TUNEL法检测复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用

目的研究复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用。方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组(生理氯化钠10ml·kg-1)和复方葛根片低、中、高剂量组[200、400、800mg(生药)·kg-1],每组8只。除正常组外,其他各组大鼠每天9∶00腹腔注射D-半乳糖溶液250mg·(kg·d)-1复制衰老模型,每天15∶00灌胃注射相应药物,连续给药8周。计算肝脏指数,采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测衰老大鼠肝脏组织的细胞凋亡情况。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数显著增加(P<0.01);肝脏组织中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P<0.01);与模型组比较,复方葛根片高、中、低剂量组中大鼠肝脏指数显著减小(P<0.05或P<0.01);肝脏组织中红色荧光明显减少,亮度降低,凋亡指数显著减小(P<0.05或P<0.01)。结论复方葛根片能抑制衰老模型大鼠肝细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护肝脏细胞的作用。

糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡——TUNEL法研究

目的： 确定早期糖尿病视网膜病变 （糖网病） 大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡并观察凋亡特征。方法： 选成年ｗ ｉｓｔａｒ大鼠４０ 只， 随机分成正常对照（ Ｃ Ｏ Ｎ）、糖尿病１ 月 （ Ｄ Ｍ１）、３ 月 （ Ｄ Ｍ３） 及６ 月 （ Ｄ Ｍ ６） 组。采用链脲佐菌素腹腔内注射诱发大鼠糖尿病。取各组大鼠视网膜制备血管铺片， Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ法标记， 光镜观察。结果： Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ法标记的阳性周细胞核出现于 Ｄ Ｍ３ 和 Ｄ Ｍ６ 组，而内皮细胞见于 Ｄ Ｍ ６ 组。 Ｃ Ｏ Ｎ 和 Ｄ Ｍ１ 组未见阳性反应细胞。被标记的周细胞核小而圆， 位于毛细血管侧面， 稍突出于血管壁。而内皮细胞核大而呈现椭圆形， 位于毛细血管中央， 与血管平行， 阳性反应细胞染色质分布不均， 表现为环形核、新月形核等典型的凋亡细胞特征。结论： 早期糖网病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡， 内皮细胞亦存在凋亡。

TUNEL法检测白藜芦醇对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的通过TUNEL法检测白藜芦醇(RES)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡影响,探讨RES对AA大鼠应用效果。方法0.1mL弗氏完全佐剂注射SD大鼠左足趾皮下诱导关节炎复制AA模型,24d后,取非致炎侧踝关节小块滑膜组织分离、培养滑膜细胞,将传代后的滑膜细胞加入不同浓度的RES溶液,利用TUNEL法观察滑膜细胞凋亡情况。结果TUNEL法观察到加入高浓度(20、50μmol/L)RES后TUNEL阳性细胞数明显增多。结论RES能促进AA大鼠滑膜细胞的凋亡。

TUNEL法检测自拟复方葛根片对老龄大鼠子宫的保护作用

目的研究自拟复方葛根片对老龄大鼠子宫的保护作用。方法 40只Wistar大鼠随机分成5组(正常组、模型组、复方葛根片低、中、高剂量组),每组8只。按相关试剂盒操作分别测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)浓度;采用TUNEL法检测衰老大鼠子宫的细胞凋亡情况。结果与正常组比较,模型组大鼠E2浓度降低,FSH、LH、PRL浓度升高(P<0.01),造模成功;与模型组比较,复方葛根片各用药组中E2浓度升高,FSH、LH、PRL浓度降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠子宫切片中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P<0.01);与模型组比较,复方葛根片各用药组中红色荧光明显减少,凋亡指数显著减小(P<0.05或P<0.01)。结论复方葛根片能调节雌激素水平,同时抑制老龄大鼠子宫细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护子宫,延缓衰老作用。

TUNEL方法对基底细胞癌细胞凋亡的观察

采用原位特异性DNA片断标记法（TUN）对12例基底细胞癌进行了研究，结果发现肿瘤细胞团块中心部位有许多不同大小的圆形式印圆形凋亡细胞。提示细胞调亡与BCC的生长缓慢及极少转移的临床特点有关，并且可能在BCC的自然消退中发挥重要的作用。

