腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠载体的构建及体外表达

目的扩增及克隆C57BL/6j小鼠titf-2基因并利用小鼠骨髓间充质细胞进行表达.方法从C57BL/6j小鼠肝脏组织中提取基因组DNA,用PCR从中扩增出titf-2基因片段.将titf-2基因片段插入载体pMD18-T中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pBROAD3-mcs中,构建重组表达载体pBROAD3-mcs-titf-2,并转染小鼠骨髓间充质细胞进行表达.用羊抗鼠TTF-2多抗IgG对表达产物进行Western Blot签定.结果 DNA测序结果证实,获得titf-2基因片段,大小与理论值相符;Western Blot分析表明,表达出TTF-2约为4.2KDa大小的蛋白.结论成功扩增、克隆titf-2基因,并在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,为下一步建立titf-2转基因小鼠模型奠定了基础.

TTF-2在甲状腺转录因子-2转基因小鼠腭突发育过程中的表达

目的探讨甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2 m RNA及蛋白表达的规律.方法于妊娠12 d、13 d、14 d、15 d分别断颈处死各3只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突.应用RT-PCR技术和Western印记方法检测TTF-2在腭突中的表达.结果在甲状腺转录因子-2转基因小鼠胚胎的腭突形成、上抬和融合的发育过程中均有TTF-2的表达,但m RNA及蛋白表达水平变化无统计学意义(P>0.05),RT-PCR检测和Western印记结果一致.结论甲状腺转录因子-2转基因小鼠继发腭发育过程中,TTF-2在腭突中的持续高表达,这可能是甲状腺转录因子-2转基因小鼠出现腭裂的原因之一.

腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠模型的制备过程

目的建立表达TTF-2的转基因小鼠。方法利用显微注射技术把线性化表达载体p BROAD3-TTF-2注射到小鼠受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。采用PCR、Southern印迹的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果得到胎鼠68只和2只腭裂新生鼠,切鼠尾提取基因组DNA经PCR和Southern印迹方法检测发现13只转基因阳性胎鼠,包括2只腭裂新生鼠。腭裂小鼠出生后24小时死亡。结论获得了TTF-2转基因小鼠,表现型为腭裂,为腭裂发生机制的研究提供一种良好的动物模型。

TTF-2和TGFβ3在C57BL/6J小鼠腭突发育过程中的表达变化

目的探讨C57BL/6J小鼠继发腭发育过程中,甲状腺转录因子-2(TTF-2)和重组人转化生长因子β3(TGFβ3)的表达及其相互作用规律。方法于妊娠12、13、14d分别断颈处死各6只孕鼠,无菌条件取出胚胎,解离腭突。应用免疫组织化学染色和Western印记方法检测TTF-2和TGFβ3在腭突中嵴上皮细胞的表达。结果在G57BL/6J小鼠胚胎的腭突形成、上抬和融合的发育过程中均有TTF-2的表达,以13d为最高,免疫组织化学和Western印记结果一致。TGFβ3在腭突形成时,腭突中嵴上皮细胞未检测到其表达。腭突上抬时,首次在腭中山嵴上皮细胞中发现TGFβ3表达,两侧腭突融合时,TGFβ3在腭中嵴上皮中的表达最明显,当腭突融合完成后,TGFβ3在腭中嵴上皮中表达减少。结论 TTF-2和TGFβ3两种细胞因子均在腭突中嵴上皮细胞中表达,表明与其分化转归相关。

阉割对猪甲状腺转录因子-1、2(TTF-1,2)基因表达的影响

为了研究阉割对甲状腺转录因子-1、2(TTF-1,2)基因的影响,本研究采用荧光定量PCR技术分析阉割与非阉割金华猪甲状腺组织中TTF-1和TTF-2基因在60、90和120日龄时的表达水平。结果表明:非阉割猪TTF-1和TTF-2基因在不同生长阶段的表达量呈稳步上升趋势,阉割猪TTF-1和TTF-2基因的表达基本稳定。TTF-1与TTF-2mRNA的表达量均是在60、90日龄时阉割组高于非阉割组;在120日龄时,阉割组TTF-1与TTF-2mRNA的表达量均低于非阉割组,但差异不显著(P>0.05)。结果,建立的SYBR-Green荧光定量PCR方法可以有效地用于TTF-1和TTF-2基因的表达分析;另外,阉割使得猪甲状腺TTF-1和TTF-2基因在60、90日龄的表达量升高,且TTF-1基因的表达与猪部分肉质性状存在显著的相关性。

COX-2、TTF-1及p63蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究环氧化酶-2(COX-2)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)及p63蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并探讨其与NSCLC病理类型、临床TNM分期及淋巴结转移之间的关系。方法:采用免疫组化法检测156例NSCLC患者术后病理组织中COX-2、TTF-1、p63蛋白的表达水平。结果:COX-2、TTF-1及p63蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率分别为94.5%(137/145)、61.0%(72/118)、53.5%(54/101)。在肺腺癌和鳞癌中,COX-2阳性表达率无显著性差异(P>0.05),而TTF-1和p63蛋白阳性表达率具有显著统计学意义(P<0.001)。COX-2和p63蛋白阳性表达率与NSCLC患者TNM临床分期、淋巴结转移均无统计学差异(P>0.05)。在Ⅲ-Ⅳ期或有淋巴结转移的NSCLC病人中,TTF-1阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期或无淋巴结转移的病人(P<0.01)。结论:在NSCLC病人中,TTF-1和p63蛋白的表达可能分别是腺癌和鳞癌的有效生物标志物,TTF-1的阳性表达可能与肺癌的浸润、侵袭和转移相关。

