猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备

目的构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况;亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清;ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性。结果全基因扩增出393bp的TSOL18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41kDa,经亲和层析后可获得纯度为75%的重组蛋白;ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应。结论猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。

猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究

RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25 000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90 d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15 d血清抗体即为阳性,30 d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88%以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。

猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达TSOL18目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。

猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制

目的以猪带绦虫六钩蚴重组蛋白(TSOL18)为抗原,建立一种简便快速的猪囊虫抗体检测方法,评价其血清学诊断的价值。方法用胶体金颗粒标记纯化的TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-GST-IgG和TSOL18重组抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,与PVC垫板等部件按顺序装配成猪囊虫抗体快速检测试纸条;用该试纸条检测猪血清样品测定敏感性和特异性。结果该试纸条与全囊虫抗原ELISA的相对敏感性和特异性分别为75.0%(12/16)和95.2%(40/42),与剖检计数法的相对敏感性达80.0%(12/15)。试纸条在4℃存放12个月,检测结果稳定,重复性好。结论基于TSOL18建立的胶体金免疫层析试纸条操作简单、快速敏感、稳定性好,可用于猪囊虫病感染的诊断和筛查。

表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建

【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后ELISA检测产生抗体。【结论】成功构建了能稳定表达TSOL18蛋白的可口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(pYA3341-TSOL18)。

猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum的构建及鉴定

通过全基因合成猪带绦虫TSOL18基因,将该基因定向克隆至大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSOL18,电穿孔法将该质粒导入长双歧杆菌(Bifidobacterium longum),构建猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum,并通过酶切、PCR和测序鉴定。全基因合成了393 bp的TSOL18基因片段。酶切、PCR和测序鉴定结果证明猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum构建成功。

Tsol18基因密码子优化对其表达及重组蛋白免疫效果的影响

定点突变猪带绦虫六钩蚴(oncosphere)Tsol18基因的4个碱基,并截去其N端16氨基酸信号肽的编码序列,构建pGEX-Tsol18-sp表达载体,IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE、Western blot及稳定性分析;取该基因修饰前、后所表达的重组蛋白免疫猪,以ELISA检测抗体水平,并通过屠宰检虫评价、比较免疫效果。结果显示:修饰后的Tsol18-sp基因共有7个碱基发生同义突变,表达产物主要是约38.7 ku的可溶性融合蛋白,在4℃保存2个月后约降解20.1%,能与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应;TSOL18和TSOL18-sp抗原免疫试验猪后均能诱导高水平抗体的产生,但TSOL18-sp抗原的保护率较TSOL18抗原有明显的提高(100%vs 20%)。表明Tsol18经修饰后,其重组表达产物的生物学活性和稳定性都有很大改善,可作为囊虫病免疫预防的候选抗原。

猪带绦虫六钩蚴重组蛋白TSOL18与BSA偶连蛋白的制备

应用异型双功能连接剂MBS(间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯)将猪带绦虫六钩蚴18ku重组蛋白(TSOL18)和载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)进行连接,制备连接蛋白BSA-TSOL18,用以增强TSOL18的免疫原性.连接蛋白利用快速脱盐柱分离技术进行纯化;纯化后应用醋酸纤维薄膜电泳证明二者的结合情况;并用间接ELISA法检测不同摩尔比连接产物中抗原部分的活性.结果表明:TSOL18与BSA偶连摩尔比为1∶3时连接有效,且对抗原活性影响小,可满足进一步免疫的要求.

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。

猪带绦虫六钩蚴TSOL18真核表达载体pVTSOL18m的构建

根据Kozak原理设计引物,以重组原核表达载体pGEX-TSOL18为模板扩增TSOL18基因,用EcoRI、XhoI酶切后与经相同处理的pVAX1载体连接并转化JM109感受态细胞,经测序证明读码框正确后,再根据PCR点突变的方法设计引物,将目的基因NruⅠ位点中的碱基(第347位)经三次PCR反应突变,最终获得含突变位点的TSOL18m基因,EcoRⅠ、XhoⅠ再次酶切后与pVAX1载体连接,成功构建了含点突变的重组pVAX1表达载体,为TSOL18基因重组犬2型腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗诱导仔猪免疫应答的动态观察

