Aurora-A/TPX2复合体与肿瘤关系的研究进展

基因组不稳定是肿瘤的重要标志,细胞分裂过程中调节遗传稳定性的相关蛋白质与信号通路在肿瘤的发生发展中起着重要作用。极光激酶(Aurora kinase)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,其包括极光激酶A(Aurora-A)、极光激酶B(Aurora-B)和极光激酶C(Aurora-C)3个亚型,在细胞周期中呈动态分布。通过调控细胞有丝分裂过程中中心体的成熟和分离、双极纺锤体的组装和稳定、染色体的精确分离等过程,以确保细胞周期的正常完成。爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)是Aurora-A的关键调节剂之一,在有丝分裂纺锤体的组装和维持纺锤体极的完整性方面至关重要。最近有学者发现了Aurora-A/TPX2复合体在肿瘤发生发展中的新作用。因此,本文就Aurora-A和TPX2的生物学特性、与肿瘤发生发展的关系以及Aurora-A/TPX2复合体作为一个新的功能单位在肿瘤形成中的作用机制进行综述。

Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A在喉鳞状细胞癌组织中的表达及与临床病理特征的相关分析

目的:探究扭曲蛋白2(Twist2)、转录因子(Snail)蛋白、Xklp2靶蛋白(TPX2)、极光激酶A(Aurora-A)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及与临床病理特征的相关分析。方法:选取2021年1月至2023年7月大冶市人民医院收治的喉鳞状细胞癌66例为研究对象,取患者手术切除癌组织和癌旁正常组织分为喉鳞状细胞癌组与癌旁组织组。比较两组Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表达差异,通过ROC曲线分析Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表达诊断喉鳞状细胞癌的价值,并分析Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果:喉鳞状细胞癌组织中Twist2阳性表达、Snail阳性表达、TPX2阳性表达、Aurora-A阳性均高于癌旁组织(P<0.05)。ROC曲线分析显示,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表达诊断喉鳞状细胞癌的AUC分别为0.674、0.697、0.818、0.780,均具有较高准确性;诊断敏感度、特异度:Twist2为54.5%、80.3%;Snail为56.1%、83.3%;TPX2为69.7%、93.9%;Aurora-A为63.6%、92.4%,诊断具有一定价值。喉鳞状细胞癌组织中Twist2阳性表达、Snail阳性表达、TPX2阳性表达、Aurora-A阳性均与年龄、性别、临床分型无相关(P>0.05),但喉鳞状细胞癌组织中Twist2阳性表达、Snail阳性表达、TPX2阳性表达、Aurora-A阳性均与甲状软骨累及、TNM分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移存在相关(P<0.05)。结论:Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A在喉鳞状细胞癌组织中高表达,与患者临床病理特征相关密切,可作为临床诊断喉鳞状细胞癌有效指标。

Hh信号通路分子TPX2对口腔鳞癌增殖的作用探讨

目的探讨与分析Hedgehog(Hh)信号通路分子TPX2对口腔鳞癌增殖的作用。方法选取2022年1月—2023年7月呼伦贝尔职业技术学院口腔教研室培养的6株CAL-27人口腔鳞癌细胞株为研究对象,将转染Lv-pc3.0 vector的3株CAL-27人口腔鳞癌细胞株作为对照组,将转染Lv-pc3.0-shTPX2的3株CAL-27人口腔鳞癌细胞株作为Lv-shTPX2组,对比两组CAL-27人口腔鳞癌细胞株细胞周期、细胞增殖与目的基因、蛋白表达情况。结果转染后24、48 h,Lv-shTPX2组的TPX2 mRNA[(5.44±0.17)、(5.18±0.47)]与蛋白相对表达水平[(2.01±0.23)、(1.33±0.16)]低于对照组的TPX2 mRNA[(24.59±0.33)、(24.58±2.76)]与蛋白相对表达水平[(10.47±0.16)、(7.48±0.33)],差异有统计学意义(t=89.352,12.002,52.299,29.045,P均<0.05);Lv-shTPX2组的细胞增殖指数更低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,Lv-shTPX2组的G_(2)+M期细胞相对比例高于对照组,S期细胞相对比例低于对照组,GLI2、FOXM1蛋白相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制Hh信号通路分子TPX2的表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖,也可抑制GLI2、FOXM1蛋白表达,还可调节细胞周期状况,可为治疗口腔鳞状细胞癌提供新的途径。