TTF-1、hMSH-2在先天性肺气道畸形中的表达及意义

目的探讨甲状腺转录因子-1(TTF-1)和错配修复基因2(h MSH-2)在儿童先天性肺气道畸形(CPAM)中的表达及意义。方法采用免疫组化Eli Vision法检测TTF-1和h MSH-2蛋白在52例先天性肺气道畸形手术存档蜡块标本和9例正常肺组织中的表达。结果在正常儿童肺组织中TTF-1主要在远端细支气管的非纤毛柱状上皮及肺泡Ⅱ型上皮的细胞核内表达。在病例组中,TTF-1主要表达在囊壁的柱状上皮、立方上皮细胞的细胞核内。在CPAMⅠ型、Ⅱ型、Ⅲ型中TTF-1阳性率分别为2%、40%、80%。统计学分析结果表明三者之间表达有明显差异(P<0.01)。h MSH-2蛋白阳性产物在儿童正常肺组织定位于支气管及肺泡上皮细胞的细胞核内,在CPAM中,h MSH-2蛋白染色主要位于囊壁上皮的细胞核内,其阳性率明显低于正常肺组织(P<0.05)。在CPAMⅠ、Ⅱ型的表达无明显差异(P>0.05),但在CPAMⅠ、Ⅱ型中的表达明显强于CPAMⅢ型(P<0.05)。结论 TTF-1在CPAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ型中的表达有差异,可以作为CPAM组织分型的一个重要标记。h MSH-2蛋白在病例组CPAMⅠ、Ⅱ、Ⅲ型中表达量均低于正常儿童肺组织,提示在CPAM中有h MSH-2基因转录水平的下降,参与CPAM的形成。

EMP2、TTF-1在子宫内膜增生症和子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨上皮膜蛋白2(EMP2)与甲状腺转录因子1(TTF-1)在子宫内膜增生症和子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义。方法选取1990年1月至2014年10月间在中山市人民医院妇科就诊、起初病理诊断为子宫内膜增生症(包括单纯型、复杂型、不典型增生),经过10年随访发展和没有发展为子宫内膜癌的患者标本107例,其中正常子宫内膜标本28例,子宫内膜增生症癌变标本51例,子宫内膜癌标本28例,应用免疫组化S-P法检测各组标本中EMP2、TTF-1表达情况。结果在正常增生期子宫内膜、子宫内膜增生症、子宫内膜样腺癌组织中EMP2蛋白的阳性表达率分别为10.7%、33.3%、82.1%,依次递增,TTF-1的阳性表达率分别67.9%、45.1%、35.7%,依次递减,差异均有统计学意义(P<0.05);EMP2阳性者的比例随手术病理分期、组织病理分级的升高而增加,差异有统计学意义(P<0.05),而TTF-1阳性者的比例随手术病理分期、组织病理分级的升高而逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EMP2、TTF-1可能参与子宫内膜增生发展至子宫内膜癌的过程,对子宫内膜癌的早期诊断及预测预后有一定的价值。

甲状腺转录因子-2持续表达的转基因小鼠模型建立

甲状腺转录因子-2(TTF-2)在个体发生中的表达具有高度组织特异性和发育阶段特异性,是甲状腺、腭等器官正常发育的重要调节因子。为研究TTF-2基因活动规律和表达模式发生变化,对胚胎发育过程中器官发生产生的影响,为揭示新生儿出生缺陷形成的分子机制积累资料,构建了TTF-2基因重组表达载体pBROAD3-titf-2,通过显微注射法将目的基因注入小鼠受精卵的雄原核,成功建立了TTF-2持续表达的转基因小鼠模型。

4,5-亚乙二硫基-1,3-二硫杂环戊烯-2-酮衍生物的合成

以二（１，３－二硫杂环戊烯－２－硫酮－４，５－二硫）合锌酸四乙基铵盐（Ｉ）为原料，合成四种未见文献报道的４，５－亚乙二硫基－１，３－二硫杂环戊烯－２－硫酮及酮ＩＶａ，ＩＶｂ，Ｖａ，Ｖｂ，其中由路线Ａ和Ｂ分别制得了Ｖａ；对ＩＶｃ和由路线Ａ制备Ｖｂ失败的原因进行了讨论。

子宫内膜癌C-erbB-2和TTF-1的表达及其与预后的关系

目的:探讨子宫内膜癌组织中C-erbB-2和TTF-1的表达及其与患者临床预后的关系。方法:应用免疫组化S-P法检测正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜癌组织中C-erbB-2与TTF-1的表达,并分析二者与子宫内膜癌临床病理特征及患者临床预后的关系。结果:子宫内膜癌组织、子宫内膜不典型增生组织、正常子宫内膜组织中C-erbB-2的阳性表达率分别为56.65%、36.67%、16.67%(P<0.05),TTF-1的的阳性表达率分别为33.75%、53.33%、70.00%(P<0.05)。C-erbB-2的阳性表达与子宫内膜癌的临床病理分期、组织分化、肌层浸润及有无淋巴结转移呈显著正相关(P<0.05),与其病理类型无显著相关性(P>0.05)。TTF-1的阳性表达与子宫内膜癌的病理分期、组织分化、肌层浸润深度负相关(P<0.05),但与有无淋巴结转移及病理类型均无显著相关性(P>0.05)。C-erbB-2和TTF-1在子宫内膜癌组织中表达无明显相关性(P=0.303)。子宫内膜癌中C-erbB-2阳性表达者五年生存率(80.90%)显著低于C-erbB-2阴性表达者(93.80%)(P<0.05),TTF-1阳性表达者五年生存率(87.70%)略高于TTF-1阴性表达者(85.70%),但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫内膜癌组织中C-erbB-2的表达显著上调,而TTF-1的表达明显下调,二者表达异常均参与了子宫内膜癌的发生和发展,且C-erbB-2的表达上调与子宫内膜癌患者的不良预后相关。