TROP2蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP2)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系,明确TROP2的表达与SACC患者预后的相关性。方法 本研究获得单位伦理委员会的批准,采用免疫组织化学方法检测TROP2在85例SACC组织及各自癌旁组织中的表达情况,分析其表达情况与临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier法对40例SACC患者进行TROP2蛋白表达与患者术后五年无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系分析;同时,采用Logistic回归模型分析影响SACC患者预后的因素。结果 TROP2在SACC组织中的低表达或不表达率显著高于癌旁组织(P<0.001);TROP2低表达或不表达与SACC患者肿瘤的生长以及临床分期呈显著正相关性(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达的SACC患者的DFS显著低于高表达患者(P<0.05),预后不良。Logistic回归模型预后分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达(OR=5.37;95%CI:1.03~28.08;P=0.046)与Ⅲ-Ⅳ临床分期(OR=6.89;95%CI:1.37~34.77;P=0.019)均为影响SACC患者预后的危险因素。结论 TROP2蛋白在SACC组织中低表达或不表达,患者预后不良,与肿瘤的生长、临床分期呈正相关,且TROP2低表达或不表达可作为SACC患者预后不良的独立危险因素,TROP2为SACC患者预后不良的标志物。

靶向Trop-2蛋白的抗体药物

Trop-2(Trophoblast surface antigen 2,滋养层细胞表面抗原2)蛋白是一种位于细胞膜上的膜糖蛋白,在胚胎发育和组织再生中起着重要的调节作用。Trop-2蛋白在正常组织中几乎不表达,而在肿瘤细胞中高表达。Trop-2蛋白是抗肿瘤药物的一种理想靶点,正在广泛开发靶向Trop-2的相关药物,其中抗体靶向药物是重要的研究方向。本文主要综述了当前在研发的靶向Trop-2的抗体药物,如h RS7、Sacituzumab govitecan、Datopotamab Deruxtecan、RN927C、Trop-2 IgG Rap、SHR-A1921、DB-1305、BAT8003等。靶向Trop-2的抗体药物有着广泛的应用前景,不过也存在复杂的药代动力学特性和肿瘤渗透性较差等不足,有待开发更优的靶向Trop-2抗体药物。

Trop-2基因在膀胱尿路上皮癌中的遗传表达和临床意义

目的通过对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中膀胱尿路上皮癌(BLCA)的数据挖掘,探讨Trop-2基因的表达及其临床意义,为Trop-2作为临床治疗靶点提供理论依据。方法利用GEPIA2、cBioPortal等在线工具分析Trop-2在泛癌中的表达情况。采用HPA数据库比较正常膀胱组织与BLCA组织Trop-2的免疫组织化学染色结果,分析其蛋白表达差异。利用R4.1.2对从TCGA数据库中提取的BLCA的基因表达信息进行富集分析,以发现潜在通路。采用共表达基因分析和肿瘤免疫浸润分析,研究Trop-2在BLCA发生中的可能作用。结果免疫组织化学染色结果证实,BLCA组织中Trop-2表达呈上调趋势,且通过参与细胞周期、p53信号通路等过程促进BLCA细胞生长、增殖和转移。肿瘤免疫浸润分析显示,Trop-2及共表达基因与B细胞呈显著正相关,而与T细胞(CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞)呈显著负相关,一定程度上说明了免疫过程在肿瘤发生中的作用。结论Trop-2在BLCA中呈高表达,同时通过多种通路和免疫过程调控肿瘤的发生,因此可能成为BLCA诊断和治疗的潜在靶点。

TROP2通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制

目的探讨人滋养层细胞表面糖蛋白2(TROP2)通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制。方法构建TROP2与PLOD2过表达/敲减细胞株,WB、RT-qPCR检测TROP2、PLOD2、磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)、胶原蛋白I型(COL-I)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、蛋白激酶C(PKC)mRNA和蛋白的表达水平,ELISA法检测三磷酸肌醇受体(IP3R)含量,比色分析法检测Fe^(2+)和Ca^(2+)含量。结果随着TROP2的表达量的变化,PLOD2、PIP2、IP3等蛋白水平随之同步变化,在PLOD2的过表达和敲减模型中,无论PLOD2如何变化,TROP2、PIP2、IP3R、PKC并无明显变化,但COL-I、HIF-1α随着PLOD2的变化同步增减。在离子水平,内质网Ca^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈正相关,Fe^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈负相关。结论PLOD2上游受TROP2的钙离子信号转导通路“内质网Ca^(2+)-Fe^(2+)交换”调控,下游通过调控HIF1α和胶原纤维交联促进肿瘤的侵袭、转移。

我国TROPS运动的理论建构与实践

20世纪末 ,日本体育社会学学者影山健提出了“TROPS运动”的概念 ,意指与SPORT平行发展的、服务于大众健康的体育运动形态。从人类健康和社会发展的视角出发 ,论证了在我国建构TROPS运动体系的必要性 ;提出了建构TROPS运动体系的首要任务是构筑理论框架和挖掘与开发操作性强的运动项目。

