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铜绿假单胞菌临床菌株TTSS表达水平及相关因素分析 被引量:7
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作者 吴国营 杨洪江 +4 位作者 巴兆粉 李群 吴海鹏 林书祥 王维 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期158-163,共6页
Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)是铜绿假单胞菌的重要致病因子.分析临床菌株中TTSS的表达水平,对于研究铜绿假单胞菌的致病机制具有重要意义.本研究通过测定融合报告基因exsA-lacZ和exoT-lacZ编码的β-半乳糖苷酶活力,分析... Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)是铜绿假单胞菌的重要致病因子.分析临床菌株中TTSS的表达水平,对于研究铜绿假单胞菌的致病机制具有重要意义.本研究通过测定融合报告基因exsA-lacZ和exoT-lacZ编码的β-半乳糖苷酶活力,分析了150株铜绿假单胞菌临床菌株exsA和exoT基因的表达水平,发现71株(47.33%)细菌exsA基因的表达为阳性6,5株(43.33%)细菌exoT基因的表达为阳性,基因exsA与exoT表达水平存在正相关(P<0.001),且不同菌株间两者表达水平差异较大.采用统计学方法对实验结果进一步分析发现,TTSS表达与呼吸道感染等临床症状相关(P<0.05);与标本的分离时间相关(P=0.029);与菌株亚胺青霉烯耐药性存在负相关(P<0.05).本研究结果显示,铜绿假单胞菌临床菌株TTSS表达水平差异较大,与多种因素存在相关性. 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 Ⅲ型分泌系统(ttss) Β-半乳糖苷酶 相关性 耐药性
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丁香假单胞菌的分子生物学研究进展 被引量:18
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作者 王丹丹 王清明 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期487-496,共10页
丁香假单胞菌是好氧、腐生性强的革兰氏阴性菌,所引起的植物病害发生率位居十大细菌性植物病害之首,尤其引发的疫病在各农业大国爆发并有在世界范围扩散的趋势,给各国农业生产造成巨大的经济损失。基于国内外学者最新的分子生物学研究报... 丁香假单胞菌是好氧、腐生性强的革兰氏阴性菌,所引起的植物病害发生率位居十大细菌性植物病害之首,尤其引发的疫病在各农业大国爆发并有在世界范围扩散的趋势,给各国农业生产造成巨大的经济损失。基于国内外学者最新的分子生物学研究报道,对丁香假单胞菌的致病变种、病原菌鉴定、植物检疫、早期快速检测技术、致病机制及生物防治等方面进行综述,并探讨现阶段该病害研究存在的问题以及未来的研究方向与防治方案。 展开更多
关键词 丁香假单胞菌 检测 ttss系统 HRP基因 生物防治
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致病菌Ⅲ型分泌系统特有效应蛋白的预测及其特有模体分析 被引量:1
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作者 刘颖 王涛 +3 位作者 王尚 王静 高志贤 牛超 《解放军预防医学杂志》 CAS 2016年第2期152-154,158,共4页
目的对病原菌Ⅲ型分泌系统(TTSS)效应蛋白在非致病菌中进行直系同源基因预测,以获得病原菌Ⅲ型分泌系统特有效应蛋白,并进一步对特有效应蛋白模体构成进行分析,旨在更深入地认识TTSS效应蛋白,为理论研究和生物学实验提供参考。方法利用... 目的对病原菌Ⅲ型分泌系统(TTSS)效应蛋白在非致病菌中进行直系同源基因预测,以获得病原菌Ⅲ型分泌系统特有效应蛋白,并进一步对特有效应蛋白模体构成进行分析,旨在更深入地认识TTSS效应蛋白,为理论研究和生物学实验提供参考。方法利用彼此最佳blast方法对效应蛋白在构建的非致病性细菌蛋白质数据库中进行直系同源基因预测,并利用Inter Pro Scan对预测获得的特有效应蛋白序列进行模体搜索分析。结果在49个收集整理的致病菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白序列中,有18个效应蛋白在非致病菌中存在直系同源基因,31个效应蛋白(即TTSS特有效应蛋白)在非致病菌中没有直系同源基因;对31个Ⅲ型分泌系统特有效应蛋白序列进行模体分析,获得了12个效应蛋白特有模体。结论 31个致病菌Ⅲ型分泌系统特有效应蛋白序列的获得,为更精确地在致病性细菌基因组内预测获得新的效应蛋白序列奠定了基础;12个效应蛋白特有模体的获得及其基因本体注释分析进一步理解了效应蛋白的作用机制。 展开更多
关键词 Ⅲ型分泌系统(ttss) 效应蛋白 模体
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类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统蛋白BsaL的制备和免疫反应性分析
4
作者 方瑶 胡艺 +4 位作者 朱攀 任春艳 马腾飞 王昆 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期585-588,共4页