宫颈癌组织中TPX2的表达水平及其与放疗敏感性的相关性

目的探究宫颈癌组织中TPX2的表达水平及其与放疗敏感性的相关性。方法选取54例宫颈癌患者的宫颈癌组织活检标本作为观察组,选取同期收治的经病理诊断为正常宫颈组织标本35例作为对照组。通过免疫组化法检测TPX2蛋白在2组组织中的表达,分析宫颈癌组织中TPX2蛋白的表达水平与患者年龄、病理类型、临床分期、病理分化程度以及淋巴结转移的关系。并对54例宫颈癌患者进行盆腔适形调强放疗治疗,在治疗后按照放疗疗效进行分组,CR为高敏感组,PR和SD为低敏感组,分析宫颈癌组织中TPX2蛋白表达与放疗敏感性的关系。结果TPX2蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率(87.04%)明显高于正常宫颈组织(8.57%),差异具有统计学意义(P<0.05)。TPX2蛋白的表达与宫颈癌患者的年龄、病理类型均无关(P>0.05),与临床分期、分化程度以及淋巴结转移均有关(P<0.05),且TPX2蛋白在放疗低敏感组的表达强度明显高于高敏感组(P<0.05)。结论TPX2蛋白在宫颈癌组织中高表达,其表达水平与宫颈癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移具有一定相关性。TPX2水平会影响宫颈癌放射治疗的敏感性,其高表达可导致肿瘤放射抵抗。TPX2表达水平对预测宫颈癌患者放疗疗效具有重要意义。

miR-218-5p靶向TPX2调节p53通路影响肺腺癌恶性进展

背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的一种主要亚型,其治疗与诊断依然是目前的研究热点。靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)在多种癌细胞中高表达,可能与LUAD的发生发展相关。本研究旨在探究TPX2对LUAD细胞恶性进程的影响以及调控机制。方法通过生物信息学分析技术,对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中LUAD组织中基因TPX2的表达情况进行分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人肺正常细胞系和人LUAD细胞系中TPX2和miR-218-5p的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞系中TPX2蛋白表达以及其对p53信号通路关键蛋白表达的影响。使用生物信息学预测并通过双荧光素酶报告基因检测验证TPX2与miR-218-5p的关系,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验、流式细胞术检测miR-218-5p和TPX2对LUAD细胞功能的影响。结果LUAD细胞中TPX2显著高表达,敲低TPX2可以抑制LUAD细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡并产生G_(2)/M期阻滞,并且促进p53信号通路关键蛋白的表达。miR-218-5p是TPX2的上游调控因子,可以抑制其表达。过表达miR-218-5p能消除TPX2高表达导致的恶性发展,抑制LUAD细胞的增殖、迁移等恶性进程以及促进p53信号通路。结论miR-218-5p靶向抑制TPX2表达,并通过p53发挥抑制LUAD细胞恶性发展的作用。