TUNEL法检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡的方法探究

目的用缺口末端标记技术(Td-mediated dudpo-x nick end Labeling,Tunel)对大鼠睾丸生殖细胞的凋亡做形态学观察,以期提高此方法的特异性和敏感性。方法采用大黄素灌胃后天数不同大鼠睾丸生殖细胞,用HE、Tunel经典法和Tunel改良法观察不同时期细胞凋亡水平并进行比较。结果采用Tunel改良法后,凋亡阳性细胞数量明显增加且背景浅,细胞着色深,轮廓清晰完整,凋亡指数明显提高(P<0.05)。结论改进的Tunel法适合于大鼠睾丸生殖细胞凋亡的检测。

电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的实验观察

目的:观察电针对吗啡戒断大鼠免疫器官及胸腺细胞凋亡的影响。方法:连续15d肌肉注射递增量吗啡,建立大鼠慢性吗啡成瘾模型,观察电针对吗啡戒断大鼠免疫器官胸腺、脾脏及其指数的影响,运用TUNEL法标记各组大鼠胸腺的凋亡细胞。结果:与正常组比,戒断组大鼠免疫器官胸腺、脾脏萎缩,重量下降(P<0.01),胸腺细胞凋亡率升高;电针组大鼠胸腺、脾脏萎缩减轻,重量上升(P<0.01),胸腺细胞凋亡率下降。结论:电针“足三里”穴具有保护免疫器官、抑制胸腺细胞凋亡的作用。

四氯化碳诱导大鼠肾细胞凋亡的研究

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肾形态结构和肾细胞凋亡的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、2周CCl4组和6周CCl4组,每组5只。对照组背部皮下注射橄榄油(0.12 ml/100 g鼠重),CCl4组以0.3 ml/100 g鼠重背部皮下注射60%CCl4橄榄油。2周CCl4组和6周CCl4组大鼠分别于实验的第3周和7周的第1 d处死。肾石蜡切片苏木精-伊红染色,光镜观察肾组织形态学,免疫组织化学显示Caspase-3、Bax、TUNEL观察肾细胞凋亡。结果对照组肾小球和肾小管结构均正常。2周和6周CCl4组的肾小球结构正常,2周CCl4组病变较、6周CCl4组肾皮质近端小管管腔狭小,上皮细胞浊肿,空泡变性,微绒毛脱失。对照组和2周CCl4组Caspase-3、Bax免疫组织化学显色未见阳性细胞表达;而6周CCl4组则在近髓质处的皮质内,近端小管上皮细胞的胞质呈现棕黄色阳性反应。TUNEL显色2周CCl4组可见肾皮质内近端小管上皮细胞核和少量的肾小球细胞核呈阳性表达,而6周CCl4组在大量的远曲小管及少量近端小管的上皮细胞核呈阳性表达。结论CCl4诱导性肾损伤大鼠,2周时肾组织的近端小管上皮及少量肾小球毛细血管内皮细胞发生凋亡,而损伤6周时,肾皮质近端小管受损,上皮细胞变性;远曲小管上皮细胞发生凋亡。

宫颈原位癌中Ki-67的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨宫颈原位癌中Ki 6 7的表达及其与细胞凋亡的关系 ,及对原位癌生物学特性的影响。方法 采用免疫组化SP法检测石蜡包埋宫颈组织中Ki 6 7的表达 ,包括研究组宫颈鳞状上皮原位癌 30例 ,对照组正常上皮组织 10例、中重度不典型增生 2 0例和浸润癌 15例。并用TUNEL法原位检测细胞凋亡 ,以 10 0 0个细胞中增生细胞和凋亡细胞分别作为增生指数PI(‰ )和凋亡指数AI(‰ )。结果 PI在宫颈原位癌中明显高于正常组和不典型增生组 ,但又显著低于浸润癌组 (P <0 0 1) ,AI在宫颈原位癌中明显高于正常 ,但又显著低于浸润癌 (P <0 0 5 ) ,且PI和AI呈显著正相关 (P <0 0 1) :4组中PI的变异性小 ,AI的变异性大 ,尤其是原位癌组。结论 宫颈原位癌是癌变过程中一个相对特殊阶段的癌 ,癌细胞的增殖活性虽然明显高于正常组和不典型组 ,但其增殖和浸润能力仍受到一定限制。

