围生期奶牛低钙血症与TRAP-5b的关系研究进展

奶牛低钙血症是奶牛围生期矿物质代谢紊乱性疾病。奶牛骨骼中含有的钙约占机体钙含量的99%。低钙血症可引起一系列代谢障碍性疾病,这些疾病发病率高,会给养殖者造成巨大的经济损失。随着对奶牛低钙血症研究的不断深入,研究者们发现产前骨钙动员、破骨细胞的活性增强与产后低钙血症有显著的相关性。作为破骨细胞和骨吸收的标志物,抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRAP-5b）等骨代谢生化标志物在围生期奶牛血浆中有明显的变化。因此,笔者查阅了大量文献,概述了奶牛低钙血症与骨代谢生化标志物TRAP-5b的关系及其研究进展。

补托坐浴方对大鼠肛周脓肿术后创面愈合机制的Label-free蛋白质组学研究

目的观察补托坐浴方对肛周脓肿术后模型大鼠创面愈合的影响,同时采用非标记定量(Label-free)蛋白质组学分析探寻其可能的作用机制。方法应用无特定病原体级SD大鼠建立肛周脓肿术后创面模型,随机分为对照组、模型组和补托坐浴方治疗组,连续治疗14d后,观察大鼠的创面生长情况,采用HE染色观察创面组织病理变化;通过Label-free蛋白质组学分析对照组、模型组、补托坐浴方治疗组大鼠术后创面组织差异蛋白。结果补托坐浴方治疗组胶原形成情况和表皮生长情况优于模型组和对照组(P<0.05)。蛋白质组学分析结果显示,模型组、对照组、补托坐浴方治疗组中共有11个差异表达蛋白,抗酒石酸酸性磷酸酶5(TRAP/ACP5)在3组中同时存在;且与模型组、对照组相比,补托坐浴方治疗组ACP5呈下降趋势。结论补托坐浴方治疗组可抑制炎症因子,可能通过调节p38/JNKMAPK信号通路的表达促进大鼠肛周脓肿术后创面愈合。

镓盐对大鼠维甲酸致骨质疏松血清ALP和TRAP的影响

为观察镓盐对维甲酸致大鼠骨质疏松动物模型血中碱性磷酸酶 (AL P)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)水平及其变化趋势 ,选用 3月龄 SD雌性大鼠 45只 ,随机分为两组 :正常组 (13只 )和骨质疏松组 (32只 ) ,骨质疏松组按 85 mg/ kg· d维甲酸灌胃 15天 ,然后进入治疗阶段。实验分为四组 :正常组 (6只 ) ,骨质疏松组 (6只 ) ,正常喂养 ;氯化镓治疗组 (9只 ) ,2 5 mg/ kg·d氯化镓灌胃 ;雌激素治疗组 (6只 ) ,雌激素 0 .2 μg/ kg,3次 /周 ,腹腔注射 ,治疗两个月。结果显示模型期骨质疏松组 AL P和 TRAP显著升高 ,镓盐治疗后 AL P和 TRAP降低 ,与正常组接近 ,提示镓盐能抑制破骨细胞活性 ,降低骨转化率。

紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制研究

目的:探讨紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制。方法:①分析紫菀酮对核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)诱导Raw 264.7细胞向破骨细胞分化的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组、紫菀酮1μmol·L^(-1)干预组、紫菀酮2.5μmol·L^(-1)干预组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,空白对照组加入完全培养基,阳性对照组加入含25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,其余各组分别加入含有相应浓度紫菀酮及25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,培养5 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP)染色,统计各组破骨细胞数;②分析紫菀酮对Raw 264.7细胞活力的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、紫菀酮1μmol·L^(-1)干预组、紫菀酮2.5μmol·L^(-1)干预组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,空白对照组加入完全培养基,其余各组分别加入含有相应浓度紫菀酮的完全培养基,分别培养48 h、120 h后测定各组细胞活力;③分析紫菀酮对破骨细胞纤维状肌动蛋白环形成的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,空白对照组加入完全培养基,阳性对照组加入含25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组分别加入含有相应浓度紫菀酮及25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,培养5 d后采用鬼笔环肽和4’,6二脒基2苯基吲哚染色,观察各组破骨细胞纤维状肌动蛋白环形成情况。④分析紫菀酮对核因子κB(nuclear factorκB,NFκB)转录活性的影响。将稳定转染pGL4.32[luc2P/NFκBRE/Hygro]载体的RAW 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,空白对照组及阳性对照组加入完全培养基,紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组加入终浓度为10μmol·L^(-1)紫菀酮的完全培养基;培养2 h后,阳性对照组及紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组分别加入RANKL溶液,使培养基中RANKL的终浓度为25 ng·mL^(-1);继续培养6 h后,检测各组细胞荧光素酶的荧光强度。⑤分析紫菀酮对核因子κB抑制蛋白激酶α亚基(inhibitor of nuclear factor kappaB kinase subunitα,IκBα)蛋白表达的影响。将Raw 264.7细胞分为阳性对照组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,每组6孔,分别编号1~6。待细胞贴壁后,阳性对照组加入完全培养基,紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组加入终浓度为10μmol·L^(-1)紫菀酮的完全培养基,继续培养2 h后,在2组的1号孔加入RANKL溶液使RANKL终浓度为25 ng·mL^(-1),在1号孔加入RANKL溶液后30 min、40 min、50 min、55 min,分别在2号、3号、4号、5号孔加入RANKL溶液至RANKL终浓度为25 ng·mL^(-1)。在1号孔加入RANKL后60 min,收集各孔细胞,采用蛋白印迹法检测IκBα蛋白的表达量。⑥分析紫菀酮对破骨细胞特异性基因转录的影响。将Raw 264.7细胞分为阳性对照组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组。阳性对照组加入含25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组分别加入含有相应浓度紫菀酮和25 ng·mL^(-1)RANKL的完全培养基,培养5 d后,收集各组细胞,采用实时定量PCR检测组织蛋白酶K、空泡型ATP酶d2亚基(vacuolar ATPase subsnit D2,VATPase d2)、TRAP的mRNA表达量。⑦分析紫菀酮对活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)蛋白表达的影响。将Raw 264.7细胞分为阳性对照组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组,每组4孔,分别编号1~4。待细胞贴壁后,阳性对照组加入完全培养基,紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组加入终浓度为10μmol·L^(-1)紫菀酮的完全培养基。继续培养2 h后,在2组的1号孔加入RANKL溶液使RANKL终浓度为25 ng·mL^(-1),在1号孔加入RANKL溶液后2 d、4 d,分别在2号、3号孔加入RANKL溶液使RANKL终浓度为25 ng·mL^(-1)。在1号孔加入RNAKL后5 d,收集各孔细胞。采用蛋白印迹法检测NFATc1蛋白的表达量。结果:①紫菀酮对RANKL诱导Raw 264.7细胞向破骨细胞分化影响的分析结果。空白对照组之外的5组破骨细胞数比较,差异有统计学意义[(187.667±14.503)个,(180.000±14.422)个,(174.333±11.060)个,(152.667±5.033)个,(130.667±11.015)个,F=11.767,P=0.001]。紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组破骨细胞数均少于阳性对照组、紫菀酮1μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮2.5μmol·L^(-1)干预组(P=0.004,P=0.000;P=0.017,P=0.000;P=0.047,P=0.001);紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞数少于紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组(P=0.044)。②紫菀酮对Raw 264.7细胞活力影响的分析结果。紫菀酮干预48 h、120 h时,5组Raw 264.7细胞活力比较,组间差异均无统计学意义(48 h:0.960±0.101,0.938±0.051,0.916±0.072,0.915±0.079,1.009±0.105,F=0.647,P=0.641;120 h:1.347±0.161,1.388±0.047,1.423±0.473,1.398±0.067,1.357±0.034,F=0.400,P=0.805)。③紫菀酮对破骨细胞纤维状肌动蛋白环形成影响的分析结果。与空白对照组比较,阳性对照组、紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组均可见破骨细胞和纤维状肌动蛋白环;与阳性对照组比较,紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞纤维状肌动蛋白环形成均受到抑制,且其受到抑制的程度随紫菀酮干预浓度增加而增强。④紫菀酮对破骨细胞NFκB转录活性影响的分析结果。3组荧光素酶相对荧光强度比较,组间差异有统计学意义(0.058±0.003,1.000±0.044,0.753±0.040,F=613.132,P=0.000)。阳性对照组和紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组的荧光素酶相对荧光强度高于空白对照组(P=0.000,P=0.000),紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组的荧光素酶荧光强度低于阳性对照组(P=0.000)。⑤紫菀酮对IκBα蛋白表达影响的分析结果。2组破骨细胞IκBα蛋白相对表达量随诱导时间延长均呈先下降后上升趋势,但2组的趋势不完全一致(1.000±0.000,0.414±0.171,0.285±0.104,0.132±0.021,0.157±0.038,0.802±0.066,F=49.839,P=0.000;0.980±0.130,0.632±0.102,0.347±0.037,0.302±0.070,0.546±0.142,1.502±0.345,F=21.435,P=0.000);诱导20 min、30 min、60 min,紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞IκBα蛋白相对表达量高于阳性对照组(t=-4.018,P=0.016;t=-4.586,P=0.010;t=-3.444,P=0.026)。⑥紫菀酮对破骨细胞特异性基因转录影响的分析结果。3组破骨细胞VATPased2、组织蛋白酶K、TRAP的mRNA表达量比较,组间差异均有统计学意义(1.000±0.089,0.879±0.100,0.530±0.054,F=25.553,P=0.001;1.000±0.030,0.725±0.153,0.719±0.111,F=6.293,P=0.034;1.000±0.326,0.834±0.030,0.656±0.327,F=88.003,P=0.000)。紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组破骨细胞组织蛋白酶K、TRAP的mRNA表达量均低于阳性对照组(P=0.023,P=0.001);紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞VATPased2、TRAP的mRNA表达量均低于紫菀酮5μmol·L^(-1)干预组和阳性对照组(P=0.000,P=0.002;P=0.000,P=0.000);紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞组织蛋白酶K的mRNA表达量低于阳性对照组(P=0.021)。⑦紫菀酮对NFATc1蛋白表达影响的分析结果。2组破骨细胞NFATc1蛋白相对表达量随诱导时间延长均呈上升趋势,但2组的上升趋势不完全一致(1.000±0.000,1.175±0.007,4.700±0.742,19.430±1.763,F=250.352,P=0.000;1.042±0.035,1.334±0.290,3.531±0.583,15.690±0.823,F=525.669,P=0.000);诱导后5 d,紫菀酮10μmol·L^(-1)干预组破骨细胞NFATc1蛋白相对表达量低于阳性对照组(t=3.329,P=0.029)。结论:紫菀酮能够抑制体外破骨细胞的分化和活性,其作用机制与抑制NFκB和NFATc1信号通路有关。