敲低TPX2对猪卵母细胞纺锤体组装及凋亡的影响

[目的]本研究旨在探究Xklp2靶蛋白(TPX2)在猪卵母细胞减数分裂过程中的表达定位及其潜在功能。[方法]采集猪卵丘-卵母细胞复合体(COC)并随机分组后进行体外成熟培养,通过间接免疫荧光染色与蛋白免疫印迹等方法检测TPX2在卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位与动态表达情况;通过生发泡期(germinal vesicle, GV)显微注射特异性siRNA以敲低TPX2,研究其对卵母细胞减数分裂进程、纺锤体结构以及早期凋亡的影响。[结果]TPX2在第一次减数分裂中期(metaphaseⅠ,MⅠ)表达量显著上升,其亚细胞定位与α-微管蛋白(α-tubulin)的分布特点相似,并主要富集在纺锤体两极。TPX2被敲低后卵母细胞第一极体(PB1)排出率显著下降(P<0.05),且大多数细胞被阻滞在生发泡破裂期(GVBD)和第一次减数分裂后末期(ATⅠ),同时纺锤体结构异常比例显著升高(P<0.05),并伴随染色体排列紊乱。与对照组相比,敲低TPX2后卵母细胞早期凋亡率急剧增加(P<0.05),凋亡相关基因Caspase 3表达量以及Bax/Bcl2值显著升高(P<0.05)。[结论]TPX2与猪卵母细胞减数分裂过程中的纺锤体组装及细胞周期调控密切相关,敲低TPX2引起卵母细胞纺锤体结构异常,并诱导早期细胞凋亡,最终导致卵母细胞成熟失败。

TPX2的表达对胰腺癌预后的影响

目的研究Xklp2靶蛋白(TPX2)在胰腺癌中的表达情况及其预测预后的潜在价值。方法基于200个糖酵解代谢相关基因,从TCGA和GEO数据库获取胰腺患者的信息,对后者的糖酵解代谢特征进行评价,同时综合患者代谢特征及差异基因,采用Cox回归和Lasso回归分析建立风险模型,获得关键糖酵解相关基因TPX2,并用GEO数据库验证该模型的预后有效性。基于预后基因的表达分析胰腺癌患者的生存期,并分析正常胰腺组织和胰腺癌中预后基因的表达差异,最后在细胞水平验证预后基因的功能。结果病例队列被分为高、中、低3个糖酵解代谢特征组,低速率糖酵解代谢患者存在一定生存优势,TPX2是该模型的关键基因,胰腺癌患者显示高表达TPX2,具有较差的预后。细胞水平上敲降TPX2可抑制胰腺癌细胞增殖和集落形成。结论本研究基于糖酵解代谢模型有效地预测了胰腺癌患者的预后,TPX2有望成为胰腺癌预后预测的潜在标志性基因。

TPX2和Aurora A在食管鳞癌中的蛋白表达及其临床病理意义

目的探讨TPX2在食管鳞癌及其癌前病变中的表达和意义。方法采用SP免疫组织化学方法检测TPX2和Aurora A蛋白在62例食管鳞癌、31例不典型增生组织及62例正常食管黏膜中的表达水平。结果免疫组织化学结果显示,TPX2蛋白在正常黏膜、癌旁不典型增生和癌组织的表达率依次增高,分别为4.8%(3/62),51.6%(16/31)和85.5%(53/62),三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。TPX2的蛋白表达水平与食管癌的淋巴结转移和浸润深度密切相关,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。Aurora A蛋白在正常黏膜、癌旁不典型增生和癌组织的表达率依次增高,分别为3.2%(3/62),45.2%(14/31)和71.0%(44/62),三组间比较差异有统计学意义(P<0.01),且表达水平与食管癌的组织学分期、浸润和转移相关。结论TPX2、Aurora A基因蛋白的表达可能是食管鳞癌淋巴结转移的危险因素,两者的联合检测可望成为食管鳞癌的早期诊断指标,是判断预后的指标之一。

