基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结MS-IR大鼠炎症因子影响

目的基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结代谢综合征胰岛素抵抗(MS-IR)大鼠糖代谢、脂代谢、炎症因子的部分作用机制。方法48只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组和造模组。造模组大鼠采用高脂高糖饲料喂养,注射小剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg),同时用物理刺激方法,建立痰瘀互结型MSIR大鼠模型。造模成功后将大鼠随机分为模型组,柴苓合剂低、中、高剂量组,西药组进行干预。给药各组分别进行柴苓合剂、吡格列酮干预治疗3周,空白组、模型组给予等体积的蒸馏水灌服。生化检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western Blot检测肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达;HE染色切片,光学显微镜观察用药前后肝细胞损伤、肝细胞坏死、脂质堆积、炎症细胞浸润等情况。结果(1)糖代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高、中剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平降低(P<0.01)。(2)脂代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.05,P<0.01),柴苓合剂低剂量组TG、CHO水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01)。(3)TNF-α、IL-6水平。与空白组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05,P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01)。(4)肝组织TRAF2/JNK/AP-1信号通路蛋白表达。与空白组相比,模型组大鼠肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达均上调(P<0.01);与模型组比较,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂低、中剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂中剂量组肝组织AP-1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),TRAF2、JNK蛋白表达水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论柴苓合剂高剂量能显著改善痰瘀互结MS-IR大鼠糖代谢、脂代谢和炎症因子,其作用机制可能是柴苓合剂通过调控TRAF2蛋白作用于JNK蛋白,引起它的下游反应,又通过JNK的磷酸化作用于AP-1,释放炎症因子,从而TRAF2作用于JNK,然后磷酸化于AP-1使炎症因子降低有关。

雷公藤多苷通过Nur77-Traf2-P62信号通路治疗溃疡性结肠炎的机制研究

目的研究雷公藤多苷(tripterygium glycosides,TG)对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠黏膜损伤的影响及调控机制。方法将40只小鼠采用随机数字表法分为正常组,模型组,雷公藤多苷低、中、高剂量组(给药浓度分别为9.00、27.03、81.09mg/kg)。除正常组外,其余组小鼠均饮用5%DSS诱导UC模型。造模后,模型组小鼠予生理盐水灌胃,其余处理组小鼠予相应剂量的TG灌胃。比较各组小鼠的质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠病理组织学损伤情况。使用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测TNF-α、MDA、SOD水平差异。Western blot法检测结肠中Nur77、TNF受体关联因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,Traf2)、核孔蛋白62(nucleoporin 62,P62)、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(autophagy protein-microtubule associated protein1 light chain 3,LC3)分子表达。结果与空白组相比,模型组小鼠的体质量、结肠长度、SOD、Nur77、Traf2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平降低(P<0.05),DAI、结肠病理评分、TNF-α、MDA、P62水平升高(P<0.05)。与模型组相比,雷公藤多苷低、中、高剂量组小鼠体质量、结肠长度、SOD、Nur77、Traf2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增长(P<0.05),DAI、TNF-α、MDA、P62水平均降低(P<0.05)。雷公藤多苷中、高剂量组小鼠病理评分降低(P<0.05)。结论TG能够通过Nur77-Traf2-P62信号通路治疗UC。

天麻素经IRE1α/TRAF2/NF-κB通路调控大鼠急性心肌梗死诱导的炎性反应及机制研究

目的探讨天麻素对大鼠急性心肌梗死(AMI)诱导的炎性反应的影响,并分析其作用机制。方法50只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(AMI)组、天麻素低剂量(L-GAD)组、天麻素高剂量(H-GAD)组、卡托普利(CAP)组,每组10只。采用超声心动图检测大鼠心功能,TTC染色评估大鼠心肌梗死面积比,HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化,ELISA法和qRT-PCR法分别检测大鼠血清及心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量及mRNA表达,Western blot法检测大鼠心肌组织中肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)/核因子(NF)-κB通路蛋白表达。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心肌组织受损,存在明显心肌梗死,LVEF降低,LVDs和LVDd升高,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达升高,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AMI组比较,L-GAD、H-GAD组和CAP组大鼠心肌组织损伤减轻,心肌梗死面积比减小,LVEF升高,LVDs和LVDd降低,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达降低,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论天麻素可通过调控IRE1α/TRAF2/NF-κB通路减轻AMI大鼠心肌组织损伤及心肌梗死面积,改善大鼠心功能,抑制炎性反应。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制，对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照，采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物；②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒，以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ；③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应；④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料，应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法，确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物?