1,25(OH)_2维生素D_3诱导大鼠骨髓单核细胞形成破骨细胞

目的观察1,25二羟维生素D31,25(OH)2D3诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成多核破骨细胞的作用。方法实验分为单核细胞诱导组和全骨髓诱导组,每组各10只大鼠。密度梯度离心法分离大鼠骨髓中的单核细胞,α-MEM培养液中加入10-8mol/L的1,25(OH)2D3诱导单核细胞向破骨细胞分化。利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、倒置相差显微镜和扫描电镜,观察诱导不同时相TRAP阳性(TRAP+)多核细胞的形态学特征、特异性酶表达、以及骨吸收陷窝。进而计数诱导的破骨细胞数量,鉴定其功能活性,并与全骨髓诱导方法比较。结果骨髓单核细胞诱导组在培养第7d出现TRAP+多核细胞,第14dTRAP+多核细胞数量达峰值,第21d TRAP+多核细胞数量开始减少。从培养第14d到第23d,单核细胞诱导组TRAP+多核细胞数量多于全骨髓诱导组(P<0.05);培养第10d到第23d单核细胞诱导组骨吸收陷窝数量多于全骨髓诱导组(P<0.05)。单核细胞诱导组破骨细胞数量高峰期可持续7d,全骨髓诱导法仅持续3d。结论1,25(OH)2D3能够诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成破骨细胞;所诱导的破骨细胞的数量和峰值持续时间、以及骨吸收活性均高于全骨髓诱导方法。