目的研究猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪后诱导免疫应答的动态变化。方法将16头40d龄健康仔猪均分为4组：重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组、重组Bb-TSO45W-4B疫苗组、重组Bb-TSOL18疫苗组和双歧杆菌液体培养基（MRS）对照组。各疫苗组均以1011 CFU灌胃免疫,间隔2周免疫1次,共免疫2次。在免疫后0、2、4、6、8周采集仔猪前腔静脉血,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）。采用ELISA法检测仔猪血清IgG、IgG1及IgG2a水平和PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10水平;MTT比色法检测PBMC增殖水平;FCM检测CD4＋和CD8＋T细胞亚群。结果各疫苗组血清IgG、IgG1、IgG2a水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后4周、6周、4周达较高水平;PBMC增殖水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后6周达较高水平;CD4＋和CD8＋T细胞水平均在免疫后2～8周升高,均在免疫后8周和6周达较高水平;PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平分别在免疫后2～6周、2～8周、4～6周和2～8周升高,分别在免疫后4周、6周、4周和8周达较高水平。各疫苗组上述指标与MRS对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗组与重组Bb-TSO45W-4B疫苗组和重组Bb-TSOL18疫苗组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论猪带绦虫重组Bb-TSO45W-4B-TSOL18疫苗免疫仔猪可诱导产生特异性的免疫应答,且TSO45W-4BTSOL18融合抗原疫苗组优于TSO45W-4B或TSOL18单一抗原疫苗组。

猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达

目的构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况。方法通过酶切的方法从重组质粒pGEX-TSOL18获取猪带绦虫TSOL18基因,将其定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV261中,构建猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18,进行酶切、PCR和测序鉴定;再将其电穿孔转化入BCG,构建猪带绦虫重组BCGTSOL18疫苗,进行PCR鉴定;SDS-PAGE和Western blot分析TSOL18基因在BCG中的表达情况。结果通过酶切成功获得了393bp的TSOL18基因片段;酶切、PCR和测序鉴定证明成功构建了猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18;PCR鉴定证实猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18成功转入BCG中,提示猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建成功;SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约为14.7kD处有明显的TSOL18目的蛋白条带,Western blot证实表达的TSOL18目的蛋白能被兔抗血清和囊虫病猪血清所识别。结论成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,TSOL18基因能够在BCG中成功表达,表达的TSOL18重组蛋白具有特异的抗原性,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。

猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSOL18基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,目的蛋白相对分子质量(Mr)约为41KD,与预期结果相一致。Western blot显示,目的蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSOL18基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的目的蛋白具有抗原性。

猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。

猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备

对TSOL18基因中4个碱基进行定点突变，并截去N端16个氨基酸的信号肽，构建pGEX—TSOL18-SP原核表达载体，IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE及Western blot分析；用改造的纯化蛋白免疫家兔后采集血清，经琼脂双扩散试验检测血清抗体效价．结果表明：TSOL18基因改造后长度为345 bp，共有7个碱基发生突变，但氨基酸序列没有改变，与GenBank收录的TSOL18基因核苷酸序列相似性为97％，氨基酸序列相似性为100％．SDS-PAGE及Western blot分析表明：改造的重组菌诱导后可高效表达可溶性目的蛋白，且TSOL18-SP分子量约为38．7kD，与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应性强；琼脂双扩散法测定免疫兔血清抗体效价为1：32～64，说明表达的TSOL18-SP蛋白具有较好的免疫原性．

猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌诱导家猪免疫应答

目的 观察猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌口服灌胃和肌肉注射家猪后诱导的免疫应答.方法 12头40日龄健康家猪随机均分为3组,每组4头.口服灌胃组每猪灌胃1011 CFU重组双歧杆菌[溶于50 mL双歧杆菌液体培养基（MRS）],肌肉注射组每猪于猪后腿肌肉注射1011CFU重组双歧杆菌（溶于10 mL MRS）,对照组每猪灌胃50 mL MRS.每次间隔2周,共免疫2次.于免疫后0、2、4、6和8周进行前腔静脉采血,采用ELISA法检测猪血清免疫球蛋白G（IgG）水平;制备猪外周血淋巴细胞（PBMC）,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测猪PBMC增殖水平;收集粪便,测定分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平.结果 与免疫前和MRS对照组相比,口服灌胃组和肌肉注射组猪血清IgG水平、PBMC增殖水平均在免疫后2～8周升高,6周达较高水平;粪便sIgA水平在免疫后2～8周升高,4周达较高水平,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.口服灌胃组的IgG、sIgA水平和PBMC增殖水平显著高于肌肉注射组（P＜0.05）.结论 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌可诱导家猪产生有效的免疫应答,其免疫效果口服灌胃优于肌肉注射.

