桑树MuPR1a基因的克隆及启动子活性分析

病程相关蛋白(PR)在植物对病原物的防卫反应过程中具有重要作用。从桑树叶片中克隆得到桑树病程相关蛋白基因MuPR1a(GenBank登录号:KC453993)。该基因编码区全长为516 bp,共编码171个氨基酸,编码蛋白质具有一个典型的分泌型信号肽序列和多个PRs蛋白保守结构域,其氨基酸序列与其它植物的PR1a蛋白具有很高的同源性。利用巢式PCR(Tail-PCR)技术克隆得到MuPR1a的启动子,并将其命名为MPRp(GenBank登录号:KC849423),该启动子序列含有CAATbox、TATA-box、TCA-element、GCC box等正常转录起始必需的顺式作用元件。农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达分析显示,MPRp具有启动子的功能,能够驱动下游报告基因的表达并且具有一定的被病原菌诱导表达的活性。

Generation and Analysis of Pathogenicity-related Gene Mutants of Colletotrichum gloeosporioides Using a Novel Promoter Trapping System

Agrobactedum tumefac/ens-mediated transformation （ATMT） is an efficient tool for insertional mutagenesis and is used in a wide variety of plants. This paper reports a promoter trapping method to generate mutants in the filamentous fungus, Colletotrichum gloeosporioides, by ATMT insertion of a trapping vector （pCAHPH） that carries a promoterless hygromycin phosphotransferase （hph） gone. Transformants were selected on the media containing 200 ~mL hy^omycin B, and screened for pathogenicity-related gene mdtants. Their pathogenicity-related mutants T-DNA flanking sequences were then cloned and analyzed. Hph genes were amplified from mutant genomic DNA but not from wild-type DNA, indicating that the phenotypic alternations of these mutants were the results of T-DNA inser- tion. T-DNA flanking sequences were obtained using modified themud asymmetric interlaced PCR. Two right-sided flanking sequences were highly homologous to proteins from other species.

甘蓝细胞质雄性不育相关基因orf138的分子特性分析

以甘蓝Ogura细胞质雄性不育系为材料,找出能够有效鉴定由orf138导致的甘蓝CMS的标记,并明确此基因在甘蓝OguCMS基因组中的位置。根据萝卜CMS相关基因orf138的序列信息,设计特异引物,并在甘蓝不同类型不育系和保持系中鉴定PCR产物的稳定性。随后利用Tail-PCR技术,扩增获得此基因的侧翼序列并进行了生物信息学分析。根据orf138的全长序列设计引物Bo138300BF/R,在甘蓝不育型材料中,能够稳定扩增出300bp左右的单一条带,而在其他细胞质不育类型和可育材料中均未扩出条带,经多次验证结果稳定可靠。甘蓝中orf138的上下游侧翼序列有效碱基1789bp,通过生物信息学分析,获得包括起始密码和终止密码的orf138的完整序列共417bp。同源性比对结果显示:与甘蓝型油菜、白菜和萝卜的orf138片段具有高度保守性。分析侧翼序列表明甘蓝orf138的3’端是由ORF83、trnfM、ORF125等基因片段构成的一个复杂序列。获得了甘蓝OguCMS特异的分子鉴定标记,明确了orf138在甘蓝线粒体中的位置,以上结果为甘蓝雄性不育的进一步研究奠定良好的基础。