转移生长因子β_1对体外培养破骨细胞功能影响的实验研究

目的 :探讨转移生长因子 β1(TGF β1)对体外培养破骨细胞功能影响的机制。方法 :酶动力学法测定培养基中酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性 ;共聚焦激光扫描显微镜观察体外培养破骨细胞内氢离子随TGF β1浓度的变化情况 ;LeicaQuantimet 5 0 0图像分析系统对骨吸收陷窝进行图像分析 ;扫描电镜观察骨吸收陷窝变化。结果 :随着TGF β1浓度的升高 ,处理组与对照组ACP和TRAP的活性分别从 (1.71± 0 .3 3U) /L和 (1.41± 0 .2 9)U /L降低到 (1.3 2± 0 .2 1)U/L和 (1.0 1± 0 .11)U /L(均为P <0 .0 1) ,骨吸收陷窝的数目与面积从 (16.67± 1.3 5 )个 /片和 (5 82 .2 4± 178.68) μm2 减少到 (13 .2 9± 1.47)个 /片与 (4 4 2 .3 8± 14 8.2 7) μm2 ,处理组与对照组比较差异具有显著性 (P <0 .0 1)。破骨细胞相对荧光值无显著性差异 ,表明TGF β1对体外培养破骨细胞分泌H+ 无明显影响。结论 :TGF β1虽然不能抑制氢离子释放 ,但能通过改变酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性 。

镓盐和雌二醇对维甲酸致骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 对比研究镓盐及雌二醇对维甲酸致大鼠骨质疏松模型骨代谢的影响。方法 3月龄SD雌性大鼠 45只 ,随机分为两组 :正常组 ( 1 3只 ) ,骨质疏松组 ( 32只 ) ,骨质疏松组按 85mg/(kg·d)维甲酸灌胃 1 5d。然后进入治疗阶段 ,实验分为四组 :正常组 ( 8只 ) ,骨质疏松组 ( 9只 ) ,正常喂养 ;氯化镓治疗组 ( 1 0只 ) ,2 5mg/(kg·d)氯化镓灌胃 ;雌激素治疗组( 8只 ) ,雌激素 0 .2 μg/kg ,3次 /周 ,腹腔注射 ,治疗两个月。 结果 模型期骨质疏松组血清AKP和TRAP活性显著增高 ,骨质疏松组平均骨小梁宽度变窄 (P <0 .0 0 1 ) ,平均骨小梁间距变大(P <0 .0 0 1 ) ,平均骨皮质厚度变薄 (P <0 .0 0 1 ) ,骨小梁百分比降低 (P <0 .0 0 1 ) ,镓盐及雌激素治疗后 ,可使显著增高的AKP和TRAP活性降低到接近正常组水平 ,平均骨皮质厚度增加 ,骨小梁百分比增大。结论 雌激素抑制骨吸收 ,促进骨形成 ,维持骨转换平衡。提示镓盐通过抑制破骨细胞的破骨能力 ,降低了骨转换率 ,抑制骨溶解 ,增加了骨量及骨的硬度。

