TdT介导dUTP缺口末端标记技术检测肝细胞癌凋亡

应用ＴｄＴ介导ｄＵＴＰ末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测了３０例肝细胞凋亡病变，均见不同范围的阳性：单个癌细胞阳性１４例；点状阳性７例；小片状阳性６例；大片状阳性３例。偶见胞浆阳性。该技术快速、简便、灵敏、特异。

晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响.方法体外培养3～5 d的乳鼠心肌细胞,用含1%或10%胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24 h,应用流式细胞仪和原位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体/凋亡细胞核分布的影响.结果AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响;在正常培养液培养时,心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加,24、48 h与12h相比,凋亡小体/凋亡细胞核分别增加了0.55、1.23倍;AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度,并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加,50、100μg/ml AGEs组与对照组相比,凋亡小体/凋亡细胞核12、24、48 h分别增加了0.74和1.21、1.15和1.78、0.83和1.19倍.结论AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响,但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤.

孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响

目的探讨孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响。方法从妊娠母鼠第5d酒精灌胃直至小鼠出生;采用激活的半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)免疫组织化学和原位末端标记(TUNEL)法观察P0、P7和P14小鼠视皮质神经元的凋亡。结果酒精实验组妊娠时间延长,出现死胎和畸形(小头畸形、无脑儿和脊柱脊髓裂等)。酒精实验组Caspase-3阳性率和凋亡指数明显高于对照组(P<0.001),高剂量酒精组明显高于低剂量组(P<0.01)。随着酒精剂量的增加,子鼠视皮质神经元的凋亡明显增加。结论孕期酒精接触可导致子鼠视皮质神经元凋亡,且有剂量依赖性和长时程效应。

玉米CMS-S小孢子败育过程中的细胞程序性死亡

以玉米(Zea maysL.)S型细胞质雄性不育系(CMS-S)的1对近等基因系S-Mo17Rf3Rf3和S-Mo17rf3rf3为材料,采用TdT介导的dUTP DNA末端标记(TUNEL)、细胞色素C免疫原位杂交和DNA寡聚核小体片段电泳等方法,分别在细胞学水平和DNA水平上研究了玉米CMS-S小孢子败育的细胞程序性死亡(PCD)过程。结果表明,在花粉母细胞减数分裂后的四分体解离时期,不育花药的绒粘层细胞较可育花药提前裂解;在不育系S-Mo17rf3rf3花药和花粉S-rf3中均明显出现PCD过程的DNA片段化以及线粒体细胞色素C外渗的现象,证明玉米CMS-S的花粉败育与花药绒粘层细胞的提前凋亡和小孢子细胞的程序性死亡有关。

口腔扁平苔藓上皮细胞凋亡状况的分析和意义

目的 :探讨口腔扁平苔藓 (orallichenplanus ,OLP)的发病原因和机制。方法 :通过原位末端转移酶标记法 ,观察分析 40例OLP上皮细胞凋亡状况。结果 :OLP组上皮凋亡细胞数量显著低于对照组 ;在不同病损和性别之间 ,上皮细胞凋亡阳性指数有显著性差异 ;细胞凋亡的数量与病变类型及年龄呈显著性负相关。结论 :上皮细胞凋亡功能受到抑制可能是OLP的发病原因 ,或在其发展进程中扮演重要角色 。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用

目的:研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用,探讨TFC治疗AA的可能机制。方法:SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC高、中、低剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;原位末端标记检测(TUNEL)法观察滑膜组织中滑膜细胞的凋亡改变;流式细胞仪检测体外培养滑膜细胞的凋亡变化。结果:AA大鼠滑膜细胞出现凋亡抑制,增殖过度的类瘤样细胞特征,TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TFC(168,336 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜细胞的凋亡率较模型组显著升高。结论:TFC可抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的机制之一。