小鼠肾脏发育中的细胞凋亡

目的 研究小鼠肾脏发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点。 方法 应用光镜、电镜技术和TUNEL法分别对不同胚龄、生后日龄小鼠肾脏细胞凋亡进行了观察。 结果 皮质凋亡细胞多出现在生肾区S小体之间和肾小体内 ,凋亡高峰期在胚龄 14～ 18d之间。髓质凋亡细胞出现在肾小管上皮内 ,凋亡高峰期在生后 7d左右。超微结构观察可见皮质和髓质凋亡细胞主要表现为核固缩 ,染色质凝集 ,细胞皱缩。皮质和髓质凋亡细胞结局为 ,被邻近细胞吞噬 ,或脱落到肾小管腔内。 结论 小鼠肾脏发育过程中确有细胞凋亡 ;皮质中细胞凋亡与生肾区的出现和肾小体发育完善有关 。

Survivin,Bcl-2在乳腺癌中的表达及意义

目的 探讨Survivin ,Bcl 2在乳腺癌中的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系。方法 用免疫组化S P法检测 6 0例乳腺癌中的Survivin ,Bcl 2 ,PCNA的表达。并用TUNEL法测定凋亡指数。结果 Survivin与病人的年龄、肿瘤的大小、组织学分级、淋巴结的转移无关 ,但与病人的生存期限有关 ;Bcl 2与乳腺癌组织学分级有关。Survivin与细胞的凋亡和增殖有关 ;Bcl 2只与细胞的凋亡有关。结论 Survivin与乳腺癌病人的生存期有关 ,可作为独立的预后因素 ;Survivin表达与Bcl 2表达之间无相关性 ,它们是通过不同途径发挥各自的生物学作用。

创伤后应激障碍大鼠海马神经元凋亡的形态学变化及相关基因表达

目的探讨创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元Bcl-2和Bax的表达及与神经元凋亡的关系。方法采用国际认定的SPS方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,取SPS刺激后1d、4d、7d、14d组和正常对照组。应用透射电镜和原位末端标记法观察PTSD大鼠海马神经元细胞凋亡的形态学变化并检测细胞凋亡指数;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光共焦显微镜技术和免疫印迹法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果PTSD大鼠海马神经元出现细胞凋亡改变;凋亡细胞数量随时间的延长而逐渐增多,于SPS刺激后7d达高峰;Bcl-2蛋白于SPS刺激后4d达高峰;Bax蛋白于SPS刺激后7d达高峰,之后逐渐下降。Bcl-2/Bax的比值于SPS刺激后一过性增加,以后随时间延长比值下降。结论海马神经元细胞凋亡可能是PTSD大鼠海马萎缩的原因之一;Bcl-2和Bax蛋白含量增加以及两者的比值失衡可能是导致PTSD大鼠海马神经元凋亡的原因之一。

火针对脊髓损伤模型大鼠凋亡细胞的影响

目的:观察火针改善脊髓损伤大鼠凋亡细胞的表达情况,为临床治疗脊髓损伤提供实验依据。方法:本研究以随机对照法进行动物分组,采用改良的Allen s法制备脊髓损伤模型,以火针、毫针分别进行干预,采用TUNEL法观察大鼠凋亡细胞的变化。结果:治疗手段干预后,与模型组比较,火针组、毫针组72 h、1 w的细胞凋亡表达存在显著性差异(P<0.05)。结论:火针能较好的减少脊髓损伤大鼠凋亡细胞的表达数量。

