脂肪沉积相关基因可能在武定鸡脂肪性状的形成过程中具有协同调控作用。

应用抑制性消减杂交技术克隆PS1TP1的反式激活基因

目的 应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建乙型肝炎病毒（HBV）前-S1蛋白（preS1）反式激活蛋白1（PS1TP1）的相关基因cDNA消减文库,克隆PS1TP1反式激活相关基因,以期发现PS1TP1蛋白反式激活作用的靶位点.方法 以PS1TP1表达质粒PcDNA3.1（-）-PS1TP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1（-）为对照;提取mRNA并逆转录为cDNA,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库.结果 文库扩增后得到90个阳性克隆,随机挑选43个克隆测序,并进行同源性分析,获得12种编码基因,其中10个为已知功能基因,另外2个为未知功能序列.结论 成功构建PS1TP1反式激活的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础.为进一步研究PS1TP1蛋白的功能及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

lncRNA TP53TG1在牙髓中的表达和对牙髓干细胞转录炎症因子的影响

目的探究lncRNA TP53TG1在健康和炎症牙髓中的表达差异,以及对脂多糖(LPS)诱导后人牙髓干细胞(hDPSCs)炎症因子转录水平的影响。方法设计合成lncRNA探针,利用RNA荧光原位杂交技术检测健康和炎症牙髓组织中lncRNA TP53TG1的表达情况。通过酶解组织块法分离培养hDPSCs,对培养的hDPSCs进行多向分化诱导验证,并通过流式细胞术鉴定表型特征。将hDPSCs分为si-NC组、si-NC+LPS组、si-TP53TG1+LPS组,分别转染对照序列和TP53TG1的siRNA,再用LPS处理si-NC+LPS组和si-TP53TG1+LPS组24 h,通过qRT-PCR检测各组炎症因子IL-1β、IL-8以及TNF-α的mRNA表达水平。结果在健康牙髓组织中可观察到lncRNA TP53TG1的表达,主要分布在成牙本质细胞中。炎症状态下,lncRNA TP53TG1的表达量上升,全牙髓可见分布。LPS处理后,hDPSC的TNF-α、IL-1β以及IL-8的mRNA表达水平上升,下调lncRNA TP53TG1导致hDPSCs的TNF-αmRNA表达水平进一步升高。结论lncRNA TP53TG1可能参与调控牙髓炎症过程和成牙本质细胞的免疫调控作用。

胃癌组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系

目的研究胃癌组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和预后的关系。方法选取2019年2~10月行胃癌根治术的113例胃癌患者,术中取其胃癌组织与癌旁组织。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌组织与癌旁组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量及Wnt/β-catenin信号通路相关指标[Wnt3a、Wnt5a、β-catenin、细胞周期素D1(cyclin D1)、原癌基因(c-myc)]信使RNA(mRNA)表达量。采用Pearson相关性法分析LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与Wnt/β-catenin信号通路相关指标mRNA表达量的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析胃癌患者术后3年生存情况。结果胃癌组织LncRNA NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson法分析显示,Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量与LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量呈正相关(P<0.05)。LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与胃癌患者的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。患者随访3年,随访中位时间为27.90个月。Kaplan-Meier生存曲线显示,LncRNANCK1-AS1高表达组3年生存率52.31%(34/65)低于LncRNANCK1-AS1低表达组的77.08%(37/48)(P<0.05),LncRNA TP73-AS1高表达组3年生存率52.78%(38/72)低于LncRNATP73-AS1低表达组80.49%(33/41)(P<0.05)。结论LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1在胃癌组织中表达上调,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌发生、发展,还可导致不良预后,有望作为辅助评估胃癌患者预后的生物标志物。

TP1型制动器的应用

1988年10月,我矿JKM4×4提升机的B123型制动器改用洛阳矿山机器厂生产的TP1—6.3型盘式制动器,使该机的制动、维护性能得到改善。现就TP1型制动器的应用情况谈几点看法。 1.TP1的优点把TP1(图1)和B123(图2)进行比较后可知: (1) TP1的油缸压力腔离闸盘较远(件19),内泄收集回路合理。

下调TP53INP1基于PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响

目的分析下调肿瘤蛋白P53诱导性核蛋白1(TP53INP1)基于PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响。方法按照脂质体2000说明书对细胞进行转染TP53INP1 mimics及TP53INP1 inhibitor,按照实验设计,将其分为对照组及上调组(TP53INP1 inhibitor)、下调组(TP53INP1 mimics)。荧光定量PCR法检测TP53INP1表达量,采用细胞划痕实验法检测细胞迁移能力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测PI3K/AKT/mTOR通路中PI3K、AKT、mTOR表达量。结果上调组表达量高于下调组TP53INP1,差异有统计学意义(P<0.05);下调组凋亡率高于上调组,差异有统计学意义(P<0.05);下调组侵袭能力、迁移能力低于上调组,差异有统计学意义(P<0.05);下调组PI3K、AKT、mTORBax蛋白表达量低于上调组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TP53INP1在宫颈癌中呈现高表达,下调TP53INP1可抑制宫颈癌细胞侵袭、迁移,促进凋亡,其机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关。