血液D-D,NT-proBNP和TropⅠ联合检测在急性胸痛症早期诊断中的价值

目的分析联合检测血液D-二聚体(D-D),N末端B型脑钠肽(NT-proBNP)和超敏肌钙蛋白Ⅰ(TropⅠ)三项指标在急性胸痛患者早期诊断中的鉴别意义。方法以急性胸痛、胸闷、呼吸困难等为主要表现的急诊患者109例,入院后立即静脉采血检测,经确诊分为急性心肌梗死(AMI)组58例、急性肺动脉梗死(APE)组28例和急性主动脉夹层(AAD)组23例,同时随机分为联合检查组和常规检查组;另选同期健康体检人员101例作为对照组。分别比较三组患者基本资料,D-D,NT-proBNP和TropⅠ水平值,联合检查组和常规检查组入院初步诊断准确率差异。结果 AMI,APE和AAD三组间年龄、吸烟、高血压史、糖尿病史、高脂血症和血CK-MB差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.001);D-D,NT-proBNP,TropⅠ值与对照组比较差异均有统计学显著性意义(P<0.05)。对照组D-D值与AMI组比较,APE组和AAD组比较差异均有统计学显著性意义(P<0.05),NT-proBNP值与APE组比较,AMI组和AAD组比较差异有统计学显著性意义(P<0.05);TropⅠ值与AMI组比较,APE组和AAD组比较差异有统计学显著性意义(P<0.05);联合检测D-D,NTproBNP,TropⅠ三种标志物并结合临床表现及其他影像学检查在急性胸痛患者中初步诊断准确率可达95.4%,而常规的心电图、血细胞检测、电解质及心肌酶谱等诊断胸痛患者,其准确率仅为89.0%,两者间差异有统计学显著性意义(P<0.05)。结论对于急性胸痛症患者,联合检测D-D,NT-proBNP和TropⅠ并结合病史能够有效的帮助医生进行快速、准确地作出早期诊断,从而减少误诊,有效地提高患者生存率,对挽救生命具有重要意义。

人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化

目的 :探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件。方法 :将含有抗Trop-2 Fab抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度、诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性。结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值。结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础。

人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的 :观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :realtime PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 m RNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)]的变化情况。结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的m RNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的m RNA表达水平与未转染组相比提高(6.18±0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和m RNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87±6)个,而空载对照组为(41±6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调。结论 :Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关。

沉默TROP2基因抑制胃癌BGC-823细胞体外迁移侵袭能力

目的探讨TROP2基因在胃癌细胞迁移侵袭过程中的作用。方法用基因克隆技术构建针对TROP2的小干扰RNA(siRNA),瞬时转染胃癌BGC-823细胞系,荧光实时定量PCR和Western blot法检测细胞TROP2mRNA和蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移侵袭能力。结果酶切鉴定和DNA测序分析显示,TROP2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。筛选得到最佳干扰效果质粒,该质粒转染细胞后,细胞增殖和迁移侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论干扰TROP2基因具有抑制胃癌BGC-823细胞迁移侵袭的作用,TROP2基因可能成为癌基因靶向治疗的分子靶点。

稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析

目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长、增殖和侵袭特性的影响。方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)。用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力。结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖、克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多。结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用。

增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒疫苗的制备、纯化及活性研究

目的 获得嵌合免疫增强佐剂CD40配体（CD40L）的Trop2-CD40L病毒样颗粒（VLPs）疫苗,为后续探究VLPs在肿瘤治疗中的免疫原性及免疫保护作用奠定基础。方法 通过重叠延伸PCR方法扩增以Trop2为靶点、嵌合免疫佐剂CD40L的Trop2-CD40L融合基因,构建杆状病毒表达载体pFastbacTM /Trop2-CD40L,并转化大肠埃希菌E.coli DH10bac,提取杆粒并经PCR鉴定成功命名为Trop2-CD40L Bacmid,后者转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2-CD40L rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞制备重组病毒样颗粒,透析浓缩后蔗糖密度梯度离心纯化,Western Blot鉴定VLPs目的蛋白表达、电镜观察所制备VLPs形态,Cytokine ELISA方法检测Trop2-CD40L VLPs体外生物学活性。结果 成功扩增了Trop2-CD40L融合基因,通过杆状病毒表达系统、借助SIV Gag衣壳蛋白装配特点成功制备了增强型Trop2-CD40L 病毒样颗粒,与Trop2 VLPs比较具有更好的生物学活性,差异具有统计学意义（t=7.266,,P〈0.05）。结论 制备出具有一定生物学活性的增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒,证实了CD40L作为免疫佐剂使用有免疫增强效应。

