霍乱弧菌TcpA蛋白的表达及其免疫活性分析

采用PCR方法从鱼源霍乱弧菌Y1株(Vibrio cholerae Y1)扩增毒素共调菌毛蛋白A(toxin-coregulated pilin A,TcpA)基因并克隆至pMD18-T载体。序列分析显示tcpA基因ORF长675 bp,编码224个氨基酸(GenBank登录号EU649677)。同源性比对发现,该基因与GenBank中登录的7个霍乱弧菌参考株相应基因序列的核苷酸同源性和氨基酸同源性均很高,分别为99.6%～99.7%和98.7%～99.1%,表明TcpA蛋白相当保守。将tcpA基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,并进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现分子量约为47.0 kD的重组TcpA融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot检测结果显示,重组TcpA融合蛋白可与鼠抗Vc Y1菌株菌毛蛋白抗血清发生特异性结合反应。用纯化的重组TcpA融合蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)制备抗血清,双相免疫扩散试验检测抗体效价达1∶16,且该抗血清能够明显抑制Vc Y1菌株对HEp-2细胞的黏附。草鱼免疫后第25天用Vc Y1菌株攻毒,结果相对免疫保护率达到73.33%。研究结果表明,重组TcpA蛋白仍保留着天然菌毛蛋白的免疫原性、免疫反应性和免疫保护性,重组TcpA蛋白可作为霍乱弧菌的候选诊断抗原和疫苗抗原。

乳腺癌基于蛋白表达的风险预后模型构建和6种关键蛋白的鉴定

目的通过开发蛋白质组学签名,优化对乳腺癌患者预后的评估。方法分别从TCPA和TCGA数据库下载879名乳腺癌患者样本的蛋白质表达谱和临床信息,进行单变量Cox回归、lasso回归和多变量Cox回归分析以鉴定预后蛋白质建立预后模型,然后对预后模型蛋白进行差异表达及生存分析,对模型风险评分进行预测性能分析,并对与预后模型蛋白相关的所有蛋白进行分析。结果通过TCPA数据库中的224个蛋白质,我们构建了包含CASPASE7CLIVEDD198、NFKBP65_pS536、PCADHERIN、P27、X4EBP1_pT70、EIF4G等6个蛋白的预后模型,根据风险评分中位值将患者分为两组,总生存率差异有统计学意义。单因素和多因素Cox回归分析表明,该风险评分是患者的独立预后因素(P<0.001)。此外,应用列线图及ROC对预测模型的预测性能进行了展示。蛋白质相互作用关系显示,蛋白质CASPASE7CLEAVEDD198、PCADHERIN、X4EBP1_pT70和EIF4G与其他蛋白质表现出较明显的相关性(P<0.001)。结论6个关键蛋白可能是乳腺癌治疗的新靶点,蛋白质风险模型可用于预测乳腺癌患者的预后。