肿瘤坏死因子受体及其信号转导蛋白TRAF2在喉癌中的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)和其转导蛋白TRAF2的表达及其与喉鳞状细胞癌生物学行为的关系。方法:利用免疫组织化学及原位末端标记法,对33例喉鳞状细胞癌组织TNFR1、TNFR2和TRAF2的表达及其凋亡指数进行检测。结果:①33例喉鳞状细胞癌中,21例TNFR1表达阳性(63.6%),2例TNFR2表达阳性(6.1%),两者表达染色阳性部位主要集中在细胞膜上,表达程度与喉鳞癌的生物学行为无关(P>0.05);②33例喉鳞状细胞癌中,23例TRAF2表达阳性(69.7%),其表达部位主要位于细胞浆中。TRAF2的表达程度与喉鳞癌的病理分级有关(P<0.05),与其他的生物学行为无关(P>0.05);③TRAF2的表达与TNFR1的表达具有明显的正相关(r=0.637,P<0.01);④TNFR1、TRAF2表达阳性组织的细胞凋亡指数(3.12±1.47及2.85±1.19)显著低于TNFR1、TRAF2表达阴性组织(4.28±1.34及5.12±0.81)(P<0.05及P<0.01)。结论:TNFR1信号转导过程中募集TRAF2增强肿瘤细胞抗凋亡能力,与肿瘤的分化和恶性程度有一定关系,缺乏表达TNFR2可能对喉癌的发生发展有一定作用。

胃腺癌组织中凋亡相关因子TRAF2、Caspase-8的表达及其临床意义

目的探讨TRAF2与Caspase-8在胃腺癌组织中的表达及其临床意义,并分析两者之间的相关性。方法分别采用qRT-PCR及Western blot法检测60例新鲜胃腺癌组织和55例癌旁正常胃黏膜组织中TRAF2、Caspase-8 mRNA及蛋白的表达。结果胃腺癌组织中TRAF2 mRNA和蛋白相对表达量均高于癌旁正常胃黏膜组织;胃腺癌组织中Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达量均低于癌旁正常黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。TRAF2和Caspase-8蛋白在胃腺癌组织中的表达呈负相关(P<0.05,r_s=-0.68),两者mRNA在胃腺癌组织中的表达无明显相关性。胃腺癌组织中TRAF2及Caspase-8蛋白表达均与患者性别、年龄无关(P>0.05);与分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度有关(P<0.05)。结论 TRAF2因子在胃腺癌中表达上调,而Caspase-8表达下调,两者呈负相关,在胃腺癌中TRAF2因子可能通过下调Caspase-8发挥抗凋亡作用。联合检测TRAF2、Caspase-8有可能作为胃腺癌的预后指标,并有望成为胃腺癌治疗的新靶点。

TRAF1/TRAF2 mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF1/TRAF2)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及与SLE疾病活动指数(SLE DAI)是否相关。方法14例正常人和20例活动期SLE患者(SLE活动指数以SLE DAI为判断标准),取静脉血分离PB MC,采用RT PCR半定量法,检测TRAF1 和TRAF2 mRNA表达。结果TRAF1 mRNA在SLE患者PBMC的表达较正常人为高,但与SLE DAI指数无相关性。TRAF2与正常人比较无差异。结论TRAF1/TRAF2基因可能在SLE的发病机制中起重要作用。