目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析... 目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析、凝胶过滤层析等纯化方法得到高纯度的Bsa L蛋白。包被Bsa L蛋白于96孔板,分析其用于检测临床类鼻疽菌株的敏感性和特异性。结果成功构建了表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,诱导、表达及纯化后得到高纯度(>99%)、高浓度(20 mg/m L)的重组Bsa L蛋白。该蛋白在类鼻疽菌检测方面表现出较好的灵敏度(85%)和特异性(89%)。结论成功表达了重组的Bsa L蛋白,获得了高纯度的Bsa L蛋白样品,在类鼻疽菌的诊断方面展示出较好的应用价值。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 Ⅲ型分泌系统(ttss) BsaL ELISA
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基于Internet的网络化三容水箱实验平台 被引量:4
5
作者 何潇 王子栋 +2 位作者 刘洋 吉吟东 周东华 《南京航空航天大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第B07期190-193,共4页
基于网络的故障诊断与容错控制算法的现有研究大多止于数值仿真,而简单的数值算例无法准确反应实际的工业过程,需要利用真实的物理实验平台对各种算法进行评估。本文构建了基于Internet的网络化三容水箱系统,为网络化故障诊断与容错控... 基于网络的故障诊断与容错控制算法的现有研究大多止于数值仿真,而简单的数值算例无法准确反应实际的工业过程,需要利用真实的物理实验平台对各种算法进行评估。本文构建了基于Internet的网络化三容水箱系统,为网络化故障诊断与容错控制算法提供了一个基准的实验平台。该系统有较为精确的数学模型,可以方便地设置多种故障。整个系统立足于真实的物理系统、真实的网络传输特性以及真实的故障种类,可作为基准平台对网络化故障诊断与容错控制算法的效果进行评估。 展开更多
关键词 三容水箱系统 故障诊断 容错控制 网络化系统
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放射受体分析法测定东莨菪碱膜控制剂的血药浓度 被引量:2
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作者 沈子龙 李汉蕴 +3 位作者 平其能 张梅 方晓林 侯羽飞 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期25-27,共3页
家兔背部皮肤贴用东莨菪碱膜控制剂(transdermal therapeutic system of seopola-mine,TTSS),不同时间从耳缘静脉采血,立即用Sep-PAK C_(18)柱分离提取,~3H-QNB作放射配基。进行放射受体分析(RRA)。结果,我校研制的TTSS给药后72h内血药... 家兔背部皮肤贴用东莨菪碱膜控制剂(transdermal therapeutic system of seopola-mine,TTSS),不同时间从耳缘静脉采血,立即用Sep-PAK C_(18)柱分离提取,~3H-QNB作放射配基。进行放射受体分析(RRA)。结果,我校研制的TTSS给药后72h内血药浓度基本稳定在0.85~1.96ng/ml,与美国CIBA公司的TTSS类似。 展开更多
关键词 放射受体分析 血药 浓度 东莨菪碱
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梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统的鉴别及Erwinia spp. HrpA的分析
7
作者 朱勃 金谷雷 +1 位作者 怀雁 谢关林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期505-510,共6页
【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法... 【目的】明确梨火疫病病原菌(Erwinia amylovora)三型分泌系统(type Ⅲ secretion system,TTSS)的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA(hypersensitive response and pathogenicity gene A)选择压水平。【方法】利用生物信息学方法,通过BLAST程序对梨火疫病菌基因组的核苷酸数据库进行同源比对,同时对Erwinia spp.与宿主互作的表面蛋白HrpA进行选择压分析。【结果】TTSS分析结果显示在40kb大小的毒力岛上有27个TTSS相关基因。通过与看家基因及毒力岛上的致病性相关的重要基因HrpN的比较、选择压分析、多序列比较,发现HrpA基因处于较强的选择压作用下,且HrpA蛋白N端主要受正向选择,C端主要受净化选择。NJ法构建的HrpA系统发育树显示Erwinia spp.形成两个明显的分支,表明HrpA基因可能在种间分化后产生了不同的选择压变化。【结论】梨火疫病病原菌基因组3.14-3.18Mb为其TTSS分布区域。该病原菌通过TTSS侵染寄主植物,在其病原菌表面有一种类鞭毛结构的TTSS蛋白HrpA,HrpA作为传输者起着将效应分子输送到宿主内部的功能,在进化上受到了较强的选择压影响。 展开更多
关键词 梨火疫病 三型分泌系统 HrpA 正向选择 净化选择
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Clinical and environmental isolates of Burkholderia pseudomallei from Brazil: Genotyping and detection of virulence gene
8
