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Characterization of Ethylene Receptors and Their Interactions with GmTPR-A Novel Tetratricopeptide Repeat Protein (TPR) in Soybean (Glycine max L.)
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作者 NIUYan yan CHENMing +3 位作者 XUZhao shi LILian cheng CHENXue ping MAYOU zhi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第4期571-581,共11页
Ethylene receptors play important roles not only in regulation of growth and development but also in response to environmental stimuli of plants. However, there are few reports on ethylene receptors in soybean. In thi... Ethylene receptors play important roles not only in regulation of growth and development but also in response to environmental stimuli of plants. However, there are few reports on ethylene receptors in soybean. In this article, putative ethylene receptors of soybean were searched from soybean genomic database (http://www.phytozome.net/search.php) and analyzed. The ethylene receptor gene family in soybean comprising eight members, designated as GmERSI-1, GmERS1-2, GmETRI-1, GmETR1-2, GmETR2-1, GmETR2-2, GmEIN4-1, and GmEIN4-2 corresponding with their homologous genes in drabidopsis, were isolated and analyzed. Phylogenetic analysis indicated that the eight soybean ethylene receptors (SERs) were in two subfamilies and further divided into four groups, viz., groups I (GmERSI-1 and GmERS1-2), 1I (GmETRI-1 and GmETR1-2), VI (GmETR2-I and GmETR2-2), and VII (GmEIN4-1 and GmEIN4-2). Protein structure of the members in groups I and II from subfamily I were more conserved than the members in other two groups from subfamily II. Expression patterns of the SERs were compared with the homologous genes in Arabidopsis. The results demonstrated that expression patterns of the SERs differed from Arabidopsis members in the same group, suggesting that SERs are involved in different signal pathways compared to ethylene receptors in drabidopsis. Promoter analysis showed that the sequences of the members in each group were different from each other, and some specific binding elements of transcription factors detected in promoter sequences might explain the differences between the members in the same group. A novel soybean TPR protein (tetratricopeptide repeat protein), GmTPR, was identified to interact with GmETRI-1, apparently an important ethylene receptor in ethylene signaling pathway in soybean. This suggested that GmTPR might be a novel downstream component of the ethylene signaling pathway. 展开更多
关键词 SOYBEAN ARABIDOPSIS ethylene receptor tpr protein
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拟南芥转录因子MYB73与TPRs蛋白的互作研究 被引量:1
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作者 范宇航 赵盼盼 +5 位作者 白华 庞茜 张康 曹宏哲 邢继红 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期83-90,共8页
转录因子MYB73在拟南芥抵抗生物和非生物胁迫过程中发挥重要作用,但其作用的分子机制尚待探究。本研究利用酵母双杂交(Yeast two-hybrid,Y2H)技术,对拟南芥MYB73与TPRs(TOPLESS-related proteins)蛋白之间的互作关系进行研究,结果发现,... 转录因子MYB73在拟南芥抵抗生物和非生物胁迫过程中发挥重要作用,但其作用的分子机制尚待探究。本研究利用酵母双杂交(Yeast two-hybrid,Y2H)技术,对拟南芥MYB73与TPRs(TOPLESS-related proteins)蛋白之间的互作关系进行研究,结果发现,共转化MYB73与TPR3、TPR4组合(BD-MYB73+AD-TPR3、AD-MYB73+BD-TPR3、BD-MYB73+AD-TPR4、AD-MYB73+BD-TPR4)的酵母能够在三缺(SD/-L/-T/-H)和四缺(SD/-L/-T/-H/-A)培养基上生长,而共转化MYB73与TPR1、TPR2组合的酵母以及阴性对照组均不能在三缺、四缺培养基上正常生长,表明MYB73与TPR3、TPR4蛋白互作,与TPR1、TPR2不互作;与阳性对照相比,共转化EAR(Ethylene-responsive element binding factor-associated amphiphilic repression)基序突变的MYB73-m1(L197V)、MYB73-m2(L201V)与TPR3、TPR4组合(AD-MYB73-m1+BD-TPR3、ADMYB73-m2+BD-TPR3、AD-MYB73-m1+BD-TPR4、AD-MYB73-m2+BD-TPR4)的酵母不能在三缺和四缺培养基上生长,表明MYB73通过EAR基序与TPRs蛋白互作。 展开更多
关键词 MYB73 tprs蛋白 酵母双杂交 EAR基序
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谷秆两用稻草栽培食用菌研究 被引量:4
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作者 陈君琛 郑金贵 +2 位作者 杨菁 郑开斌 陈旺瑞 《福建农业学报》 2000年第2期41-44,共4页