Trop2病毒样颗粒的制备及纯化研究

目的获得Trop2为靶点的病毒样颗粒(VLPs),为进一步体内诱导实验和疫苗研究提供依据。方法利用分子克隆技术构建Trop2真核表达载体pCAGGs/Trop2和杆状病毒表达载体pFastbac1/Trop2,以pCAGGs/Trop2表达载体转化Hela细胞,用免疫细胞化学方法确定Trop2蛋白表达并锚定于胞膜上;以pFastbac1/Trop2转化大肠杆菌E.coliDH10bac菌株获得重组杆粒Trop2Bacmid,转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与本室保存的Gag rBV共感染昆虫细胞得到重组VLPs,透析浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化、蛋白免疫印迹(WB)鉴定,电镜观察病毒形态。结果构建成功的重组杆粒Trop2Bacmid转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞获得重组Trop2VLPs。结论成功制备了Trop2VLPs,为其后续诱导体液和细胞免疫应答研究奠定了基础。

过表达TROP2对细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨过表达肿瘤相关钙信号转导因子2(TROP2)对细胞增殖及迁移的影响,为阐明肿瘤的发生机制提供新的途径。方法构建TROP2真核表达载体pcDNA3-TROP2;采用脂质体法将pcDNA3-TROP2转染入人正常肝细胞LO2中,并通过G418压力筛选获得稳定表达TROP2的细胞株,之后通过MTT法检测细胞的活力,通过划痕法检测细胞的迁移能力。结果成功获得了过表达TROP2的细胞株;进一步的研究结果显示,过表达TROP2可增强细胞的活力和迁移能力。结论过表达TROP2可促进肿瘤的发生,此结果为阐明肿瘤发生机制及肿瘤治疗提供了新的途径。

Trop-2在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨人滋养层细胞表面抗原-2(Trop-2)在结直肠癌中的表达及其意义。方法用免疫组化法检测84例结直肠癌组织标本及其相对应的癌旁正常组织中的Trop-2表达情况,分析其表达与临床病理特点的关系,进一步采用Western blot检测34例手术标本的Trop-2表达情况。结果 Trop-2在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);Trop-2表达量:直肠癌(RC)组﹥左半结肠癌(LSCC)组﹥右半结肠癌(RSCC)组(P<0.05),Dukes'C+D组﹥A+B组(P<0.05),淋巴结转移组﹥无淋巴结转移组(P<0.05),远处转移组﹥无远处转移组(P<0.05);与性别、年龄、分化程度无关。结论 Trop-2在结直肠癌组织中高表达,与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤所在部位有关。

siRNA下调TROP-2基因表达对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨TROP-2基因小干扰RNA对胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响。方法培养人胰腺癌CFPAC-1细胞株,采用TROP-2基因小干扰RNA转染胰腺癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因的mRNA和蛋白水平,随后以划痕法观察癌细胞迁移、以Boyden法检测癌细胞侵袭力。结果以TROP-2 siRNA转染胰腺癌CFPAC-1细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白含量明显下降,且呈时间和浓度依赖性(P<0.001;P<0.001);划痕试验和Boyden试验结果显示,细胞迁移和侵袭力均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.001;P<0.001)。结论 TROP-2基因可能在胰腺癌细胞迁移和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胰腺癌细胞,可抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

TROP2在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床病理的关系

目的检测TROP2在食管鳞状细胞癌组织中的表达,探讨其与临床病理的关系。方法实时荧光定量PCR方法对50例食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织TROP2的表达水平检测,分析其与临床病理资料的关系。结果 TROP2在癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);TROP2的高表达分别与食管癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05)。结论 TROP2的高表达与食管鳞状细胞癌临床病理密切相关。

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P<0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P<0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。

肿瘤相关抗原Trop-2胞外区片段蛋白的表达及其特性分析

目的:从临床乳腺癌组织中扩增肿瘤相关抗原Trop-2胞外肽段基因,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对该蛋白的生物学特性进行鉴定。方法:RT-PCR扩增Trop-2胞外肽段基因并克隆于pMD18-T载体中进行测序分析,用NcoⅠ和EcoRⅠ将含Trop-2胞外区重组基因的质粒双酶切后,克隆到pBAD-gⅢ中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌TOP10,以L-阿拉伯糖诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经后His柱亲和层析纯化后,用Western blot、ELISA检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot显示,表达的重组蛋白分子质量约为38ku,此抗原能够与商业化抗体特异性结合。结论:成功制备Trop-2胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的Trop-2胞外肽段保持了原有的抗原性。

乳腺癌组织中Trop-2蛋白的表达及意义

目的:探讨Trop-2在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义。方法选择125例乳腺癌组织、30例正常乳腺组织和30例乳腺良性增生组织,应用免疫组织化学SABC法检测Trop-2的表达水平。结果125例乳腺癌中Trop-2阳性者84例(67.2%);30例乳腺良性增生组织 Trop-2阳性者11例(36.7%);30例正常乳腺组织Trop-2阳性者8例(26.7%);Trop-2阳性表达率与乳腺癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期有关,而与患者年龄、肿瘤大小无显著相关性。结论乳腺癌高表达Trop-2。 Trop-2的异常表达可能参与了乳腺癌的发生、发展过程,Trop-2有望成为乳腺癌治疗的分子靶点。