作者 Tereza de Jesus Pinheiro Gomes Bandeira Debora de Souza Collares Maia Castelo-Branco +5 位作者 Marcos Fabio Gadelha Rocha Rossana de Aguiar Cordeiro Crister Jose Ocadaque Manoel de Araújo Neto Paiva Raimunda Samia Nogueira Brilhante Jose Júlio Costa Sidrim 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2017年第10期945-951,共7页
Objective: To evaluate the genetic diversity of clinical and environmental isolates of Burkholderia pseudomallei(B.pseudomallei) recovered in Ceara, Brazil, and screen these isolates for the presence of type three sec... Objective: To evaluate the genetic diversity of clinical and environmental isolates of Burkholderia pseudomallei(B.pseudomallei) recovered in Ceara, Brazil, and screen these isolates for the presence of type three secretion system virulence gene.Methods: Nineteen B.pseudomallei isolates(9 from clinical cases and 10 from soils)were analyzed.Random amplified polymorphic DNA was performed with primers OPQ-2, OPQ-4 and OPQ-16 to evaluate the genetic diversity, and type three secretion system gene was detected through polymerase chain reaction.Results: Random amplified polymorphic DNA showed a genetic relatedness of approximately 50% among the tested B.pseudomallei isolates, which were grouped into two clades, of which the biggest ones comprised 18/19 isolates for primer OPQ-2, and 17/19 isolates for primer OPQ-16.Primer OPQ-4 grouped the isolates into three clades comprising 1/19, 3/19 and 15/19 isolates.Additionally, type three secretion system gene was detected in all tested isolates.Conclusions: This is an effort to type B.pseudomallei strains from Ceara, which is important for better understanding this pathogen, contributing for the epidemiological surveillance of melioidosis in this endemic region. 展开更多
关键词 Burkholderia pseudomallei MELIOIDOSIS RAPD ttss 基因
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流出系数故障对三容水箱系统的影响 被引量:1
9
作者 张丹 刘洋 《山东科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第4期66-72,共7页
研究了三容水箱中流出系数故障对系统稳定性的影响,流出系数的变化直接影响了一步转移矩阵的稳定性,进而影响了系统的整体性能。首先,通过建立三容水箱的模型,得出了系数矩阵与流出系数的关系,然后通过仿真模拟,得到了各个流出系数对系... 研究了三容水箱中流出系数故障对系统稳定性的影响,流出系数的变化直接影响了一步转移矩阵的稳定性,进而影响了系统的整体性能。首先,通过建立三容水箱的模型,得出了系数矩阵与流出系数的关系,然后通过仿真模拟,得到了各个流出系数对系数矩阵特征值的影响的仿真图。最终根据仿真图分析了流出系数故障对三容水箱系统稳定性的影响。 展开更多
关键词 三容水箱系统 流出系数 故障诊断
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嗜水气单胞菌AH-1 quorum sensing负调控Ⅲ型分泌系统的表达
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作者 周文广 刘广锋 周世宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第6期647-652,共6页
