目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子...目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。展开更多
目的观察rhIL-33对人胚肺成纤维细胞增殖及其间充质细胞标记物的影响,探讨IL-33/ST2L-TRAF信号通路在肺纤维化形成过程中的作用。方法培养HELF细胞,PCR检测IL-33受体ST2L m RNA;不同浓度梯度的rh IL-33刺激细胞,MTT法检测不同时间点（24...目的观察rhIL-33对人胚肺成纤维细胞增殖及其间充质细胞标记物的影响,探讨IL-33/ST2L-TRAF信号通路在肺纤维化形成过程中的作用。方法培养HELF细胞,PCR检测IL-33受体ST2L m RNA;不同浓度梯度的rh IL-33刺激细胞,MTT法检测不同时间点（24、48、72 h）IL-33对HF细胞增殖的影响;Real-time PCR方法检测IL-33刺激HELF后不同时间点（0、6、12、24、48、72 h）细胞标志性基因α-SMA m RNA、Vimentin m RNA、collagn I m RNA及TRAF-6 m RNA的变化;Western blot法检测细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、I型胶原（collagen I）及关键性信号分子TRAF-6与下游信号分子ERK1/2、JNK、NF-kappa B等的改变。结果 IL-33能促进HELF的增殖,10 ng/ml的IL-33促增殖作用最强,且72 h最为明显;随着IL-33刺激细胞时间的逐渐延长,在0～72 h内α-SMA、Vimentin、collagen I在基因与蛋白水平均先上调后下调,信号分子TRAF-6、ERK1/2、JNK、NF-kappa B（P65）等亦呈现先上调后下调的趋势。结论 IL-33能促进HELF细胞增殖、活化及合成胶原,IL-33/ST2L-TRAF-6通路在此过程中起了关键作用,尤其是在病变早期炎症过程中作用最为明显。展开更多
文摘目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。
文摘目的观察rhIL-33对人胚肺成纤维细胞增殖及其间充质细胞标记物的影响,探讨IL-33/ST2L-TRAF信号通路在肺纤维化形成过程中的作用。方法培养HELF细胞,PCR检测IL-33受体ST2L m RNA;不同浓度梯度的rh IL-33刺激细胞,MTT法检测不同时间点（24、48、72 h）IL-33对HF细胞增殖的影响;Real-time PCR方法检测IL-33刺激HELF后不同时间点（0、6、12、24、48、72 h）细胞标志性基因α-SMA m RNA、Vimentin m RNA、collagn I m RNA及TRAF-6 m RNA的变化;Western blot法检测细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、I型胶原（collagen I）及关键性信号分子TRAF-6与下游信号分子ERK1/2、JNK、NF-kappa B等的改变。结果 IL-33能促进HELF的增殖,10 ng/ml的IL-33促增殖作用最强,且72 h最为明显;随着IL-33刺激细胞时间的逐渐延长,在0～72 h内α-SMA、Vimentin、collagen I在基因与蛋白水平均先上调后下调,信号分子TRAF-6、ERK1/2、JNK、NF-kappa B（P65）等亦呈现先上调后下调的趋势。结论 IL-33能促进HELF细胞增殖、活化及合成胶原,IL-33/ST2L-TRAF-6通路在此过程中起了关键作用,尤其是在病变早期炎症过程中作用最为明显。