采用谷秆两用水稻高蛋白稻草栽培姬松茸、蘑菇、草菇的试验结果表明 ,含高蛋白质的谷秆两用稻草栽培姬松茸、蘑菇、草菇的生物效率分别比一般稻草提高 2 2 .85%~ 2 8.0 7%、11.0 0 %~ 2 5.31%、 33.6 8% ,差异达到显著或极显著水平。... 采用谷秆两用水稻高蛋白稻草栽培姬松茸、蘑菇、草菇的试验结果表明 ,含高蛋白质的谷秆两用稻草栽培姬松茸、蘑菇、草菇的生物效率分别比一般稻草提高 2 2 .85%~ 2 8.0 7%、11.0 0 %~ 2 5.31%、 33.6 8% ,差异达到显著或极显著水平。同时采用 15N同位素示踪技术研究草菇对稻草蛋白质的吸收利用率 ,结果 N转化率比一般稻草提高 19.0 3%。 展开更多
关键词 谷秆两用稻草 姬松茸 蘑菇 草菇 栽培
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SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达(英文) 被引量:1
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作者 宋玲 阮元元 +2 位作者 王彦林 恽小婧 张英 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期793-799,共7页
目的通过研究SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达来揭示该蛋白在小鼠脑发育阶段中的重要性。方法分别运用定量RT-PCR以及Western blot实验方法来检测小鼠全脑中SGT核酸和蛋白的表达情况。用Westernblot实验方法检测SGT蛋白在海马,皮层,纹... 目的通过研究SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达来揭示该蛋白在小鼠脑发育阶段中的重要性。方法分别运用定量RT-PCR以及Western blot实验方法来检测小鼠全脑中SGT核酸和蛋白的表达情况。用Westernblot实验方法检测SGT蛋白在海马,皮层,纹状体和小脑中的表达模式;运用免疫组化方法来检测SGT蛋白在小鼠脑分区中的亚细胞定位。结果在小鼠全脑中,SGT的核酸和蛋白水平均表现为出生早期的高表达,到了成年期,表达水平下降。SGT蛋白在海马,皮层,纹状体和小脑中的表达模式和在全脑中的类似。免疫组化结果显示,在出生后14天(P14)的小鼠脑切片中,SGT蛋白在海马的CA区域以及皮层和纹状体都有强的阳性表达。在小脑中,SGT蛋白主要分布在浦肯野细胞层。在同样的检测条件下,SGT蛋白在成年期小鼠的脑切片中没有明显的阳性表达。结论我们的研究首次揭示了SGT蛋白在小鼠脑发育过程中的表达,为进一步揭示SGT在中枢神经系统中的功能提供了一个参考依据。 展开更多
关键词 SGT(含有tpr结构域的小的富含谷氨酰胺的蛋白) 发育
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应用酵母双杂交技术研究人睾丸特异表达基因HSD-3.8的功能
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作者 林雯 缪时英 +1 位作者 张琳 王琳芳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期582-587,共6页
目的探寻本实验室筛选出的与不孕症相关的人睾丸特异表达基因HSD-3.8(GenBank接收号为AF311312,国际上命名为精子相关抗原1)编码蛋白质的作用配体,揭示其参与受精过程的机制。方法采用酵母双杂交体系,构建含有HSD-3.8基因部分序列(HSD-0... 目的探寻本实验室筛选出的与不孕症相关的人睾丸特异表达基因HSD-3.8(GenBank接收号为AF311312,国际上命名为精子相关抗原1)编码蛋白质的作用配体,揭示其参与受精过程的机制。方法采用酵母双杂交体系,构建含有HSD-3.8基因部分序列(HSD-0.7)的诱饵质粒,筛选人卵巢cDNA文库。在获得阳性克隆后,根据蛋白质结构分析并结合PCR方法重新构建一系列缺失体,在酵母体内验证它们与被捕获的蛋白因子之间的结合。结果酵母双杂交实验获得一阳性克隆,其编码氨基酸与人G蛋白β1亚基羧基端的144个氨基酸同源性为100%。所构建的几种诱饵蛋白缺失体在酵母体内均不能与该捕获的蛋白因子相互作用。结论HSD-3.8编码蛋白质片段HSD-0.7可能通过G蛋白信号转导途径在受精过程中发挥功能,与G蛋白β1亚基的结合有赖于其结构的完整。 展开更多
关键词 酵母双杂交技术 睾丸 P-loop结构 G蛋白 HSD-3.8基因 不孕症
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Pitt, a Novel Tetratricopeptide Repeat Protein Involved in Light-Dependent Chlorophyll Biosynthesis and Thylakoid Membrane Biogenesis in Synechocystis sp. PCC 6803 被引量:3
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作者 Marco Schottkowski Janina Ratke +2 位作者 Ulrike Oster Marc Nowaczyk Jorg Nickelsen 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2009年第6期1289-1297,共9页
Biogenesis of photosynthetic pigment/protein complexes is a highly regulated process that requires various assisting factors. Here, we report on the molecular analysis of the Pitt gene (sir1644) from the cyanobacter... Biogenesis of photosynthetic pigment/protein complexes is a highly regulated process that requires various assisting factors. Here, we report on the molecular analysis of the Pitt gene (sir1644) from the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (Synechocystis 6803) that encodes a membrane-bound tetratricopeptide repeat (TPR) protein of formerly unknown function. Targeted inactivation of Pitt affected photosynthetic performance and light-dependent chlorophyll synthesis. Yeast two-hybrid analyses and native PAGE strongly suggest a complex formation between Pitt and the light-dependent protochlorophyllide oxidoreductase (POR). Consistently, POR levels are approximately threefold reduced in the pitt insertion mutant. The membrane sublocalization of Pitt was found to be dependent on the presence of the periplasmic photosystem Ⅱ (PSⅡ) biogenesis factor PratA, supporting the idea that Pitt is involved in the early steps of photosynthetic pigment/protein complex formation. 展开更多
关键词 SYNECHOCYSTIS tpr protein POR thylakoid membrane chlorophyll.