猪带绦TSOL18重组蛋白抗原在小鼠体内的分布及毒性

试验采用肌肉注射途径给18g左右的小鼠接种TSOL18重组蛋白抗原,利用免疫组织化学方法、ELISA方法、检测TSOL18表达蛋白在小鼠体内的分布及其抗体产生,并进行毒性分析研究。结果表明,3d后,心、肝、脾、肺、肾免疫组化均阳性;15d后除肾脏组织免疫组化检测TSOL18蛋白抗原疑为阳性外,所有内脏器官免疫组化检测TSOL18蛋白抗原均为阴性,而对照组在整个试验期间检测结果均为阴性。10d后用间接ELISA即可检测到抗体,28d抗体水平达到相对较高水平,说明重组TSOL18重组蛋白作为抗原具有良好的免疫原性。毒性试验表明重组TSOL18表达蛋白作为免疫抗原使用安全。

猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress（DE3）中的表达、纯化和兔抗血清的制备

目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒，纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头（Gly,Ser），连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上，构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18，再用重组质粒转化大肠埃希菌（E．col）ArcticExpress（DE3）。用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达情况，亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0．5mg／只与弗氏完全佐剂（CFA）混合，于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射；2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂（IFA）混合加强免疫，此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫，第4次免疫后6d，采集兔心脏血并分离血清，立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清的效价，采用蛋白印迹（Western blot）法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建，测序结果获得的基因片段大小为789bp，与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示，重组质粒在转化E．col ArcticExpress（DE3）后，获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白，纯度为85％。EUSA测定兔抗血清的效价为1：512000，Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应，在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。

猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察

目的观察猪带绦虫重组（r）BCG-TSOL18疫苗免疫小鼠后，诱导产生体液和细胞免疫应答的变化。方法按体质量采用随机数字表法将80只昆明小鼠分为4组：rBCG．TSOL18腹腔注射组f用5X10。克隆形成单位（CFU）猪带绦虫rBCG-TSOL18疫苗腹腔注射免疫小鼠]、rBCC-TSOL18口服灌胃组（用4×10^8CFU猪带绦虫rBCC-TSOL18疫苗口服灌胃免疫小鼠）；卡介苗（BCG）对照组[用5×10^6CFU的BCG腹腔注射免疫小鼠]；磷酸缓冲液（PBS）对照组（PBS腹腔注射小鼠），每组20只。在免疫后0、2、4、6、8周采集小鼠（n=4）眼静脉血．分离血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清特异性I如和IgG2a水平；无菌取脾，制备脾淋巴细胞悬液，收集脾淋巴细胞培养上清液，采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平；ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液白细胞介素（IL）．2和IL-4水平。结果rBCG-TSOL18腹腔注射组和rBCG—TSOL18口服灌胃组小鼠血清特异性IgG水平在免疫后2—8周升高，6周时两组达较高水平（0．310±0．022、0．356±0．026），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．054±0．005、0．057±0．006、0．093±0．014、0．085±0．010）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；IgG2a水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．965±0．031、1．144±0．049），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．102±0．014、0．093±0．012、0．115±0．012、0．103±0．013）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．524±0．032、0．755±0．016），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．301±0．018、0．305±0．020、0．362±0．033、0．334±0．027）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；脾淋巴细胞上清液中IL-2和IL-4水平分别在免疫后2～8周和4，6周升高，分别在6周和4周时两组达较高水平[（1665．41±33．93）、（1785．11±42．39），（281．62±23．79）、（357．95±42．57）ng／L]，与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组[（1411．63±20．54）、（1405．12±21．42）、（1455．20±25．03）、（1434．47±17．47），（190．17±11．01）、（196．96±14．00）、（200．51±30，79）、（189．64±40．90）ng／L]比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）。且rBCG—TSOL18口服灌胃组与rBCG-TSOL18腹腔注射组小鼠上述指标比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论猪带绦虫rBCG—TSOL18疫苗免疫小鼠可诱导产生体液和细胞免疫应答，且口服灌胃组优于腹腔注射组。

猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗的构建及鉴定

目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌(Bb)(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗。方法用疏水甘氨酸接头连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成方法合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因。将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18。电穿孔法将该质粒导入Bb,构建猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果全基因合成789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段。从具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切得到4 944bp的pGEX-1λT载体片段和789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,与预期结果相符;以该重组质粒为模板进行PCR扩增得到789bp的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段,经测序基因片段为789bp,与预期大小相符。结论成功构建了猪带绦虫重组Bb(pGEX-TSO45W-4B-TSOL18)疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础。