TRX-2基因表达在急性白血病微小残留病灶监测中的作用

目的:探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法:采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献者作为正常对照组,TRX-2基因表达量的上限(91)为参考值上限,回顾分析复发组在CHR期(骨髓原始细胞计数<5%)TRX-2基因表达的水平,比较其与流式细胞术(FCM)检测的MRD的相关性。结果:TRX-2基因表达在完全缓解组与初治组和复发组之间差异有统计学意义(P<0.01);复发患者CHR期(骨髓原始细胞<5%),21例(21/25)TRX-2基因呈高表达(>91),与流式细胞术检测的MRD具有相关性(r=0.874,P=0.0005)。结论:TRX-2基因为急性白血病新的广谱标志,适用于MRD的监测。

急性白血病患者WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因表达的检测及其与疾病分型、疗效的关系

目的:研究急性白血病患者肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、ETS相关基因(ERG)、硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达及其与疾病分型、疗效的关系。方法:将本院收治的90例白血病患者纳入研究的白血病组,将同期体检健康者纳入健康组;进一步根据分型将白血病患者分为ALL组和AML组,根据化疗后疗效将白血病患者分为完全缓解组和复发组。采集患者的外周血,检测WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量。结果:白血病组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AML组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.05);复发组的血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于完全缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因异常高表达与白细胞的发生有关,也与疾病的分型、化疗的效果密切相关。

乳腺癌组织中COX-2、TRX-1表达及其预后意义

目的:应用免疫组化法,检测COX-2、TRX-1在乳腺癌组织中表达,探讨COX-2、TRX-1表达与乳腺癌临床病理特征及预后因素的关系。方法:122例乳腺癌组织石蜡标本制作成乳腺癌组织芯片。免疫组化SP法检测COX-2、TRX-1表达。所有患者均接受规范性手术、术后辅助化疗及放疗,激素受体阳性病人接受5年的内分泌治疗。从手术日期到复发转移或随访截止日期(2008年7月)确定为患者无病生存期。共有45例复发转移病例。结果:122例乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,分别为58.2%、54.1%,且二者表达呈正相关(r=0.286,P=0.001);COX-2表达与临床分期(r=0.193,P=0.033)、肿块大小(r=0.192,P=0.034)及淋巴结转移(r=0.186,P=0.040)呈正相关,TRX-1表达与临床分期(r=0.206,P=0.023)、肿块大小(r=0.236,P=0.009)呈正相关,与淋巴结转移(r=0.175,P=0.054)不相关。COX-2或TRX-1表达与无病生存期呈负相关(P=0.027,P=0.046);COX-2和TRX-1共表达与无病生存期呈负相关(P=0.017)。结论:乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,两者与乳腺癌患者预后密切相关;COX-2、TRX-1表达呈正相关,推测乳腺癌组织中TRX-1可能参与COX-2调节。

SARS病毒S2基因的克隆、表达、纯化及其免疫学特性研究

目的 :在大肠杆菌中表达SARS病毒S2与硫氧还原蛋白 (Trx)的融合蛋白 ,并对其进行血清学鉴定。方法 :克隆编码SARS病毒S2蛋白的基因 ,并在原核表达系统中表达了 6×His S2硫氧还原融合蛋白。用Westernblot分析纯化Trx S2融合蛋白 ,分别与 6份SARS流行前的正常人血清和 6份SARS患者恢复期血清的反应性。结果 :Westernblot分析表明 ,6份SARS患者的恢复期血清均能识别Trx S2融合蛋白 ,且在Mr为 76× 10 3 附近出现特异性的结合带 ;而 6份SARS流行前的正常人血清则不与Trx S2融合蛋白起反应。结论 :本研究获得了纯化的SARS病毒Trx S2融合蛋白 ,它可与SARS患者的恢复期血清产生特异性结合反应 ,为研究SARS病毒感染宿主细胞的过程和制备针对SARS病毒的重组疫苗提供了条件。