lncRNA TP53TG1在结肠癌中的表达及通过mi R-18a/CDC42轴对癌细胞发展的影响

目的:探讨lncRNA TP53TG1通过miR-18a/CDC42轴对SW620细胞发展的影响。方法:分析结肠癌组织、癌旁组织、SW620、NCM460细胞中lncRNA TP53TG1、miR-18a和CDC42的表达。检测下调TP53TG1对细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。采用生物信息学miRanda分析LncRNA TP53TG1作用靶点,检测TP53TG1和miR-18a的相关性。检测下调miR-18a或上调LncRNATP53TG1通过miR-18a对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan分析miR-18a靶点,检测miR-18a和CDC42之间的关系。分析CDC42 siRNA对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果:和癌旁正常组织相比,结肠癌组织中lncRNA TP53TG1和CDC42表达上调,miR-18a表达下调;和NCM460细胞相比,SW620细胞中lncRNA TP53TG1和CDC42表达上调,miR-18a表达下调。lncRNA TP53 TG1 siRNA或CDC42 siRNA抑制细胞增殖、侵袭与EMT;lncRNA TP53TG1靶向miR-18a,miR-18a靶向CDC42。miR-18a inhibitor促进细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNATP53TG1通过miR-18a促进CDC42表达和细胞发展。结论:lncRNA TP53TG1在结肠癌中表达上调且通过miR-18a/CDC42轴促进SW620细胞增殖、侵袭及其EMT。

端粒酶组分亚单位研究进展

目的 简述端粒酶亚单位的研究情况与端粒酶活性的关系。方法 参阅相关文献 ,并作综述性报道。结果 端粒酶是一种特殊的逆转录酶 ,由RNA和蛋白组成的核糖核蛋白 (ribonucleoprotein)复合体。目前已经克隆了人类端粒酶亚单位 (subunit)基因 ,分别为端粒酶RNA(hTR) ,端粒酶结合蛋白 (hTP1)和端粒酶活性催化亚单位 (hTERT)。研究发现 ,端粒酶活性与其亚单位关系密切。结论 为端粒酶的激活可能与其亚单位特别是端粒酶活性催化亚单位的表达、调控有关。但这方面的研究刚刚起步 。

电化学发光测定血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽的分析性能评价

目的：按美国病理家学会（CAP）的要求，验证电化学发光免疫测定人血清I型前胶原氨基端前肽（tP1NP）的各项分析性能，建立本实验室的参考范围。方法选取低值和高值2个水平的质控品，每天检测一次，连续20次，统计日间变异；用6种不同浓度的低值血清连续检测10d,检测功能灵敏度；将高值和低值血清按一定比例混合，检测其浓度，回归分析验证测量范围；选取138名健康体检人群检测tP1NP，建立本实验室的参考范围。结果日间CV分别4.7%和2.4%；功能灵敏度为6.60ng/ml；分析验证测量范围（AMR）在6.8-1020.2ng/ml；本实验室tP1NP的参考范围为17.8～55.8ml。结论用电化学发光免疫法测定血清I型前胶原氨基端前肽，灵敏度高，稳定性好,本系统的各项性能符合CAP要求。

TP53AIP1基因研究进展

TP53AIP1基因是近期发现的一种促凋亡基因,在p53依赖性的凋亡通路中起重要作用。TP53AIP1不仅直接促进细胞凋亡,其促凋亡作用可能强于上游基因p53本身,并且TP53AIP1对具有p53抑制性的肿瘤细胞也有作用。因此,该基因已成为近年来抗肿瘤治疗领域的一个热点研究对象。目前国内外关于TP53AIP1基因的研究主要集中在乳腺癌、肺癌和结直肠癌等常见恶性肿瘤方面,而针对其与肝癌关系的研究尚属空白。对TP53AIP1的深入研究可能会为肿瘤患者的治疗带来新的希望,本文就TP53AIP1基因及其编码蛋白的基本特性进行了简要概述;重点介绍了TP53AIP1基因在肝癌发生发展过程中所起到的重要作用以及最新研究结果;最后探讨了今后进一步开展相关研究工作所面临的问题及解决思路。