丹皮酚对胰腺癌PANC-1细胞凋亡及GRP78/TRAF2信号通路的影响

目的:探讨丹皮酚对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、凋亡作用及其对GRP78/TRAF2信号通路的影响。方法:体外培养胰腺癌PANC-1细胞,通过丹皮酚干预,分别处理0h、24h、48h、72h后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,集落试验检测细胞克隆能力,划痕试验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平。将PANC-1细胞分为空白对照组、100μg/ml丹皮酚组和200μg/ml丹皮酚组,采用Western blot法检测细胞内质网应激相关蛋白(GRP78和TRAF2)和凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3和Bax)的表达,并加入内质网应激抑制剂4-PBA(4-phenylbutyric acid)观察蛋白表达的变化。结果:CCK-8法、集落试验、划痕试验结果显示丹皮酚能显著抑制细胞增殖、克隆及迁移能力,流式细胞术结果显示丹皮酚能够诱导细胞凋亡;丹皮酚能够上调GRP78、TRAF2、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspae-3和Bax的表达;与单用丹皮酚组比较,4-PBA联合丹皮酚组会抑制GRP78、TRAF2及Cleaved Caspase-12的上调作用。结论:丹皮酚可抑制细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡;丹皮酚促凋亡机制可能与上调GRP78/TRAF2信号通路相关。

柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠内质网应激相关分子IRE1和TRAF2表达的影响

目的柴胡疏肝散对功能性消化不良(FD)大鼠胃窦组织内质网应激因子肌醇需求酶1(IRE1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的影响。方法将30只大鼠随机均分为5组:柴胡疏肝散组、多潘立酮组、生理盐水组、模型组、正常组。正常组大鼠正常饲养,模型组只夹尾不灌药,其余组给予对应的液体灌胃。造模过程中,记录大鼠生活状态的变化。干预1个月后,测定大鼠胃排空率,免疫组织化学法观察各组IRE1、TRAF2蛋白表达情况,用逆转录PCR测定胃窦组织IRE1、TRAF2 mRNA的表达。结果生理盐水组、模型组胃排空率较正常组降低(P<0.05),柴胡疏肝散组和多潘立酮组胃排空率较模型组增高(P<0.05)。与正常组大鼠比较,模型组和生理盐水组IRE1、TRAF2蛋白水平明显上调;与模型组对比,各给药组的IRE1、TRAF2蛋白呈下调趋势(P<0.05)。RT-PCR显示柴胡疏肝散组和多潘立酮组的IRE1、TRAF2 mRNA的表达较模型组降低,而模型组IRE1、TRAF2 mRNA的表达比正常组高(P<0.05)。结论柴胡疏肝散通过抑制内质网应激分子IRE1和TRAF2来促进FD大鼠的胃动力。

妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织中GRP78、TRAF2、Caspase-12蛋白的表达

目的:探讨内质网应激(ERS)及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、Caspase-12与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法:60只健康雌性SD大鼠随机分为4组:高脂高糖饮食受孕组(HP)、高脂高糖饮食未孕组(HV)、普通饮食受孕组(NP)、普通饮食未孕组(NV),分别给予相应处理。测定妊娠末期空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用HE染色观察胰腺组织形态学改变,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡指数(AI),免疫组化法测定GRP78表达,Western blot法测定TRAF2、Caspase-12蛋白表达。结果:妊娠和高脂高糖饮食均可使大鼠FBG、FINS、HOMA-IR和血脂升高,二者具有协同作用(P<0.05)。妊娠第21天时,HP组胰岛出现不同程度萎缩,细胞数量明显减少,可见核固缩和核裂解;妊娠、高脂高糖饮食均可导致大鼠胰腺组织中GRP78、TRAF2、Caspase-12表达升高,并且二者具有协同效应(P<0.05)。结论:妊娠和高脂高糖饮食均参与了ERS,ERS可能通过TRAF2-Caspase-12信号通路诱导胰岛细胞凋亡,继而参与GDM的发生发展。

人TRAF2新剪切体的鉴定与表达分析

目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析。方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在。再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析。结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子。通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势;而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRATΔ6剪切体表达占优势;在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达;在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近。在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势。结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA,而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性。

复方丹参滴丸通过调控IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路降低内质网应激和自噬保护血管平滑肌细胞