流体剪应力对大鼠破骨细胞骨吸收活性的影响

探讨流体剪应力对大鼠破骨细胞骨吸收活性的影响。我们采用低温离心法获取6月龄健康雌性SD大鼠椎骨骨髓细胞,以1.6×106细胞密度种植于血盖片上,采用1,25-(OH)2维生素D3体外诱导获取破骨细胞。于破骨细胞诱导的第7d取出细胞爬片,置于流体剪应力装置中,分别加载5.97、11.36、16.08、20.54dyne/cm2大小的流体剪应力,持续30min,以未加载流体剪应力的破骨细胞为对照组。实验结束时,以2.5%戊二醛固定细胞爬片,置于0.25mol/L氢氧化铵液超声处理10min,清除细胞爬片上的破骨细胞,经1%硪酸固定,梯度酒精脱水,醋酸异戊酯置换酒精,CO2临界点干燥,喷金后扫描电镜观察骨吸收陷窝并计数,图像分析法测定骨吸收陷窝的面积;同时分别收集每次灌流液10ml,冻干,用1ml复溶后,紫外分光光度仪检测抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)活性的变化。结果显示:在本实验中所选用的流体剪应力可增强破骨细胞TRAP活性,而骨吸收陷窝的数量和面积也增加,尤其是剪应力在16.08dyne/cm2时,破骨细胞TRAP活性增强以及骨吸收陷窝的数量和面积增高最为明显。结果表明,一定范围内的流体剪应力可以增强破骨细胞的骨吸收活性。

弱激光照射对实验性牙齿移动骨改建影响作用的组织化学研究

目的 :通过碱性磷酸酶与酸性磷酸酶染色的组织化学方法 ,探讨弱激光照射对正畸骨改建的影响作用。方法 :选择弱激光照射 (CO2+He-Ne)的方法 ,制作兔正畸牙齿移动的动物模型。将 42只大而白免分为未加力组 ,加力 1天、3天、5天、7天、14天、2 1天组 ,每组 6只 ,右侧作为照射侧 ,左侧作为对照侧。对兔实验性牙齿移动过程中牙周组织的变化进行了组织化学 (碱性磷酸酶与酸性磷酸酶 )染色的观察 ,并进行图象分析、统计学处理。结果 :碱性磷酸酶体积百分比的比较结果表明 ,3天、5天组照射侧碱性磷酸梅的活性变化差异显著 ,P值 <0 .0 5碱性磷酸酶酸总数目的比较结果以 3 ,5 .7天组差异显著 ,其中 3天组P值 <0 .0 1,5、7天组P值 <0 .0 5。酸性磷酸酶染色结果为照射侧 3天、7天组较对照侧有显著差异 ,P <0 .0 5。结论 :弱激光照射侧碱性磷酸酶与酸性磷酸酶的活性均增强 。

Toll样受体4信号通路过度激活在大鼠激素性股骨头坏死中的作用

目的建立大鼠激素性股骨头坏死模型并研究Toll样受体4(TLR4)信号通路在激素性股骨头坏死中的作用机制。方法成年雄性SD大鼠随机分为模型组、干预组,每组各24只,按照甲强龙20mg/kg的剂量给予双侧臀大肌交替肌注造模,1周1次,共8周。其中干预组在每次激素注射后,同时给予10mg/kg TAK242药物静脉注射;另12只大鼠设为对照组,仅在同等条件下给予生理盐水肌注。在激素注射后的8、10、12周时分别以过量麻醉法处死各组动物,采用ELISA测定血清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量,并对股骨头进行组织病理学观察和TRAP特异性染色观察。分别提取各组大鼠股骨头总mRNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot技术检测TLR4、髓样细胞分化因子88(MyD88)、NF-κB p65和单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的mRNA及蛋白的表达。结果模型组股骨头坏死的组织病理学表现明显,其中血清TRAP含量、TRAP特异性染色面积、各因子的mRNA和蛋白含量表达均较其他两组有统计学差异(P<0.05)。干预组与空白对照组的各指标检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论大剂量激素的使用可以引起TLR4信号通路过度激活从而介导激素性股骨头坏死的发生。