胰腺癌组织Survivin的表达与细胞凋亡、增殖的关系

目的:观察胰腺癌组织Survivin的表达与细胞凋亡、增殖的关系.方法:采用TUNEL法和免疫组化法检测64例胰腺癌及癌旁组织的细胞凋亡指数(AI)与增殖指数(PI)及Survivin表达,分析AI、PI与Survivin表达和临床病理因素的相关性.结果:Survivin蛋白在癌旁组织无表达,在胰腺癌组织阳性率为87.9%,两者比较差异显著(P<0.001).AI与年龄、性别及肿瘤部位无关,随胰腺癌组织分化程度的增加而增加,癌旁组织显著高于胰腺癌组织(30.47%vs1.64%,P<0.001);PI与年龄、性别、肿瘤部位及淋巴结转移无关,而与癌组织的分化程度相关,随着胰腺癌分化程度的降低而增加.从分化程度观察,胰腺癌组织AI与Survivin表达水平呈负相关(r=-0.85),PI与Survivin表达水平呈正相关(r=0.87);从有无转移来看,胰腺癌AI与Survivin表达水平呈负相关(r=-0.81).结论:Survivin凋亡抑制基因在胰腺癌发生和发展中起重要作用.

大肠癌中survivin基因的表达及相关性研究

目的 探讨survivin凋亡抑制基因的表达变化与大肠癌生物学行为及cyclinD1、bcl 2、p5 3和凋亡指数 (AI)的相关性。方法 利用免疫组织化学EnVision法检测 98例大肠癌、2 4例正常大肠黏膜和 2 9例大肠息肉组织中survivin、bcl 2、cy clinD1,并用TUNEL法测定AI。结果 survivin、bcl 2、cyclinD1和 p5 3在 98例大肠癌组织中的阳性表达率分别为 6 8 37%、6 0 2 %、4 0 8%和 5 2 %。survivin表达在癌细胞胞质内 ,核内未见表达 ,bcl 2表达在细胞质内 ,cyclinD1和 p5 3均在核内表达。survivin的表达与组织学类型和淋巴结转移密切相关 (P均 <0 0 5 ) ,其阳性表达组的AI显著低于阴性组 (P <0 0 1) ,其阳性表达者术后 5年复发转移率均较阴性者显著增高 (P <0 0 1) ,而 5年生存率则显著降低 (P <0 0 5 ) ,survivin表达与bcl 2、p5 3无相关性 ,与cyclinD1表达呈正相关 (P <0 0 5 )。bcl 2和cyclinD1的阳性表达与组织学类型关系密切 (P均 <0 0 5 ) ,bcl 2阳性组的AI明显低于阴性组 (P <0 0 5 ) ,cyclinD1的阳性表达与 5年生存率明显相关 (P <0 0 5 )。 结论 survivin、bcl 2、cy clinD1和p5 3基因在大肠癌的发生、发展中起着不同程度的作用 ,它们的检测对大肠癌恶性程度的判定 ,预后分析和进一步治疗提?

甲状腺癌中细胞凋亡指数的检测及其意义

目的检测细胞凋亡指数(Apoptosis Index,AI)在甲状腺癌中的表达,探讨细胞凋亡在甲状腺癌发生中的作用。方法应用原位细胞凋亡检测(TUNEL)试剂盒对36例甲状腺癌及6例结节性甲状腺肿组织进行AI的检测。结果结节性甲状腺肿的细胞AI平均值为12.39±2.21,甲状腺癌组织的细胞AI平均值为20.17±2.68,二者差异具有显著性(P<0.05)。AI与病人的年龄、病理分型、临床分期和淋巴结转移无关,P>0.05。结论甲状腺癌组织的AI平均值高于正常对照组,肿瘤细胞凋亡的失衡在甲状腺癌发生中起作用。

大鼠正常牙髓和炎症牙髓中的细胞凋亡

目的：建立大鼠实验性牙髓炎模型；原位观察大鼠正常牙髓和炎症牙髓中细胞凋亡现象，探讨细胞凋亡在牙髓炎病理变化中的作用。方法：１６只ＳＤ大鼠的磨牙采用内毒素化学诱导法建立牙髓炎模型，分别于１ｄ、３ｄ、５ｄ、７ｄ取材，常规制备石蜡切片，行ＨＥ染色和ＴＵＮＥＬ法检测。结果：正常牙髓中成牙本质细胞和牙髓细胞均发现有凋亡细胞；炎症牙髓中炎细胞聚集区未发现典型的凋亡细胞，而在其周边发现有较典型的凋亡细胞，在其正常组织中也有散在的凋亡细胞存在。结论：正常牙髓和炎症牙髓中存在细胞凋亡，细胞凋亡在牙髓炎的转归和预后方面可能有一定的作用。