目的探讨复方丹参滴丸通过调控内质网应激和自噬保护血管平滑肌细胞的分子机制。方法50例动脉粥样硬化患者随机分为两组,一组正常治疗,另一组加入复方丹参滴丸并进行临床疗效观察。将血管平滑肌细胞分为对照组、ox-LDL模型组、复方丹参滴丸组、复方丹参滴丸+内质网应激抑制剂组、复方丹参滴丸+内质网应激诱导剂组。检测增殖情况,测定各组血管细胞舒张功能因子与氧化应激情况,分别检测内质网应激标志蛋白,自噬标志蛋白及凋亡相关蛋白表达情况,并检测IRE1-TRAF2-ASK1-JNK信号通路的激活情况。结果与对照组相比,ox-LDL模型组细胞的各项指标显示其处于内质网应激、高氧化应激、高自噬状态,并且发现IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路被过度激活。而与ox-LDL模型组相比,复方丹参滴丸组和复方丹参滴丸+内质网应激抑制剂组的上述指标均明显好转,IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路被过度激活得到改善,且内质网应激抑制剂更为明显,复方丹参滴丸+内质网应激诱导剂组则明显逆转了复方丹参滴丸的好转。结论复方丹参滴丸通过抑制IRE1-TRAF2-ASK1-JNK通路的过度激活,降低内质网应激,维持适当自噬,抑制细胞异常增殖和凋亡,从而保护血管平滑肌细胞。

糖络宁对DPN中IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠内质网应激IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响。方法以高脂饲料联合链脲佐菌素诱导SD大鼠致DPN模型,经糖络宁干预12周后,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠坐骨神经形态的变化,采用免疫荧光法检测DPN大鼠坐骨神经EDEM、PDI和TRAF2蛋白表达,采用Western blot法检测DPN大鼠坐骨神经细胞凋亡途径P-JNK和caspase-3的蛋白表达。选用RSC96细胞株,采用高糖环境培养的施万细胞模型,用糖络宁含药血清分别干预24h和48h,采用高内涵分析方法分别测定糖络宁含药血清对施万细胞中EDEM、PDI、TRAF2和P-JNK蛋白表达的影响。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠坐骨神经髓神经脱髓鞘严重;糖络宁低、高剂量组坐骨神经脱髓鞘现象得到改善,坐骨神经髓鞘积分吸光度显示,模型组比空白组明显降低(P <0. 05),糖络宁高剂量组得到明显改善(P <0. 05);免疫荧光结果显示,糖络宁高低剂量组能使EDEM和PDI表达增加(P <0. 01,P <0. 05),TRAF2表达降低(P <0. 01,P <0. 05); Western blot法检测结果显示,糖络宁高低剂量均显示P-JNK和caspase-3的表达降低。细胞实验中,24h和48h干预后的150mmol/L葡萄糖组EDEM与PDI显著性降低(P <0. 01),TRAF2与P-JNK显著性升高(P <0. 01);高糖高剂量组的EDEM在24h干预后的表达显著升高(P <0. 01),而P-JNK表达显著降低(P <0. 05); PDI在48h干预后的表达显著升高(P <0. 01);高糖高、低剂量组的TRAF2在24h和48h干预后均显著降低(P <0. 01)。结论糖络宁能够改善受损的坐骨神经结构,与糖络宁影响内质网应激相关IRE1-TRAF2-JNK途径相关,通过促进EDEM和PDI的表达,抑制TRAF2、P-JNK和caspase-3的表达,从而抑制神经细胞凋亡,改善DPN。

哮喘大鼠TLR1、FasL和TRAF2表达及甲基强的松龙干预作用

目的:探讨TLR1、FasL和TRAF2在大鼠哮喘炎症机制中的作用,观察甲基强的松龙对其表达的影响。方法:27只SD大鼠,随机分成哮喘模型组、正常对照组和甲基强的松龙组,每组9只,采用流式细胞术检测血淋巴细胞TLR1和FasL表达,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2表达。结果:哮喘组血淋巴细胞TLR1表达水平显著低于甲基强的松龙组(P<0.05),正常对照组血淋巴细胞TLR1表达水平分别与哮喘组及甲基强的松龙组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。哮喘组和甲基强的松龙组血淋巴细胞FasL表达水平均显著高于正常对照组(P均<0.05),而哮喘组血淋巴细胞FasL表达水平与甲基强的松龙组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组TRAF2光密度值显著高于正常对照组和甲基强的松龙组(P均<0.01),甲基强的松龙组TRAF2光密度值与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘模型大鼠FasL和TRAF2表达增加,而TLR1无变化;甲基强的松龙能下调TRAF2和提升TLR1水平,从而起到抗炎作用。

