体外循环期间Th1、Tc1/Th2Tc2细胞亚群与机体致炎/抗炎反应的关系

目的研究体外循环(CPB)中Th1、Tc1/Th2、Tc2细胞功能亚群的变化及与机体致炎/抗炎反应的关系。方法随机抽取二尖瓣瓣膜病、先天性动脉导管未闭患者各20例,设为试验组和对照组。于术前、CPB或手术开始20 min、停机前或手术结束时、术后4 h、术后24 h、术后72 h取血,分离T细胞,提取RNA,Northern blot法检测IFN-γ/IL-4mRNA表达;细胞内因子染色检测IFN-γ/IL-4蛋白表达。取血清,放射免疫检测致炎介质IL-6、抗炎介质IL-10水平。结果与术前相比,试验组CPB中IFN-γmRNA蛋白表达水平出现一过性下调,IL-4mRNA、蛋白表达水平出现一过性上调,IL-6、IL-10水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),分别于术后24 h或72 h恢复到术前水平(P>0.05);对照组各时相点IFN-γ/IL-4mRNA蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),术后72 h恢复到术前水平(P>0.05);各时相点IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CPB可致Th1、Tc1细胞数量减少、Th2、Tc2细胞数量增加,进而上调机体抗炎反应,抑制致炎反应,失控后可能成为CPB术后并发症的发病基础及影响ICU病死率的重要因素。

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞亚型的分析

T细胞亚型分化漂移可能与一些自身免疫病的发病机制有关。本研究旨在通过分析特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患儿外周血Th/Tc、Th1/Th2、Tc1/Tc2细胞的平衡状态,探讨T细胞亚群失衡在ITP发病机制中的作用。收集30例ITP患儿外周抗凝静脉血,分离纯化得T细胞,以PE标记的抗CRTH2单克隆抗体和Cy5标记的抗CD4、CD8单克隆抗体作双色流式细胞术检测,分析ITP患儿Th/Tc、Th1/Th2、Tc1/Tc2比例的变化。结果显示ITP患儿外周血T细胞与健康儿童相比,Th细胞百分率及Th/Tc比例明显下降(P(0.05),Tc细胞百分率无明显变化(P(0.05);Th1及Th2细胞百分率明显下降(P(0.05),Tc1及Tc2细胞百分率无明显变化(P(0.05),Th1/Th2及Tc1/Tc2比例明显升高(P(0.05)。结论ITP患儿外周血可能存在细胞免疫功能低下及T细胞亚群漂移,Th1及Tc1细胞比例升高,呈明显Th1类细胞优势,此结果说明T细亚群分化异常在ITP发病过程中起着重要作用。

CD86对CD8^+T细胞分化的影响

目的 探讨CD86 (B7 2 )对CD8+ T细胞分化的影响。方法 用限制性内切酶XhoⅠ酶切质粒pCDM8得到CD86基因 ,并将其插入pCDNA3,用BamHⅠ酶切鉴定。用脂质体法介导pCDNA3 CD86真核表达载体转染人肝癌细胞株HMC772 1,6 0 0 μg mLG4 18筛选 ,稳定且高表达CD86的抗性克隆用流式细胞仪进行鉴定。从健康志愿者血中分离外周血单个核细胞 (PB MC) ,使PBMC与靶细胞之比为 2 0∶1,共同培养 4 8h后 ,用流式细胞仪检测CD3+ T细胞内IL 4和IFN γ的表达率。结果 成功构建pCDNA3 CD86真核表达载体 ;CD86在HMC772 1 CD86细胞中的表达率为 30 .8% ,而在HMC772 1细胞中的表达率为 0 .98% ;健康志愿者CD3+ T细胞内IL 4和IFN γ的表达率分别为 1.92 %和 2 4 .4 % ;PBMC与靶细胞共同培养 4 8h后 ,无论是否用IFN α刺激 ,IL 4 IFN γ的阳性比值在HMC772 1 CD86转染组均大于 1,而在HMC772 1未转染组均小于 1。结论 在细胞培养中 ,CD86可诱导CD8+ T细胞活化 。

