TGF-β1/iNOS在Tca8113细胞系中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究TGF-β1和iNOS在舌鳞癌浸润转移中的作用提供实验依据。方法:应用SP免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中TGF-β1和iNOS的蛋白、mRNA表达情况进行检测。结果:SP免疫组化检测到TGF-β1/iNOS蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中呈强阳性表达,RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中TGF-β1/iNOS的mRNA条带明显。结论:TGF-β1/iNOS的蛋白和mRNA在舌鳞癌Tca8113细胞株中同时呈高水平表达。

乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达影响的研究

目的初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达水平的影响。方法将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养,分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组(5%CO2、95%O2)。采用RT-PCR技术检测不同培养条件下细胞HIF-1αmRNA的表达情况。结果HIF-1α的表达在乏氧12 h明显升高并达最高峰,24 h时又下降至常氧水平。每个时间段乏氧组HIF-1α的表达均高于其相应的常氧对照组。结论乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α基因的表达水平,肿瘤细胞通过上调HIF-1α基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境,有利于肿瘤的发生与发展。

Neuropilin-1对人舌鳞状细胞癌TCa8113增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响

目的探究神经菌毛素-1(Neuropilin-1,NRP-1)对舌癌TCa8113细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法以舌癌TCa8113细胞为研究对象,分别使用shRNA方法构建NRP-1敲低TCa8113细胞株和使用NRP-1单克隆抗体两种方法抑制NRP-1功能,通过对比抑制NRP-1功能后TCa8113细胞株与正常TCa8113细胞株,确定NRP-1对TCa8113细胞的增殖、迁移能力、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。结果成功构建NRP-1敲低TCa8113细胞株(NRP-1-knockdown)。NRP-1低表达细胞株和NRP-1单克隆处理抑制NRP-1功能后,细胞的增殖、迁移能力与正常TCa8113细胞株相比均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡及对化疗药物的敏感性增加(P<0.05)。结论NRP-1可促进舌癌TCa8113细胞增殖和细胞迁移能力,抑制细胞的凋亡,降低细胞的化疗敏感性。

姜黄素对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)Tca8113细胞增殖及凋亡的影响,并研究其作用机制。方法体外培养Tca8113细胞,不同浓度姜黄素(0、25、50、100μmol/L)处理24、48h;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002、激动剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)姜黄素、IGF-1联合姜黄素处理24、48h。分别采用MTT法和流失细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;采用Western blot和RT-PCR法检测细胞PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平。结果姜黄素可显著抑制OSCC Tca8113细胞的增殖并诱导凋亡,且具有一定的剂量和时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);同时,姜黄素下调Tca8113细胞中的PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。IGF-1处理促进了Tca8113细胞的增殖、降低了凋亡率,同时增加PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与IGF-1组相比,IGF-1联合姜黄素组可降低细胞的活性、提高细胞的凋亡率,降低PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。结论姜黄素可抑制OSCC Tca8113细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达有关。

炎症细胞因子诱导Tca8113细胞表达PD-L1的作用研究

目的通过研究炎症细胞因子对人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113中程序性死亡因子配体-1(programmed death 1ligand-1,PD-L1)的表达的影响,探讨肿瘤炎性微环境在肿瘤细胞免疫逃逸中的作用和机制。方法用流式细胞分析术(FCM)检测Tca8113在各种炎症细胞因子〔白介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)以及其他诱导条件〔牙龈卟啉单胞菌代谢产物(Pg-sup)及活化外周血单个核细胞的代谢产物(PHA-sup)〕处理下PD-L1的表达变化。结果 PHA-sup、Pg-sup液,IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ等炎症相关细胞因子均能诱导Tca8113中PD-L1的表达,与未做处理的Tca8113(对照组)比较差异有统计学意义(P<0.05),但IL-2诱导后PD-L1的表达与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。与单个炎症细胞因子诱导比较,炎症细胞因子组合诱导的PD-L1表达均有增高(P<0.05),炎症细胞因子在诱导PD-L1表达中相互之间存在协同效应,其中,IL-1β+IFN-γ、TNF-α+IFN-γ以及L-1β+IL-6+IFN-γ+TNF-α这3组的表达量高于其他各组(P<0.05)。结论肿瘤微环境炎症细胞因子促进肿瘤细胞表达PD-L1,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。

WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制

目的探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制。方法在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pc DNA3.0及空载体pc DNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用q PCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;q PCR和Western blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1(forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因m RNA和蛋白的表达。结果与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的m RNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P<0.001),形成克隆数明显减少(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的m RNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的m RNA和蛋白表达水平降低。结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关。

人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞来源的实验研究

目的观察人舌癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤新生血管内皮细胞的来源。方法通过皮下移植人舌癌Tca8113-M1细胞建立人舌癌裸鼠移植肿瘤模型，并于肿瘤生长至直径1cm时切除肿瘤，对移植瘤进行病理组织学观察，利用免疫组织化学方法检测移植瘤内新生血管内皮细胞的来源，抗体为鼠抗人单克隆抗体CD34和大鼠抗小鼠单克隆抗体CD34；并进行微血管密度（microvessel density，MVD）计数及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达检测。结果右腋窝皮下接种人舌癌Tca8113-M1细胞2周后，6只裸鼠的肿瘤直径都达到1cm以上，切片HE染色可见肿瘤组织病理形态为鳞状上皮细胞癌，MVD平均值为10．72±2．12，其中肿瘤新生血管内皮细胞大鼠抗小鼠CD34免疫组化结果是阳性，而鼠抗人CD34阴性。VEGF在6例移植瘤标本中均阳性表达，平均阳性率为（67±5．6）％。结论人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞主要来源于宿主裸鼠，并且可能与肿瘤细胞分泌的VFGE诱导有关。