FGF-2和TRX在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义

目的探讨成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和硫氧还蛋白(TRX)在非小细胞肺癌(NSCL)组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SP法分析76例非小细胞肺癌组织、15例非肺癌肺组织中FGF-2和TRX蛋白的表达水平。采用Western印迹、RT-PCR方法检测外源性FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中TRX蛋白及mRNA表达水平的影响。结果非小细胞肺癌组织中FGF-2和TRX阳性率分别为65.8%(50/76)和72.3%(55/76),显著高于非肺癌肺组织(P<0.01),FGF-2和TRX阳性表达与淋巴结转移、临床分期密切相关(P<0.01),与年龄、性别及病理分型无关(P>0.05)。两者表达在NSCLC中呈正相关(P<0.01)。FGF-2可以上调A549细胞中TRX蛋白和mRNA的表达。结论 FGF-2和TRX在非小细胞肺癌发生与发展中具有重要作用,FGF-2可能通过TRX促进肺癌的发生与发展。

硫氧还蛋白还原酶2在恶性肿瘤中的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是广泛分布于生物体内的抗氧化系统家族成员,主要作用是对酶和转录因子以及细胞水平的氧化还原状态的调节,参与细胞的生长、增殖和凋亡,同时也为恶性肿瘤的发生和进展创造了有利条件。TrxR共有三种同工酶,其中TrxR2主要分布于线粒体中,最近研究发现TrxR2在多种恶性肿瘤组织中表达上调,且表达情况远高于癌旁正常组织。另外,TrxR2的表达与多种恶性肿瘤患者的临床病理特征及其生存预后存在相关性。推测TrxR2可能参与恶性肿瘤的发生、发展和转移,本文将对TrxR2在几种恶性肿瘤中的研究进展进行综述,以探究TrxR2是否能成为恶性肿瘤的生物学标志物,并作为肿瘤治疗的新靶点。

川芎嗪对人骨关节炎软骨细胞的影响及作用机制研究

目的:探讨川芎嗪对人骨关节炎软骨细胞的影响及其作用机制。方法:收集接受膝关节置换术患者的膝关节软骨组织,分离并培养软骨细胞,采用肿瘤坏死因子-α诱导建立骨关节炎软骨细胞模型;将骨关节炎软骨细胞随机分为对照组和川芎嗪低、中、高浓度组,对照组加入正常培养基进行培养,川芎嗪低、中、高浓度组分别加入含川芎嗪浓度为25μg·mL^(-1)、50μg·mL^(-1)、100μg·mL^(-1)的培养基进行培养。培养24 h后,分别采用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法和MTT法测定软骨细胞的凋亡率和活力,分别采用实时定量PCR和蛋白印迹法分析软骨细胞凋亡相关基因硫氧还蛋白(thioredoxin, Trx)-2、凋亡信号调节激酶(apoptosis signal regulating kinase, ASK)-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspartic acid specific protease, Caspase)-3的mRNA和蛋白表达。结果:(1)软骨细胞培养结果。原代细胞培养至第15天,可见组织块周围有细胞成簇生长,细胞呈梭形、三角形或多角形;第3代软骨细胞多呈长梭形。(2)软骨细胞鉴定结果。甲苯胺蓝染色显示,细胞呈长梭形,有1~3个细胞核,细胞质呈蓝色;免疫组化染色显示,细胞Ⅱ型胶原蛋白呈阳性,细胞质内可见黄色颗粒,细胞核无着色,表明为软骨细胞。(3)软骨细胞凋亡率测定结果。4组软骨细胞凋亡率比较,差异有统计学意义[(25.10±0.47)%,(22.08±0.25)%,(19.37±0.36)%,(16.05±0.58)%,F=13.776,P=0.000]。川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞凋亡率均低于对照组(LSD-t=12.685,P=0.000;LSD-t=21.642,P=0.000;LSD-t=27.107,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞凋亡率均低于川芎嗪低浓度组(LSD-t=13.826,P=0.000;LSD-t=21.349,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞凋亡率低于川芎嗪中浓度组(LSD-t=10.875,P=0.000)。(4)软骨细胞活力测定结果。4组软骨细胞活力比较,差异有统计学意义(吸光度值:0.25±0.04,0.41±0.02,0.54±0.02,0.60±0.01,F=131.875,P=0.000),川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞活力均高于对照组(LSD-t=8.000,P=0.000;LSD-t=14.500,P=0.000;LSD-t=18.981,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞活力均高于川芎嗪低浓度组(LSD-t=10.277,P=0.000;LSD-t=19.000,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞活力高于川芎嗪中浓度组(LSD-t=6.000,P=0.000)。(5)软骨细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达分析结果。4组软骨细胞Trx-2、ASK-1及Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量比较,组间差异均有统计学意义。川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(mRNA:LSD-t=6.925,P=0.000;LSD-t=15.581,P=0.000;LSD-t=16.046,P=0.000;蛋白:LSD-t=2.479,P=0.000;LSD-t=23.000,P=0.000;LSD-t=33.988,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于川芎嗪低浓度组(mRNA:LSD-t=7.044,P=0.000;LSD-t=9.581,P=0.000;蛋白:LSD-t=6.149,P=0.000;LSD-t=15.321,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞Trx-2的mRNA和蛋白相对表达量均高于川芎嗪中浓度组(LSD-t=3.994,P=0.004;LSD-t=18.605,P=0.000);川芎嗪低、中、高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(mRNA:LSD-t=8.808,P=0.000;LSD-t=10.398,P=0.000;LSD-t=19.350,P=0.000;LSD-t=3.796,P=0.000;LSD-t=5.096,P=0.000;LSD-t=10.028,P=0.000;蛋白:LSD-t=5.041,P=0.001;LSD-t=13.466,P=0.000;LSD-t=21.719,P=0.000;LSD-t=2.481,P=0.038;LSD-t=7.286,P=0.001;LSD-t=16.865,P=0.000),川芎嗪中、高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于川芎嗪低浓度组(mRNA:LSD-t=3.385,P=0.000;LSD-t=20.466,P=0.000;LSD-t=3.400,P=0.000;LSD-t=9.701,P=0.000;蛋白:LSD-t=8.296,P=0.000;LSD-t=17.303,P=0.000;LSD-t=6.228,P=0.000;LSD-t=17.365,P=0.000),川芎嗪高浓度组软骨细胞ASK-1和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量均低于川芎嗪中浓度组(mRNA:LSD-t=9.550,P=0.005;LSD-t=3.619,P=0.007;蛋白:LSD-t=14.017,P=0.005;LSD-t=4.985,P=0.001)。结论:川芎嗪能够抑制人骨关节炎软骨细胞的凋亡,提高软骨细胞活力,且该作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性;其作用机制可能与调控Trx-2/ASK-1/Caspase-3信号通路有关。