ICR小鼠感染日本血吸虫后Tc1和Tc2细胞的动态观察及其功能分析

目的观察日本血吸虫感染ICR小鼠后不同时期T淋巴细胞中杀伤性T细胞(Tc)亚型Tc1和Tc2比例的动态变化,并分析两者分别与Th1和Th2细胞比例变化的相关性。方法分别取日本血吸虫感染0、3、5、8、13周的小鼠脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测各个时期Tc1、Tc2和Th1、Th2细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例。结果与0周对照比较,感染3、5、8、13周小鼠T淋巴细胞中Tc1细胞比例显著增高(P均<0.01),感染5、8、13周小鼠T淋巴细胞中Tc2细胞比例显著增高(P均<0.01)。比较Tc1和Tc2细胞比例在相同时间点的增速发现,感染3周时Tc1细胞比例增高最显著,而感染5周时Tc2细胞比例的增高最显著。感染各个时间点CD3+T细胞中的Th1细胞比例与Tc1细胞比例平行增长,且两者呈正相关(r=0.978,P=0.004);CD3+T细胞中的Th2细胞比例与Tc2细胞比例平行增长,且两者呈正相关(r=0.974,P=0.005)。体外可溶性成虫抗原(SWA)刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc1细胞比例(P<0.01),而可溶性虫卵抗原(SEA)刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc2细胞比例(P<0.01)。结论日本血吸虫感染不同阶段,小鼠T淋巴细胞中的Tc1和Tc2细胞比例均显著升高,并分别与Th1和Th2细胞比例呈正相关。在感染3周时主要以Tc1细胞比例升高为主,而感染5周时主要以Tc2细胞比例升高为主。SWA可优势诱导Tc1细胞,而SEA可优势诱导Tc2细胞。

病毒感染相关性哮喘患者外周血Tc1/Tc2的临床研究

目的 探讨CD+ 8T淋巴细胞亚群 (Tc1、Tc2 )、及Tc1/Tc2与病毒感染相关性哮喘发病的关系。方法 建立三色流式细胞分析法对病毒感染相关性哮喘、过敏性哮喘及正常对照者 (对照组 )外周血中CD+ 8T淋巴细胞内分泌细胞因子 (INF γ、IL 4)进行检测。结果 病毒感染相关性哮喘患者和过敏性哮喘患者中产生IL 4的Tc2的比例均高于对照组 (P <0 .0 1) ,且病毒相关性哮喘的比例也高于过敏组 (P <0 .0 5 )。结论 急性发作的病毒感染相关性哮喘患者的外周血CD8+ T细胞以Tc2亚群为主 。

慢性支气管哮喘患者外周血CD8^(+) T细胞平衡及其与细胞因子的关系

目的探索CD8+CD28+杀伤性T细胞和CD8+CD28-抑制性T细胞及其所构成的平衡在慢性支气管哮喘发病机制中的作用。方法选取稳定期慢性支气管哮喘患者25例为实验组,同时选取慢性支气管炎及健康志愿者各25例作为对照组。采集外周血并采用多色流式细胞仪检测CD8+CD28+及CD8+CD28-T细胞的含量,并检测细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素4(IL-4)含量。结果与慢性支气管炎及健康志愿者比较,慢性支气管哮喘患者的CD8+CD28-抑制性T细胞含量明显降低(P<0.05),而CD8+CD28+杀伤性T细胞以及CD8+CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡含量明显升高(P<0.05)。慢性支气管哮喘患者CD8+CD28+杀伤性T细胞内IFN-γ明显降低,而CD8+CD28-抑制性T细胞内IL-4含量明显升高(P<0.05)。结论 CD8+CD28-T细胞含量降低导致免疫抑制不足可能是慢性支气管哮喘的重要机制,CD8+CD28+T细胞过度分泌IL-4诱导Tc2类免疫反应可能是慢性哮喘发作的关键环节。