TPX2在宫颈癌中的表达及意义

目的研究TPX2在宫颈癌中的表达,并探讨其与宫颈癌患者临床病理资料之间的相关性。方法采用RT-PCR法和免疫组织化学法,对62例原发性宫颈鳞癌1、7例原发性宫颈腺癌、15例正常宫颈组织、30例CIN组织,宫颈鳞癌Siha细胞系和宫颈腺癌HeLa细胞系中TPX2的mRNA和蛋白质的表达水平进行检测。结果果TPX2mRNA在正常宫颈组织中几乎不表达,而高表达于宫颈癌细胞。TPX2蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织中不表达,在CIN和宫颈鳞癌组织中表达强度增加,3者之间比较具有显著性差异((P<0.05)。TPX2在宫颈癌组织中的表达与FIGO分期、组织学分级、及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。TPX2蛋白在腺癌HeLa细胞系的表达强于鳞癌Siha细胞系((P<0.05)。结论 TPX2有望成为宫颈癌早期诊断及预后评估的一个指标。

TPX2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测TPX2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达,分析其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化SP法对80例子宫内膜样腺癌组织和20例正常子宫内膜组织进行TPX2蛋白的检测,采用2χ检验进行统计学处理。结果 (1)TPX2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达率为72.5%,高于正常子宫内膜的5.0%(P<0.05)。(2)淋巴结转移者TPX2蛋白表达率为86.36%,高于无淋巴结转移者的55.56%(P<0.05);浸润深度≥1/2肌层者的TPX2蛋白表达率为82.98%,高于<1/2肌层组的57.58%(P<0.05)。结论 TPX2蛋白高表达能促进子宫内膜样腺癌的发生发展。

miR-491通过下调Xklp2靶蛋白(TPX2)表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的探讨miR-491在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-491在肝癌及癌旁组织中的表达,MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Western blot法及免疫组织化学染色检测miR-491下游潜在靶点Xklp2靶蛋白(TPX2)的表达。结果 miR-491在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-491低表达与肿瘤大小、TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-491患者3年生存率明显低于高表达组;miR-491可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调TPX2的蛋白水平;miR-491低表达组TPX2蛋白水平明显高于miR-491高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-491与TPX2蛋白表达呈显著负相关。结论 miR-491在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-491抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用可能与下调TPX2表达有关。

人宫颈癌Hela细胞TPX2基因沉默对放射敏感性的影响

目的观察TPX2基因沉默的人宫颈癌Hela细胞对X射线的敏感性。方法将宫颈癌Hela细胞分为TPX2-siRNA组、NC-siRNA组、Control组,TPX2-siRNA组转染TPX2-siRNA,NC-siRNA组转染NC-siRNA即空载体siRNA,Control组仅加入转染试剂。采用实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各组细胞中的TPX2 mRNA与蛋白。采用CCK8法检测不同剂量(0、2、4、6 Gy)X线照射后TPX2-siRNA组细胞的增殖抑制率。采用流式细胞术检测4 Gy X线照射前后TPX2-siRNA组细胞的凋亡率。结果与NC-siRNA组、Control组相比,TPX2-siRNA组细胞TPX2 mRNA、蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。TPX2-siRNA组细胞接受0、2、4、6 Gy X线照射后,细胞增殖抑制率分别为4.71%±0.15%、5.26%±0.69%、6.64%±0.13%、15.19%±0.73%,两两组间比较P均<0.05。TPX2-siRNA组细胞接受4 Gy X线照射前后细胞凋亡率分别为11.43%±0.03%、12.68%±0.03%,两者比较P<0.05。结论 TPX2基因沉默的人宫颈癌Hela细胞对X射线的敏感性增加。

TPX2在食管鳞癌中mRNA的表达及与临床病理的关系

目的:检测TPX2在食管癌组织中的表达状态,探讨TPX2与食管癌临床及病理参数的关系.方法:运用RT-PCR方法检测62例食管鳞癌组织及其对应的癌前病变组织和正常食管黏膜组织TPX2的mRNA表达水平;探讨TPX2与食管癌临床及病理参数的关系.结果:TPX2在正常食管上皮中不表达或者弱表达,食管癌组织中TPX2的表达率为65.5%(62/40),食管癌旁上皮组织为35.5%(22/62),TPX2在食管癌组织中的表达显著高于食管癌旁上皮及正常上皮组织.且表达水平与食管癌的淋巴结转移和浸润深度相关,组间比较差异有统计学意义(P<0.01).而在不同分级、性别和年龄患者中,TPX2的表达差异无统计学意义.结论:TPX2的表达与食管癌的浸润深度及转移有一定的相关性.