通过构建嗜水气单胞菌AH-1 Quorum Sensing(QS)2个关键调节基因ahyI,ahyR的突变菌株,来系统分析嗜水气单胞菌AH-1Ⅲ型分泌系统基因,揭示它们由QS系统调控.在ahyI突变菌中,TTSS分泌效应因子(effector)aexT量显著提高.通过构建LacZ-TTSS... 通过构建嗜水气单胞菌AH-1 Quorum Sensing(QS)2个关键调节基因ahyI,ahyR的突变菌株,来系统分析嗜水气单胞菌AH-1Ⅲ型分泌系统基因,揭示它们由QS系统调控.在ahyI突变菌中,TTSS分泌效应因子(effector)aexT量显著提高.通过构建LacZ-TTSS基因启动子融合表达,进一步表明QS系统负调控编码TTSS组分的基因. 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 QUORUM sensing Ⅲ型分泌系统 负调控
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大肠杆菌O157∶H7新蛋白Ecs4563的基因克隆、表达及纯化 被引量:1
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作者 毛赟赟 李玉霞 +5 位作者 高原 凌焱 胡伟 张部昌 周围 梁龙 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第1期1-4,共4页
目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7新预测分子伴侣蛋白Ecs4563,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出分子伴侣基因ecs4563,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现... 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7新预测分子伴侣蛋白Ecs4563,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出分子伴侣基因ecs4563,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用Western印迹法进行鉴定,通过Ni2+螯合柱纯化获得目的蛋白。结果:构建了pET-24a-ecs4563重组质粒,实现了目的蛋白的融合表达,Ni2+金属螯合法纯化了目的蛋白,通过Western印迹法验证了融合蛋白的特异性。结论:得到了新预测分子伴侣Ecs4563,为下一步研究蛋白功能,进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 ecs4563基因 克隆 基因表达 Ⅲ型分泌系统
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痢疾杆菌细胞内存活机制研究进展
12
作者 王芳 《中国热带医学》 CAS 2010年第1期116-119,共4页
细菌侵染宿主细胞后,宿主对入侵细菌的识别与杀灭决定了细菌的命运。病原菌侵入宿主细胞后,通过改变吞噬体囊泡进入宿主细胞的胞质内,从溶解的吞噬体逃逸以获得复制的场所。然而,这些细胞内的外来者,受到宿主固有免疫系统的监视,如由Nod... 细菌侵染宿主细胞后,宿主对入侵细菌的识别与杀灭决定了细菌的命运。病原菌侵入宿主细胞后,通过改变吞噬体囊泡进入宿主细胞的胞质内,从溶解的吞噬体逃逸以获得复制的场所。然而,这些细胞内的外来者,受到宿主固有免疫系统的监视,如由Nod/CARD家族蛋白介导的、通过激活NF-κB诱导的炎症反应。最近的研究表明,自体吞噬作用,一种主要降解细胞内蛋白质和(或)细胞器的降解系统,同样可以识别入侵细菌。事实上,除非细菌能逃逸自吞噬体膜的包围,否则最终通过自体吞噬作用由自吞噬溶酶体降解。本文综述了痢疾杆菌感染上皮细胞的最新进展,集中讨论痢疾杆菌对抗自体吞噬降解并在细胞内存活的策略。 展开更多
关键词 痢疾杆菌 胞内存活 Ⅲ型分泌系统 自体吞噬
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沙门菌Ⅲ型分泌蛋白融合HBx抗原介导的T细胞免疫效果观察
13
作者 汪业军 侯艳 +2 位作者 黄鹤 刘桂荣 刘树林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期719-724,共6页
目的检测沙门菌减毒株作为载体,Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)效应蛋白-肿瘤抗原融合蛋白激发机体产生T细胞免疫反应的能力。方法重组原核表达质粒,表达Ⅲ型分泌蛋白SspH2和肿瘤抗原HBx融合分子,转化鼠伤寒沙门菌减毒株SL3... 目的检测沙门菌减毒株作为载体,Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,TTSS)效应蛋白-肿瘤抗原融合蛋白激发机体产生T细胞免疫反应的能力。方法重组原核表达质粒,表达Ⅲ型分泌蛋白SspH2和肿瘤抗原HBx融合分子,转化鼠伤寒沙门菌减毒株SL3261,口饲免疫小鼠。通过检测免疫小鼠脾细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放确定疫苗激发CTL作用;利用ELISPOT方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞释放IFN-γ能力;腋下接种稳定表达HBx的B16细胞,观察免疫小鼠肿瘤的体积及重量,检测该疫苗的免疫保护效果。结果通过LDH释放试验发现,经细菌体内表达及投递SspH2-HBx融合蛋白诱发后,小鼠脾淋巴细胞具有特异的CTL反应活性;ELISPOT结果显示细菌表达、投递SspH2- HBx蛋白具有特异诱发淋巴细胞分泌IFN-γ活性;肿瘤接种试验进一步证实这种基于TIKS的肿瘤疫苗可以特异抑制肿瘤的生长。结论以沙门菌减毒株作为载体、Ⅲ型分泌蛋白SspH2作为底物融合肿瘤抗原HBx能够激发显著的T细胞免疫反应、产生一定的免疫保护作用;这种基于沙门菌TTSS的疫苗具有一定的开发、应用前景。 展开更多
关键词 Ⅲ型分泌系统 SspH2 HBX 肿瘤免疫
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