沉默TROP2基因抑制胃癌BGC-823细胞体外迁移侵袭能力

目的探讨TROP2基因在胃癌细胞迁移侵袭过程中的作用。方法用基因克隆技术构建针对TROP2的小干扰RNA(siRNA),瞬时转染胃癌BGC-823细胞系,荧光实时定量PCR和Western blot法检测细胞TROP2mRNA和蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移侵袭能力。结果酶切鉴定和DNA测序分析显示,TROP2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。筛选得到最佳干扰效果质粒,该质粒转染细胞后,细胞增殖和迁移侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论干扰TROP2基因具有抑制胃癌BGC-823细胞迁移侵袭的作用,TROP2基因可能成为癌基因靶向治疗的分子靶点。

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P<0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P<0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。

胃癌肿瘤干样细胞上Trop2基因的表达情况

目的:探讨Trop2基因在无血清悬浮培养法诱导的胃癌肿瘤干样细胞上的表达情况。方法:无血清悬浮培养胃癌细胞系MGC803,观察肿瘤细胞球形成情况;流式细胞仪检测肿瘤细胞球中CD44+、CD54+、Ep CAM及Trop2所占比例;检测肿瘤细胞球的细胞周期变化情况;定量PCR检测肿瘤细胞球中肿瘤干细胞调控基因Oct4、Snail、Nanog及Trop2基因含量。结果 :胃癌细胞系MGC803在无血清悬浮培养的条件下,约14 d能形成肿瘤细胞球且数量较多,肿瘤细胞球中CD44+、CD54+、Ep CAM及Trop2含量明显高于正常培养条件下的MGC803细胞组(P<0.05);肿瘤细胞球中的细胞周期G1期明显低于正常培养组,S期明显高于正常培养组(P<0.05);肿瘤细胞球中肿瘤干细胞调控基因Oct4、Snail、Nanog及Trop2基因的表达明显高于正常培养组(P<0.05)。结论:胃癌细胞系MGC803在无血清悬浮培养条件能形成细胞球,这类细胞具有肿瘤干细胞的特征,出现高增殖状态,高表达肿瘤干细胞调控基因,并能高表达促癌基因Trop2。

靶向抑制TROP2基因表达对胰腺癌细胞生物学特性的影响研究

目的探讨抑制胰腺癌组织中肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选取胰腺癌组织和相应的癌旁组织各46例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并分析胰腺癌组织和癌旁组织中TROP2基因的m RNA表达情况;将人胰腺癌PANC-1细胞分为对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组,培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测并分析TROP2、cleaved caspase 3、NOTCH1和HES1蛋白表达情况;采用CCK8法和流式细胞仪分别检测并分析细胞的增殖和凋亡情况。结果在胰腺癌组织中TROP2基因的m RNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组中,TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达比较,差异均有明显统计学意义(P﹤0.01);TROP2-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率及NOTCH1、HES1蛋白表达均明显低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),而NC-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论抑制胰腺癌组织中TROP2基因表达,可以明显降低肿瘤细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其机制与阻断NOTCH1信号通路有关。

Trop2基因与三阴性乳腺癌的研究进展

Trop2基因在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigen 2, Trop2)基因能调控周期蛋白D1(cyclin D1)及上皮钙黏素的表达,进而促进TNBC转移及侵袭。本文对Trop2基因的结构、功能、作用机制及在TNBC中的表达和治疗进行综述,以期找到TNBC的治疗靶点,探索新疗法。

TROP2基因mRNA在左半结肠癌和右半结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨TROP2基因在左半结肠和右半结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选择2001年6月至2005年4月间在北京大学临床肿瘤学院接受根治性手术切除的Ⅱ、Ⅲ期结肠癌患者80例，其中右半结肠癌（RSCC）和左半结肠癌（LSCC）各40例。应用实时定量RT-PCR的方法检测TROP2 mRNA在癌组织和正常组织中的表达，并分析其与患者临床病理变量的关系及其对预后的影响。结果TROP2基因mRNA在左、右半结肠癌组织中的表达均显著高于自身正常结肠黏膜（P〈0.01）；然而，TROP2在LSCC中的表达明显高于RSCC（P=0.009）。LSCC中的TROP2高表达病例明显多于RSCC（67.5％：32.5％，P=0.002）；高表达组患者的癌相关病死率是低表达组的4倍（40％：10％，P=0.002）。Kaplan-Meier法分层分析显示，LSCC患者TROP2高表达者的中位生存时间明显短于低表达者（45.9个月：63.1个月，P=0.032）；而RSCC患者TROP2表达对生存时间没有影响（P=0.235）。多因素分析发现，肿瘤浸润深度和脉管癌栓是RSCC的独立预后因子；肿瘤浸润深度、淋巴结转移和脉管癌栓是LSCC的独立预后因子，TROP2高表达具有临界显著性（RR：6.244；95％CI：0.755.51.636；P=0.089）。结论TROP2与不良预后变量密切相关。TROP2基因在LSCC中的表达明显高于RSCC；TROP2高表达是LSCC患者潜在的独立预后因子；LSCC和RSCC可能是存在显著分子差异的两个不同的疾病。

人滋养层细胞表面抗原2基因表达对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨抑制中人滋养层细胞表面抗原2（human trophoblast cell-surface antigen 2，Trop2）基因表达对舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma，TSCC）细胞增殖、凋亡的影响及机制，以期为预防和治疗TSCC提供依据。方法选取2014年2月至2016年5月于郑州大学第一附属医院口腔颌面外科行TSCC根治手术的患者46例，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TSCC组织及相应癌旁组织中Trop2 mRNA及蛋白表达。分别用阴性对照小干扰RNA（阴性对照小干扰RNA组）、Trop2小干扰RNA（Trop2小干扰RNA组）转染CAL-27细胞，另设空白对照组，转染48 h后行蛋白质印迹法检测Trop2、Ki-67增殖指数、细胞周期蛋白D1、裂解胱天蛋白酶3、Notch1蛋白和Hes1蛋白表达，细胞计数法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。结果TSCC中Trop2基因mRNA（5.72±1.13）及蛋白（0.77±0.06）表达均显著高于癌旁组织（分别为0.92±0.15、0.11±0.01）（P〈0.05）；转染Trop2小干扰RNA后CAL-27细胞中Trop2的蛋白表达（0.08±0.01）显著低于空白对照组（0.46±0.05），Trop2小干扰RNA组细胞存活率[（64.28±4.12）%]、S期细胞[（14.54±1.02）%]、Ki-67蛋白（0.12±0.01）、细胞周期蛋白D1（0.04±0.01）表达均显著低于空白对照组[分别为（100.00±1.02）%、（27.33±1.11）%、0.24±0.02及0.20±0.02]和阴性空白对照小干扰RNA组[分别为（96.55±2.43）%、（26.67±1.23）%、0.26±0.03及0.21±0.02]，细胞凋亡率（23.55±1.45）%、G0/G1期细胞[（72.32±0.94）%]及裂解胱天蛋白酶3（0.16±0.02）、Notch1蛋白（0.62±0.06）、Hes1蛋白（0.50±0.05）表达均显著高于空白对照组和阴性对照小干扰RNA组（P均〈0.05）。结论抑制TSCC细胞中Trop2基因表达可降低癌细胞增殖，阻滞细胞于G1期并促进细胞凋亡，与上调Notch1信号通路相关。