结肠腺癌患者癌组织中TPX2、PTEN和Ki67的关系及临床意义

目的检测结肠腺癌中TPX2、PTEN和Ki67的表达及临床价值。方法选择122例结肠腺癌术后留取的蜡块及患者的临床资料作为观察组,选择73例正常结肠黏膜组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测两组中TPX2、PTEN和Ki67的表达。结果观察组中TPX2和Ki67表达的阳性率明显高于对照组(P<0.05),观察组中PTEN表达的阳性率明显低于对照组(P<0.05),观察组中TPX2、PTEN和Ki67表达的阳性率与淋巴结转移、远处转移、浸润深度和临床分期密切相关(P<0.05)。相关分析显示观察组中TPX2和Ki67(r=0.45,P=0.043 2)的表达呈正相关,而PTEN和Ki67(r=-0.48,P=0.030 4)的表达呈负相关。结论结肠腺癌中TPX2和Ki67高表达、PTEN低表达时对病变的发生和进展均具有重要促进作用。TPX2和PTEN对增殖作用的影响可能是影响肿瘤进展的重要机制。

TPX2在细胞间期参与DNA损伤反应及其与肿瘤发生关系的研究进展

经过多年的研究,TPX2（targeting protein for Xklp2）被认为是与细胞有丝分裂和纺锤体组装相关的一个重要因素,在细胞周期的S和G2期优先存在于细胞核中。由于TPX2在多种癌症中存在高表达,它的异常表达可导致细胞中心体异常扩增、异倍体形成以及细胞癌变的发生,在恶性肿瘤的发生发展中起到原癌基因的作用,进而促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡、增强其侵袭及转移性。

过表达TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的影响

目的通过TPX2过表达慢病毒载体在人宫颈癌HeLa细胞过表达TPX2基因,在体外研究TPX2对人宫颈癌HeLa细胞侵袭和凋亡的作用及其相关机制。方法构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)及阴性对照(LV11-NC),选取稳定感染过表达慢病毒载体(LV11-TPX2)的HeLa细胞作为过表达组,将稳定感染(LV11-NC)的HeLa细胞作为阴性对照组,未感染病毒的人宫颈癌HeLa细胞作为空白对照组(CON)。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)及nm23-H1的表达。结果成功构建TPX2过表达慢病毒载体(LV11-TPX2),可有效过表达TPX2 mRNA及蛋白质。与对照组比较,TPX2过表达组的HeLa细胞凋亡率明显减少(P<0.05),穿过Transwell小室基底膜细胞明显增加(P<0.01)。LV11-TPX2感染组HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显上调(P<0.05),Caspase-3及Bax的表达明显下调(P<0.05);侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平明显下调(P<0.05),MMP-9水平明显上调(P<0.05)。结论在宫颈癌细胞过表达TPX2基因后,能抑制细胞凋亡,增强其侵袭能力,可能的机制为在宫颈癌细胞过表达TPX2能诱导凋亡和侵袭相关蛋白Caspase-3、Bax、nm23-H1及TIMP-1水平下调,Bcl-2及MMP-9水平上调。