右美托咪定通过抑制TXNIP保护大鼠急性心肌缺血损伤

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对急性心肌缺血大鼠的心肌保护作用及机制。方法60只SD大鼠随机分为5组:对照组(C)、模型组(M)、右美托咪定10、25、50μg·kg^(-1)组。结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型,M组和给药组分别在缺血前30 min腹腔注射生理盐水或相应剂量的DEX。缺血3 h末记录其血流动力学变化,检测心肌组织中TrxR、CSE活性、LPO、GSH含量和血清中H_(2)S含量,TTC染色计算心肌梗死面积,镜下观察心肌形态学改变,免疫组织化学和Western blot检测心肌中TXNIP、TRX、NOX-4、caspase-3蛋白表达。结果与C组相比,M组大鼠MAP、LVDP、±d p/d t_(max)等心功能指标降低;心肌梗死面积增加;镜下提示,心肌纤维排列紊乱,细胞间及核周高度水肿,线粒体膜肿胀,嵴减少甚至消失;CSE、TrxR活性减弱,H_(2)S、GSH含量降低,LPO含量及TXNIP、NOX-4、caspase-3等表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与M组相比,给药组心功能及心肌形态学损伤有所改善;心肌梗死面积减少,CSE、TrxR活性升高,H_(2)S、GSH含量增加,LPO含量及TXNIP、NOX-4、caspase-3等表达降低(P<0.05)。结论DEX通过提高内源性H_(2)S含量,抑制TXNIP表达的同时增强TrxR活性,减轻急性心肌缺血损伤,保护心功能,D25、D50组效果更佳。