TRAF2在TNF诱导细胞凋亡过程中的作用及其信号转导途径

TNF诱导细胞凋亡的作用是通过许多信号分子共同参与完成的一个网络工程 ,其中TRAFs家族蛋白 ,尤其是TRAF2 ,是这一信号调节网络的中心环节。本文介绍了TRAF2在TNF诱导细胞凋亡过程中的作用及其信号转导途径。TN FR在与TNF结合后发生聚集 ,并募集TRAF2直接与TNFR2胞内段结合 ,或通过结合其他接头分子与TNFR1间接相连 ,TRAF2主要通过激活NIK和JNK/SAPK 2个独立的信号转导途径对细胞发挥凋亡调节作用 ,具有凋亡保护功能。深入研究TRAF2的结构与功能 ,有利于加深对凋亡调节机理的认识。

NF-κBp65、TRAF2、cyclinD1在口腔扁平苔藓中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)中NF-κBp65、TRAF2、cyclinD1的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组化方法检测60例OLP(30例糜烂萎缩型、30例非糜烂型)及40例正常口腔黏膜(对照组)中NF-κBp65、TRAF2、cyclinD1的表达及细胞凋亡情况。结果OLP中上皮细胞凋亡指数(67.32±18.99)明显高于正常对照组(19.43±4.31),而固有层的凋亡指数(34.12±9.89)明显低于正常对照组(60.52±8.42)(P<0.05)。OLP的上皮层角质细胞NF-кBp65、TRAF2、cyclinD1的阳性率分别为85.00%、76.67%和71.67%,明显高于正常对照组(P<0.05)。固有层淋巴细胞NF-кBp65、TRAF2、cyclinD1的阳性率分别为91.67%、86.67%和70%,明显高于正常对照组(P<0.05)。糜烂型组固有层中NF-кBp65阳性表达低于非糜烂型组。OLP固有层淋巴细胞NF-κBp65表达水平与上皮细胞的凋亡指数呈正相关,与其自身的凋亡呈负相关。固有层淋巴细胞TRAF2、cyclinD1表达水平均与其自身的凋亡指数呈负相关。OLP上皮层和固有层TRAF2、cyclinD1表达均与NF-κBp65表达呈正相关。结论OLP中同时存在角质细胞凋亡亢进及固有层淋巴细胞凋亡的减少,这种凋亡的异常可能与OLP的发生发展密切相关。OLP中NF-κBp65阳性表达,并出现异常核表达,提示NF-κBp65在OLP发病中起一定作用。

TRAF2在人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的作用

目的利用人B细胞株模型探讨TRAF2在调控AP-1信号系统中的作用。方法将融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,以及小干扰RNA-TRAF2质粒转染至人类B淋巴细胞株,过夜培养后经流式细胞仪或抗生素G418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法研究TRAF2对AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和AP-1亚单位的细胞核内转移等的影响。结果B细胞过度表达WT-TRAF2可增加ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录,而过度表达DN-TRAF2或转染小干扰RNA-TRAF2则减少ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录。结论TRAF2可选择性地作用于人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的部分激酶,对B细胞AP-1信号系统的活化有重要作用。

过表达TRAF2降解外源性绿色荧光蛋白

TRAF2是机体免疫与炎症反应中具有重要作用的蛋白,有E3连接酶活性;GFP是一种受到激发光照射后可产生绿色荧光的蛋白,常用于蛋白质的细胞共定位研究,并显示与GFP融合表达靶蛋白在细胞中的位置.我们实验发现共转染表达质粒pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3,可引起转染细胞绿色荧光减弱.Western印迹实验证明TRAF2可以降解GFP,并且这种降解是通过蛋白酶体途径进行的.为进一步确定这种降解的特异性,在HEK293细胞中共转pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3-LNX后,发现随着TRAF2表达量增加,融合蛋白GFP-LNX减少;而共转质粒pCMV-myc-TRAF2与pCMV-myc-LNX后,未发现LNX蛋白表达减少,表明TRAF2对GFP的降解具有相对特异性.GFP是人类细胞中并不存在的蛋白,TRAF2能够将其降解可能意味着TRAF2参与了细胞抗病原体感染的过程.