精骨补肾颗粒对地塞米松诱导骨质疏松症大鼠的保护作用

目的观察精骨补肾颗粒(黄精、骨碎补、桑葚等)对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid induced osteoporosis,GIOP)大鼠的骨密度(BMD)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)、肌钙蛋白(Tn)、血清降钙素(CT)、雌二醇(E2)的影响及可能的作用机制。方法将72只雌性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,阳性对照组(仙灵骨葆胶囊),精骨补肾颗粒低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠每周2次肌肉注射地塞米松2.5 mg/kg,同时每日灌胃给药连续9周。实验结束后眼球取血,用酶联免疫法测定大鼠Tn、TRAP、ALP、CT、E2指标,用双能X线骨密度仪对大鼠离体股骨上1/3 BMD进行检测。结果 GIOP大鼠对照组的TRAP、ALP明显升高,BMD、Tn、CT、E2明显降低,与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.01);精骨补肾颗粒低、中、高剂量组可显著降低GIOP大鼠TRAP、ALP含有量,显著升高BMD、Tn、CT、E2值,且存在一定的剂量依赖关系,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论精骨补肾颗粒对骨质疏松症大鼠具有一定的治疗作用。

磷对体外培养番鸭破骨细胞生成及骨吸收功能的影响

本试验旨在观察磷对体外培养番鸭破骨细胞(OC)生存、生成以及骨吸收功能的影响。分离1日龄番鸭长骨骨髓细胞,培养过程中分别加入不同比例的NaH2PO4、10-8mol/L1,25-(OH)2D3二因子、不同浓度的NaH2PO4单因子。倒置显微镜观察细胞形态,更换含磷培养液后6h、12h、18h、24h、30h和7d进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP),分别进行OC计数、形态观察;培养30h内吖啶橙染色,观察OC凋亡情况,7d后扫描电镜观察象牙片吸收陷窝情况。结果表明:在同一时间点,添加磷培养液均能抑制1,25-(OH)2D3诱导产生OC,并抑制OC的骨吸收活性,抑制程度与磷浓度成正比,3、5和7mmol/L组OC数量均极显著少于对照组(P<0.01);5mmol/L组OC数量极显著少于3mmol/L组(P<0.01);5mmol/L组与7mmol/L组差异不显著;更换含磷液培养12、18、24和30h,均可见磷含量达3mmol/L时OC数量均极显著少于对照组(P<0.01),磷浓度相同组,OC数量随着培养时间的延长而减少。添加磷培养液能够抑制体外诱导培养OC的生成及骨吸收活性,抑制体外培养成熟OC的生存。

少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)表面聚合物的提取及生化性质研究

为了解捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食器表面聚合物的生化性质与作用,用5mol·L-1LiCl的表面聚合物提取液提取位于捕食器表面的这类物质,进而测定其中蛋白质的含量与酶的活性,并详细研究了温度、pH、化学试剂和蛋白酶抑制剂对其性质的影响。结果表明:2种不同来源的表面聚合物[表面聚合物(T+)与表面聚合物(T-)]最适温度均为65℃,前者最适pH为7.0,后者最适pH范围为6.5～7.5,且前者大相对分子质量蛋白质的浓度相对后者要高;同时还首次在含捕食器菌丝提取到的表面聚合物中检测到了蛋白酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性。通过研究初步了解了存在于捕食器表面并参与捕食过程的蛋白质类物质的相关化学性质,间接证实了上述物质可能在捕食过程中起关键作用,为今后深入开展对捕食线虫性真菌作用机理方面的研究提供了非常有价值的资料。