少弱精子症患者精子候选差异蛋白Trx 2、TrxR 1的验证及在少精、弱精子症中的表达研究

目的:根据TMT技术筛选少弱精子症患者精子差异蛋白的结果,选取硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx 2)、硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR 1)进行验证,探讨二者在少精、弱精和少弱精子症中的表达变化及其意义。方法:收集105例少精子症组(O组)、150例弱精子症组(A组)、50例少弱精子症组(OA组)和106例正常精液男性(N组)精液,分离出精子,对少弱精子症进行串联质谱标签(Tandem Mass Tag,TMT)技术蛋白质组学分析,根据少弱精子症组的精子差异蛋白结果选取Trx 2、TrxR 1,通过免疫荧光和免疫印迹方法检测其在O组、A组、OA组的表达情况。结果:TMT技术蛋白质组学结果显示Trx 2为上调差异蛋白(为N组的1.31倍),TrxR 1为下调差异蛋白(为N组的0.82倍)。免疫荧光和免疫印迹结果显示O组、A组、OA组Trx 2表达显著高于N组(P<0.05),O组、OA组TrxR 1的表达显著低于N组(P<0.05)。二者在OA组的结果与蛋白质组学结果一致。结论:Trx 2、TrxR 1可能在少精、弱精及少弱精子症的发生中起着重要的作用,并有望成为少弱精子症患者精子的候选标志物及治疗靶点。

莱菔硫烷对急性一氧化碳中毒大鼠脑组织神经细胞线粒体损伤的治疗作用

目的 探讨急性一氧化碳（CO）中毒后脑组织神经细胞线粒体超微结构和功能的损伤机制,明确不同剂量莱菔硫烷（sulforaphane,SFP）对急性CO中毒大鼠海马神经元的保护作用.方法 150只成年健康SD大鼠按数字表法随机分为正常对照组（30只）、CO中毒组（30只）和SFP治疗组90只.用高压氧舱吸入法建立急性CO中毒动物模型,用透射电镜观察大鼠脑组织神经细胞线粒体超微结构,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位（MFI）变化,用免疫组化和定量RT-PCR法检测干预前后大鼠脑组织核转录因子红细胞相关因子-2 （Nrf-2）、硫氧还蛋白-1（Trx-1）及其mRNA的表达水平.结果 CO中毒可引起大鼠脑组织神经细胞线粒体超微结构受损,SFP能明显减轻CO中毒后神经细胞线粒体损伤程度.CO中毒后大鼠脑组织MFI值明显下降,SFP给药后3～7 d,神经细胞的MFI值虽有下降,但其水平明显高于同时间点CO中毒组（P＜0.05）.与正常对照组相比,CO中毒大鼠脑组织中Nrf-2和Trx-1蛋白及其mRNA的表达水平略有增加,差异有统计学意义（P ＜0.05）;SFP治疗后其表达水平明显增加,与同一时间点CO组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 CO中毒早期应用中等或高剂量的SFP能明显改善神经细胞线粒体结构和功能,增强细胞抗氧化应激能力,对急性CO中毒引起的脑损伤有积极的保护作用.

逆转肿瘤耐药性的策略及相关小分子药物的研究进展

多药耐药(multidrug resistance,MDR)是肿瘤化疗失败最常见而又最难解决的问题。研究MDR机制,开发具有克服MDR作用的新型化疗药物是抗肿瘤药物研究的一个热点领域。肿瘤细胞耐药是一个复杂的、动态的体系,可以发生在细胞膜或细胞质水平,也可发生在细胞解毒系统、DNA修复系统以及药物作用靶点的改变上。该文在总结逆转肿瘤耐药性策略的基础上,对MDR逆转剂、作用于细胞解毒系统以及作用于Bcl-2家族、DNMT和p53等新靶点的小分子药物的研究进展进行综述。

辅助生殖技术与DNA甲基化

辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)已经成为治疗不孕症的有效方法。但近年来一些研究指出,ART可能增加基因印记紊乱的发病风险,而DNA甲基化修饰则是其重要机制。ART干预了基因印记发生的主要阶段,即配子发育和胚胎植入前阶段,可能造成11p15、15q11-13等区域相关基因DNA甲基化异常,导致一些相关疾病的的发病风险增高。但其相关性仍待进一步探索,而我们也需要不断改进操作技术来提高ART的遗传安全性。