siRNA特异性沉默TPX2基因对人宫颈腺癌Hela细胞体外生长的影响

目的:应用TPX2-siRNA转染Hela细胞,探讨TPX2基因沉默后对Hela细胞增殖和侵袭力及周期分布的影响。方法:合成TPX2特异性的siRNA 4对,随机siRNA阴性对照1对。Lipofectamine 2000介导siRNA转染Hela细胞株。RT-PCR检测转染前后mRNA表达的变化,Western blot检测转染前后蛋白表达的变化,MTT、流式细胞术(FCM)、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验观察细胞增殖、周期、及侵袭能力的变化。结果:在600μL转染体积中,在siRNA浓度为20μmoL/L时,siRNA和Lipoectamine2000以2.5:2比例搭配时,转染效率最高,24h为(98.33±1.53)%。TPX2mRNA沉默效果尤以TPX2-siRNA4最强达(82.5±0.43)%,其蛋白表达水平明显降低,抑制率达(63.4±1.05)%。TPX2-siRNA4转染组发生了明显的细胞周期S期停顿现象,细胞增殖受到显著抑制。TPX2-siRNA4转染组穿膜细胞为13.33±1.53显著低于空白对照组54.33±2.52和阴性对照组53.00±4.00(P<0.05)。结论:siRNA干扰TPX2后能抑制Hela细胞增殖和侵袭,影响其周期分布,因此TPX2可以作为人宫颈腺癌基因治疗的候选靶点。

miR-539-5p通过靶基因TPX2调控胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制

目的探究微小RNA-539-5p(miR-539-5p)调控胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制。方法采用实时定量PCR与Western印迹分别检测胃癌细胞系MGC-803、MKN-45、AGS与正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-539-5p、Xklp2靶蛋白(TPX2) mRNA及蛋白的表达。采用miR-539-5p mimics、si-TPX2及miR-539-5p、pcDNA-TPX2共转染胃癌MGC-803细胞。双荧光素酶报告基因实验验证miR-539-5p与TPX2的靶向关系。Western印迹检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达。结果 miR-539-5p在胃癌细胞中比正常胃黏膜上皮细胞显著下调(P<0.05);体外过表达miR-539-5p可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进p21、p27表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达;TPX2是miR-539-5p的靶基因,且miR-539-5p可负向调控TPX2的表达;下调TPX2表达较si-NC组胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显受到抑制;与miR-539-5p+pcDNA组比较,上调TPX2表达可回复miR-539-5p过表达对MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-539-5p可通过下调TPX2表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭,其可能作为未来胃癌治疗的潜在治疗靶点。

siRNA沉默TPX2基因对食管癌细胞EC9706的增殖和TPX2基因表达的影响

目的:研究TPX2基因特异性小干扰RNA(small RNA interference,siRNA)对食管鳞癌EC9706细胞基因表达的抑制作用及对食管癌细胞生长的影响.方法:以食管鳞癌EC9706细胞为研究对象,利用Lipofectamine2000介导TPX2 siRNA分组转染EC9706细胞24,48,72,96h(实验组),并设立阴性对照组和空白对照组.RT-PCR检测siRNA转染前后TPX2 mRNA的表达水平的变化;Western blot检测转染前后EC9706细胞中TPX2蛋白表达水平的变化;MTT法检测瞬时转染TPX2 siRNA对EC9706细胞增殖的影响.结果:导入有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示,TPX2 siRNA可使EC9706细胞中TPX2 mRNA水平及蛋白表达水平下降,至72h时表达量最低,与空白对照组相比分别为0.31±0.08和0.39±0.12,差异有统计学意义(P<0.05);MTT实验显示细胞的生长增殖受到明显抑制,与对照组相比抑制率可达35.4%(P<0.05).结论:siRNA可以有效抑制EC9706细胞中TPX2的表达,并降低EC9706细胞的增殖能力.

慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制

目的:研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌He La细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及其机制。方法:构建4种靶向TPX2基因的慢病毒表达载体(LV-TPX2-sh RNA-1/2/3/4),同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌He La细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 m RNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-sh RNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达。结果:与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制He La细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-sh RNA-1最为明显(P<0.01),故选择LV-TPX2-sh RNA-1进行后续实验。与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低He La细胞增殖及迁移能力(P<0.05),使G2及S期细胞比例明显增加(P<0.05),且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平(P均<0.05)。结论:沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、AuroraA蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关。