重组人生长激素、雌激素联合应用对去势大鼠剩余牙槽骨吸收的影响

目的观察重组人生长激素(r-HGH)、雌激素(estrone,E2)及两者联合应用对抗酒石酸酸性酶(TRAP)的活性及剩余牙槽骨骨形态计量学指标的影响,以明确两药单用及联合应用延缓骨质疏松(OP)所致的剩余牙槽骨吸收及其机制。方法通过去除SD大鼠双侧卵巢,拔除单侧上颌磨牙,建立去势大鼠剩余牙槽骨动物模型,建模成功后分为模型组和治疗组,治疗组分别给予r-HGH、E2单用及联合治疗。药物治疗4周及8周后,检测各组血清TRAP含量及形态计量学指标的改变。结果①E2治疗组(ERT)、联合治疗组(Er-HGHT)TRAP含量低于模型组(P<0.05),差异有统计学意义;ERT、Er-HGHT两组TRAP含量基本相同,但都与r-HGH治疗组(r-HGHT)有统计学差异(P<0.05)。②去势可使大鼠剩余牙槽骨的骨小梁面积比减少,宽度减小,髓腔扩大,加速剩余牙槽骨的吸收。r-HGH、E2单用及两者联合应用4周及8周后可提高去势大鼠剩余牙槽骨的骨小梁宽度、骨小梁面积视野百分比,降低骨小梁间隙宽度。结论r-HGH、E2单用及两者联合应用在一定程度上延缓骨质疏松大鼠剩余牙槽骨的快速吸收。

复合振动仪治疗骨质疏松对骨代谢影响6个月临床观察

目的观察复合振动仪治疗骨质疏松(osteoporosis,OP)对骨代谢的影响。方法70例骨质疏松志愿者随机分成复合振动组(whole body compound vibration training group)35例和对照组(control group)35例,复合振动组采用自行研制的复合振动仪进行全身振动治疗,振动频率45～55Hz,振动强度0.5～0.8g,30min/次,1次/隔天,连续6个月,对照组不进行任何干预,于试验第0、1、3、6个月分别检测复合振动组和对照组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistance acid phosphatase,TRAP)、钙磷乘积(calcium-phosphorus product,[Ca]×[P])的变化。结果第3、6个月,ALP、OC、TRAP、[Ca]×[P]的P分别为0.003、0.686;0.768、0.618;0.817、0.855;0.077、0.001。ALP早期呈上升的趋势,到第3个月形成一个峰值,然后呈下降趋势,[Ca]×[P]呈不断上升的趋势,OC、TRAP无明显变化趋势。结论复合振动可促进骨组织钙化、促进钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织;连续治疗可能使人体产生耐受,降低复合振动的治疗效应,采取短时、间断的加载方式可能更有利于促进复合振动的成骨效果。

复合振动仪治疗骨质疏松对骨代谢影响的临床观察

目的观察复合振动仪治疗骨质疏松（OP）对骨代谢的影响。方法70例OP志愿者随机分成复合振动组和对照组,每组35例。复合振动组采用自行研制的复合振动仪进行全身振动治疗,振动频率45-55Hz,振动强度0·5-0·8g,1次/隔天,30min/次,连续3个月,对照组不进行任何干预,于试验开始前3天、试验后第1、3个月分别检测各组碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、钙磷乘积（〔Ca〕×〔P〕）的变化。结果第3个月,复合振动组的ALP、OC、TRAP、〔Ca〕×〔P〕分别比试验前增加了44·6%、-9·4%、1·7%、7·5%,对照组的相应指标分别比试验前增加了22·8%、-13·3%、3·6%、4·7%,P值分别为0·108、0·788、0·606、0·171。结论复合振动仪治疗OP对骨代谢的影响无统计学意义,但骨代谢的绝对值有变化。

抗RANKL多克隆抗体抑制T细胞介导的破骨细胞形成的体外研究

目的:探讨抗核因子-КB受体活化因子配体(RANKL)多克隆抗体对T细胞介导的破骨细胞形成的影响。方法:制备兔抗鼠RANKL多克隆抗体,使用不同浓度的抗体(1、5及10μg/mL),观察小鼠重组RANKL诱导的破骨细胞形成,显微镜下计数抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性多核细胞数/孔;体外分离、纯化、扩增大鼠的颈T淋巴细胞,给予不同浓度的兔抗鼠RANKL特异性抗体进行干预,取其上清和T细胞,分别与RAW264.7细胞共同培养,TRAP法测定T细胞介导的破骨细胞形成,显微镜下计数TRAP(+)多核细胞数/孔;ELISA测定细胞上清中的可溶性RANKL浓度(sRANKL,pg/mL)。实验结果采用SPSS11.5软件包进行统计学分析。结果:兔抗鼠RANKL抗体既可减少RANKL诱导的TRAP(+)多核细胞数,也可减少T细胞介导的TRAP(+)多核细胞数,5μg/mL及10μg/mL抗体组差异显著(P<0.05),且呈浓度依赖性;上清中检出sRANKL的浓度与不加抗体对照组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:抗RANKL特异性抗体可通过减少sRANKL的表达水平,直接阻断RANKL与核因子-КB受体活化因子(RANK)的结合,降低T细胞介导的破骨样细胞吸收。