大鼠梗阻性胆管炎细胞免疫功能降低及中药锦红片的影响

目的:探讨梗阻性胆管炎大鼠细胞免疫功能降低的发生机制及清热通下中药锦红片的影响.方法:♂SD大鼠24只建立急性梗阻性胆管炎模型,随机分为模型组(n=8)、锦红片治疗组(n=8)和单纯胆管梗阻组(n=8),检测血浆IL-2,CD_3^+,CD_4^+,CD_8^+,内毒素,胸腺指数,胸腺细胞凋亡指数及电镜下观察胸腺的超微结构及凋亡.结果:模型组IL-2,CD_3^+,CD_4^+和胸腺指数显著低于治疗组和单纯胆管梗阻组(IL-2:28.5±3.0 ng/L vs 33.9±3.6 ng/L,39.6±2.2 ng/L,P<0.05,P<0.01;CD_3^+:54.5%±5.5% vs 70.7%±4.8%,66.3%±7.1%,均P<0.01;CD_4^+:34.5%±8.3% vs 44.2%±3.3%,44.5%±4.2%,均P<0.01:胸腺指数:0.89±0.18 vs 1.10±0.13.1.12±0.24,均P<0.05),CD_8^+3组间没有统计学差异,血浆内毒素和凋亡指数明显高于治疗组和梗阻组(内毒素:0.85±0.14 Eu/mL vs 0.53±0.10 EU/mL,0.49±0.11 EU/mL,均P<0.01;凋亡指数:25.7±5.1 vs 15.8±5.5.9.0±3.1.P<0.05,P<0.01),模型组胸腺可见较多典型的凋亡细胞,结果显示经中药干预治疗后,免疫功能、内毒素血症和胸腺细胞凋亡有所改善,接近单纯胆管梗阻组水平.结论:梗阻性胆管炎大鼠存在免疫功能降低,胸腺细胞异常凋亡.锦红片对维持免疫机能的稳定有积极的意义.

细胞增殖与凋亡在牙齿发育中的作用

目的：阐明细胞增殖与凋亡在牙齿发生、发育过程中的机制，探讨牙齿发育的机理。方法：选用纯系ＳＤ大鼠建立牙齿发育模型，采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）及免疫组织化学增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）染色技术，观察分析纯系ＳＤ大鼠牙胚发育不同阶段细胞增殖及凋亡情况。结果：在牙齿发育的蕾状期、帽状期、钟状期增殖及凋亡的阳性细胞均出现在细胞增殖生长中心处。钟状晚期及牙体组织形成后，已分化的外釉上皮细胞、成釉细胞、成牙本质细胞中也可见，但以牙乳头及星网层细胞中多见。结论：牙齿发育过程中的细胞增殖与凋亡同时出现在生长中心部位，说明二者在牙齿发育中相互协调，共同控制牙齿的形态形成。

骨复活汤对激素性股骨头坏死细胞凋亡的影响

目的:观察激素性股骨头缺血性坏死(SANFH)骨标本及骨复活汤对SANFH细胞凋亡的影响。方法:采用臀部注射醋酸氢化泼尼松建立兔股骨头骨坏死模型,6周处死取材,采用TUNEL标记法,研究细胞凋亡情况。结果:激素性骨坏死标本上,存在大量凋亡的骨细胞及成骨细胞,模型组与对照组、骨复活汤组及仙灵骨葆组家兔股骨头骨细胞凋亡指数比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:家兔早期SANFH病程中,骨坏死是通过激素诱导骨细胞及成骨细胞的凋亡和坏死共同作用的结果,骨复活汤在改善家兔SANFH的骨细胞、成骨细胞凋亡及坏死方面有一定作用。

激光辅助制动对精子核DNA的影响

目的:研究激光辅助制动精子是否引起精子核DNA损伤。方法:23例行体外受精(IVF)的男性精液标本,上游法处理后用0.45ms脉冲激光照射精子尾部制动精子。采用末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)两种方法分别检测激光辅助制动处理前后阳性精子百分率。结果:TUNEL法检测激光辅助制动处理前后阳性精子的百分率分别为(1.32±0.61)%、(1.41±0.51)%,差异无显著性(P>0.05);SCGE法检测处理前后阳性精子百分率分别为(1.59±0.70)%、(1.83±0.68)%,差异亦无显著性(P>0.05)。结论:激光照射精子尾部辅助制动精子对精子核DNA无明显损伤。