TPS1/TPF新辅助化疗治疗局部晚期鼻咽癌的近期疗效分析

目的对比TPS1/TPF两种不同新辅助化疗方案治疗局部晚期鼻咽癌的近期疗效和安全性。方法选择2015年12月~2016年8月我院收治的72例局部晚期鼻咽癌患者,随机分为两组。TPS1组行新辅助化疗2周期(多西他赛60mg·m^(-2)、d1,顺铂60 mg·m^(-2)、d1,替吉奥(S-1)60 mg·m^(-2)、d1~14,每天分2次口服)。TPF组行新辅助化疗2周期(多西他赛60 mg·m^(-2)、d1,顺铂60mg·m^(-2)、d1,5-FU 600 mg·m^(-2)、d1~5)。两组患者在2周期新辅助化疗后开始同步放化疗,放疗处方剂量为:PGTVnx:70.4 Gy/32 f,PGTVnd:70.4 Gy/32 f,PCTV1:64 Gy/32 f,PCTV2:57.6 Gy/32 f,PCTV3:50.4 Gy/28 f。同步化疗方案为DDP单药80 mg·m^(-2),2周期。比较两组患者的临床疗效及毒副反应发生情况。结果新辅助化疗后,TPS1组CR率13.5%,TPF组CR率11.4%,两组比较差异无统计学意义(P=0.979)。完成同步放化疗后,TPS1组CR率75.7%,TPF组CR率77.1%,两组比较差异无统计学意义(P=0.884)。治疗结束3个月后复查整体(鼻咽+颈部),TPS1组CR率83.8%,TPF组CR率80.0%,两组比较差异无统计学意义(P=0.679)。新辅助化疗后,TPS1组无4级反应,耐受良好,TPS1组1~2级腹胀、腹痛发生率高于TPF组(P<0.05),主要急性毒性反应为血液毒性和消化道反应。整体放化疗结束后,两组均无4级毒性反应发生,主要毒性反应为放射性皮炎、口腔黏膜炎、口干和血液毒性,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论与TPF新辅助化疗方案相比,TPS1新辅助化疗方案对局部期鼻咽癌的疗效相当,但安全性更高。

酿酒酵母海藻糖合成酶基因的克隆和在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法克隆了１．５ｋｂ的酿酒酵母Ｓａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ海藻糖合成酶基因ＴＰＳ１，将该片段连接到ｐＵＣ１９载体，通过转化分别引入海藻糖合成酶基因缺失和缺陷的大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＦＦ４１６９和ＦＦ４１６９和ＦＦ４０５０。对转化株的质粒ＤＮＡ酶切分析表明均含有１．５ｋｂＰＣＲ克隆片段。生长曲线实难证明，带有克隆片段的转化株在含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的高渗透压基础培养基中生长良好；用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）结合蒸发光散射（ＥＬＳＤ）技术测定细胞内海藻糖实验证明转化株能够合成海藻糖。

血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽和Ⅰ型胶原羧基端肽在骨质疏松症并发骨折检测的临床意义

目的:探讨骨形成标志物血清总I型胶原氨基端延长肽(TPINP)和骨重吸收标志物I型胶原羧基端肽(CTX)在骨质疏松症并发骨折患者中临床检测的意义。方法:回顾性分析我院自2013年1月至2014年7月共50例初诊为骨质疏松导致骨折患者的病例资料,并利用罗氏Cobas e411免疫分析仪采用电化学发光法测定血清中TPINP和CTX,采用t检验进行统计学分析骨质疏松导致骨折病人及健康对照组外周血中TPINP和CTX等的表达。结果:和健康对照组相比,骨质疏松导致骨折患者外周血中TPINP及CTX的水平明显增高,TPINP和CTX在骨质疏松及健康对照组的表达分别为94.9±5.49μg/ml及35.06±2.74μg/ml;0.89±0.05μg/ml及0.36±0.02μg/ml;P<0.01,差异有统计学意义。结论:TPINP和CTX可做为骨质疏松及其严重并发症骨折的预防性检测指标及治疗监测有一定的应用价值。

香蕉MaTPS1基因序列及其表达特性分析

通过随机克隆测序法,从香蕉根系cDNA文库中获得海藻糖合成酶基因,命名为MaTPS1。MaTPS1扩增获得cDNA序列,全长3 946bp,开放阅读框2 562bp,编码853个氨基酸。生物学信息分析表明,MaTPS1蛋白属于不稳定蛋白,等电点4.72,具有TPS和TPP结构域。序列预测分析表明,MaTPS1蛋白定位于细胞质中,不存在信号肽,为跨膜疏水蛋白。与已知植物TPS氨基酸同源序列比对结果显示,一致性达74.81%,其中与2种马来西亚野生蕉、玉米、野茶树、中果咖啡的TPS编码氨基酸序列一致性分别为100%、79.91%、71.33%、63.93%和65.13%。器官特异性分析表明,MaTPS1在香蕉的根、球茎、假茎、叶、花和果实中都有表达,其中在根、球茎、假茎和花中表达量较高。qRT-PCR分析表明,ABA、ACC、干旱、低温、盐害和枯萎病胁迫处理后,MaTPS1表达量在盐胁下增加,于24h时达到最高,而在其他胁迫下较正常条件下降低。研究认为,MaTPS1可能参与调控香蕉抗盐胁迫机制,从而提高香蕉耐盐性。

酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建

以从原核表达载体中酶切得到的 tps1基因为模板 ,设计适当的引物 ,利用 PCR技术 ,克隆出核苷酸数大约 1.5 k的片段 .PCR产物经回收后 ,与 PCAMBIA130 3载体连接并转化大肠杆菌 DH5 a,阳性重组子经PCR鉴定 ,结果表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体 .