依替二膦酸锶对去势大鼠骨代谢的影响

目的观察新合成的抗骨质疏松化合物--依替二膦酸锶对骨代谢的影响。方法本研究以去势SD大鼠为基础,对依替二膦酸锶、依替二膦酸二钠和二氯化锶以及不同剂量依替二膦酸锶对大鼠血清骨钙素(BGP)和血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP-5b)的影响进行动态观察和比较。结果药物干预治疗后,依替二膦酸锶治疗组其血清TRAP-5b均逐渐下降,与去势对照组的相比表现出明显统计学差异;依替二膦酸锶150mg/kg·d治疗组,其血清BGP有缓慢上升的趋势,于12w末与去势对照组相比差异表现出显著的统计学意义。结论依替二膦酸锶50mg/kg·d、100mg/kg·d和150mg/kg·d治疗剂量均能有效抑制破骨细胞分泌TRAP-5b的能力。依替二膦酸锶150mg/kg·d治疗剂量可能有助于增强绝经期后骨质疏松大鼠成骨细胞分泌BGP的能力。

2-乙酰基毛蕊花糖苷抗破骨细胞形成及其作用机制

目的:研究2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨细胞分化的影响及潜在的分子机制。方法:采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及TRAP酶活力检测法评价0.1、1.0、10.0μmol·L^(-1)的2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨前体细胞向破骨细胞分化的影响;采用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK8)法检测2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨细胞分化的影响;采用F-actin环染色和骨陷窝形成实验检测2-乙酰基毛蕊花糖苷对破骨前体细胞诱导形成的破骨细胞功能的影响;采用蛋白免疫印迹法(WB)检测破骨细胞分化相关特异性蛋白TRAP、整合素β3(ITGβ3)和细胞原癌基因c-Fos的表达水平。结果:与模型组相比,2-乙酰基毛蕊花糖苷显著降低TRAP活性(P<0.05),且对破骨前体细胞活力未见显著影响,提示2-乙酰基毛蕊花糖苷显著抑制破骨细胞形成。F-actin环染色和骨陷窝形成实验也显示2-乙酰基毛蕊花糖苷显著抑制破骨细胞骨吸收功能;WB实验结果表明2-乙酰基毛蕊花糖苷可显著抑制破骨细胞分化特异性蛋白TRAP、ITGβ3和c-Fos等蛋白水平的表达。结论:2-乙酰基毛蕊花糖苷能抑制破骨细胞的形成,作用机制可能与其抑制TRAP、ITGβ3和c-Fos的表达有关。

过表达Klotho抑制小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化

目的探讨过表达Klotho(KL)对可溶性核因子κB受体激活蛋白配体(sRANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。方法实验分为过表达KL组(Ad-KL组)、空载体组(Ad-GFP组)与空白对照组。倒置荧光显微镜观察重组腺病毒转染RAW264.7细胞情况,实时荧光定量(qRT-PCR)和Western blot法检测KL的mRNA或蛋白水平;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测过表达KL对sRANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化的形态学影响;qRT-PCR和Western blot法检测各组破骨细胞成熟标志物TRAP、组织蛋白酶K(CTSK)的mRNA或蛋白水平。结果与Ad-GFP组和空白对照组比较,Ad-KL组细胞KL mRNA和蛋白水平显著升高;TRAP染色显示,Ad-KL组TRAP阳性细胞数量显少于Ad-GFP组和空白对照组,体积也更小;与Ad-GFP组和空白对照组比较,Ad-KL组TRAP和CTSK mRNA和蛋白水平也明显降低。结论过表达KL抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化。