Assessment of germ cell apoptosis in cryptorchid rats

Aim: To investigate the relationship between germ cell degeneration and apoptosis in cryptorchid rats. Methods: Thirteen 21-day-old Wistar rats were made unilaterally cryptorchid by closing the left inguinal canal. At day 30 (Group 1, n=6) and day 60 (Group 2, n=7) after operation, the testes were removed for histopathological examination. The controls (n=8) were sham operated and were sacrificed at day 60. Germ cell apoptosis was assessed by means of the TUNEL method. Results: Spermatogenesis was arrested and the testicular and seminiferous tubular diameters were significantly reduced In the unilateral undescended testes (UUTs) compared with the contralateral descended testes (CDTs) and the control rats. However, atrophic changes, pathological calcification, necrosis of seminiferous tubule, and absence or sloughing of germ cells were not found in all the animals. The spermatocytes were the main type of germ cells undergoing apoptosis in all the groups. In the UUTs, there was a significant and time-dependent increase in the mean apoptotic index. By 60 days after surgery, increased apoptosis in germ cells was also observed in the CDTs. Conclusion: Apoptosis is the predominant mechanism of germ cell death rather than atrophy and necrosis in cryptorchidism.

皮瓣缺血再灌注损伤后细胞凋亡变化规律的研究

目的:观察皮瓣缺血再灌注(i schemi a reperf usi on,IR)损伤后细胞凋亡变化规律,并探讨其可能的发病机制。方法:运用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺口标记技术(TUNEL)法,在大鼠以腹壁浅血管为蒂的岛状皮瓣缺血再灌注模型上,分别在不同的时间点观测对照组和试验组,采用光镜下观测凋亡细胞数;免疫组化的方法测定皮瓣组织中细胞凋亡蛋白表达的变化规律。结果:在实验组随着缺血和再灌注时间的延长,TUNEL细胞数量急剧增多,对照组各时间段TUNEL细胞表达显示呈递增趋势,但较实验组递增速度缓慢。两组经SPSS11.5统计学检测均有统计学意义(P<0.05)。结论:缺血、再灌注等损伤因素可加速细胞的凋亡,有望为皮瓣从基因分子水平的保护探讨一条新的治疗途径。

胆汁性肝硬化大鼠肾细胞凋亡及其机制

目的:探讨胆汁性肝硬化大鼠肾脏病理组织学改变、肾脏细胞凋亡及其机制.方法:应用胆总管结扎(CBDL)技术制备大鼠胆汁性肝硬化模型.将SD大鼠随机分为:假手术组(SO)、CBDL2wk组与5wk组.显微镜下观察肝脏和肾脏组织学改变;生化法测定内生肌酐清除率(Ccr),比色法测定肾组织丙二醛(MDA)含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化测定Bcl-2,Bax蛋白的表达.结果:CBDL大鼠2wk发生肝纤维化,5wk则形成肝硬化;5wk时肾小管上皮细胞有脱落、坏死;电镜下基底膜不规则增厚,系膜增宽,上皮细胞足突融合.模型大鼠5wk组Ccr明显降低,较2wk组与SO组有显著性差异(1.10±0.03vs1.40±0.03,1.80±0.02,P<0.05或0.01),肾组织丙二醛5wk组较2wk组与SO组显著性增高(4.07±0.51vs2.32±0.85,0.79±0.37,均P<0.01);模型大鼠5wk组肾组织凋亡指数显著性高于2wk组和SO组(68.36%±8.71%vs24.08%±2.59%,11.43%±2.77%;均P<0.01).SO组、2wk组及5wk组Bcl-2逐渐下降,Bax表达则逐渐升高,各组间有显著差异(P<0.05).结论:胆汁性肝硬化大鼠存在肾病理组织学改变与细胞凋亡;凋亡抑制蛋白Bcl-2低表达和凋亡诱导蛋白Bax高表达在肾损害中起作用.