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RPAP3蛋白中TPR结构域的功能研究
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作者 李靓云 唐超 +1 位作者 陈霞 李建民 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第12期2245-2249,2244,共6页
目的:构建针对RPAP3 TPR区域的慢病毒载体,观察过表达对细胞周期的影响。方法:通过生物信息学软件比较RPAP3结构域组成,推测功能;分析RPAP3核定位信号,构建瞬时表达质粒pEGFP-N2-RPAP3,激光共聚焦显微镜观察RPAP3蛋白的亚细胞定位;通过... 目的:构建针对RPAP3 TPR区域的慢病毒载体,观察过表达对细胞周期的影响。方法:通过生物信息学软件比较RPAP3结构域组成,推测功能;分析RPAP3核定位信号,构建瞬时表达质粒pEGFP-N2-RPAP3,激光共聚焦显微镜观察RPAP3蛋白的亚细胞定位;通过酵母双杂交和GST-Pulldown实验研究RPAP3与HSP70的相互作用及作用靶点;构建慢病毒载体pLJM.1-RPAP3,转染293T细胞,收病毒感染MCF7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞系,流式细胞分析对细胞周期的影响。结果:RPAP3在多物种广泛存在,有高度保守性;蛋白存在典型核定位信号,激光共聚焦显微镜下,GFP标记的RPAP3蛋白主要分布在细胞核;酵母双杂交和GST-Pulldown实验证实RPAP3与HSP70间存在相互作用,且作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和HSP70的GPTIEEVD末端之间;流式细胞显示RPAP3 TPR区域的高表达阻滞细胞周期且凋亡增加。结论:RPAP3与HSP70间的相互作用发生在RPAP3的三联TPR结构域和热休克蛋白70的GPTIEEVD末端之间;构建高表达细胞株发现其对细胞周期及凋亡有影响。 展开更多
关键词 tpr结构域 亚细胞定位 蛋白相互作用 细胞周期
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CHIP基因及其突变体的克隆及在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达 被引量:1
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作者 王生余 原野 +1 位作者 侯春梅 于晓妉 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第4期316-320,共5页
目的:热休克蛋白70羧基端作用蛋白(CHIP)是近年来新发现的同时具有辅助伴侣分子和E3泛素连接酶活性的特殊蛋白分子,但其对相应底物蛋白代谢和活性的调控机制尚不十分清楚。本研究拟构建含CHIP全长编码基因的真核表达载体,并在此基础上... 目的:热休克蛋白70羧基端作用蛋白(CHIP)是近年来新发现的同时具有辅助伴侣分子和E3泛素连接酶活性的特殊蛋白分子,但其对相应底物蛋白代谢和活性的调控机制尚不十分清楚。本研究拟构建含CHIP全长编码基因的真核表达载体,并在此基础上构建含CHIP不同功能结构域突变体和缺失体基因的表达载体,以实现这些基因在真核细胞中的高效表达,为后续探讨CHIP相关功能的实验奠定基础。方法:从高表达CHIP的人非小细胞肺癌H322细胞中提取总RNA,以此为模板,采用逆转录巢式PCR(RT-nested-PCR)获得CHIP全长编码基因,经测序确定序列正确后将CHIP基因连入带有myc标签的克隆载体pCMV-Tag1中,并以此为模板采用点突变的方法构建CHIP基因N端TPR结构域突变体K30A和C端U-box结构域的突变体H260Q以及U-box结构域缺失体U-box(-)。结果:钓取的CHIP基因经测序鉴定序列与GenBank报道完全一致,瞬时转染证实所构建的CHIP及其突变体表达载体可以在人卵巢癌SKOV3细胞中实现高效表达。结论:成功地构建并获得能够在真核细胞内高表达的CHIP及其功能域突变体的表达载体,为进一步探讨真核细胞内CHIP对相关蛋白分子的调控机制奠定了前期基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白70羧基端作用蛋白 基因表达 tpr结构域 U-box结构域 突变 卵巢肿瘤
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