弓形虫感染与生精细胞凋亡关系的研究

目的 探讨弓形虫感染与生精细胞凋亡的关系。方法 采用瑞-姬染色和末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸原位末端标记法(TUNEL)检测弓形虫感染小鼠精子悬液的凋亡生精细胞。结果 弓形虫感染组生精细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.05)。结论 弓形虫感染可能有促进生精细胞凋亡的作用。

尖锐湿疣组织中Survivin蛋白表达与角质形成细胞凋亡的相关性及意义

目的探讨Survivin蛋白在尖锐湿疣(CA)发生、发展中的作用。方法采用免疫组化和TUNEL技术检测56份CA组织(观察组)中Survivin蛋白表达和角质形成细胞凋亡指数,并与25份正常包皮组织(对照组)比较。结果观察组及对照组Survivin蛋白阳性率分别为64.29%(36/56)、4.00%(1/25),P<0.01;角质形成细胞凋亡指数分别为(9.73±3.51)%、(0.95±0.16)%,P<0.01;观察组Survivin蛋白表达阳性者及阴性者角质形成细胞凋亡指数分别为(6.16±2.58)%、(14.31±14)%,P<0.05。Survivin蛋白表达与凋亡指数呈负相关(r=-0.694,P<0.05)。结论 CA组织中存在Survivin蛋白过表达,可抑制角质形成细胞凋亡,促进CA的发生及发展。

肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究

目的 探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。 方法 用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ; 结果 肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ; 结论 bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ;

兔心肌缺血再灌注损伤的超微结构变化及凋亡检测

目的 探讨实验性心肌缺血再灌注损伤时心肌超微结构变化及心肌细胞凋亡的发生。方法 选家兔 6只 ,阻断左冠状动脉的左室支建立心肌缺血模型 ,达到预定的缺血时间后 ,使血管再通 ,建立心肌的缺血再灌注模型。采用透射电镜、原位末端探针标记 (TUNEL)对不同损伤区心肌细胞的损伤情况进行研究。结果 电镜观察显示缺血再灌注损伤中心区呈现明显的心肌细胞凋亡征象 ,在缺血再灌注损伤交界区可见心肌细胞凋亡的早期征象 ,TUNEL检测结果显示缺血再灌注损伤中心区出现较多的凋亡阳性细胞 ,而损伤交界区出现较少的凋亡阳性细胞。结论 心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的重要特征 。

早期心肌缺血心肌细胞凋亡的实验研究

探讨早期心肌缺血心肌细胞凋亡的意义。采用DNA缺口末端标记法 (TUNEL)对大鼠实验性心肌缺血早期 (6h内 )不同时间缺血损伤区心肌细胞凋亡的情况进行观察。结果 :缺血 1h在缺血区域发现少数散在的凋亡阳性细胞 ,3h达高峰 ,随后下降。正常区域未发现凋亡细胞。缺血边缘区域也在缺血 1h局部开始出现心肌细胞凋亡 ,并随缺血时间延长心肌细胞凋亡指数增加 ,缺血 5h达高峰。表明凋亡是早期缺血性心肌细胞损伤的主要方式 ,心肌凋亡检测可望为早期心肌梗死的死后诊断提供一个灵敏客观的新方法。

四氯化碳对大鼠海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75表达的影响

目的研究四氯化碳(CCl4)对大鼠脑海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75的表达和凋亡的影响。方法将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和CCl4组。对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组分别在每周一或/和周四背部皮下注射60%CCl4-橄榄油溶液(0.3ml/100g)1次(1d组)2、次(1周组)和4次(2周组),实验结束时处死大鼠。取脑后沿正中矢状面切开,右侧半脑石蜡切片,行Nissl染色,观察海马CA1区神经元的形态学改变;行p75、Bax免疫组织化学染色和Western blotting分析,检测海马CA1区神经元p75、Bax的表达,行原位缺口末端标记法(TUNEL)观察海马CA1区神经元的凋亡。结果Nissl染色显示对照组CA1区神经元染色较深,细胞数目较多,排列整齐,神经元内可见大量尼氏体;CCl4组CA1区神经元排列较对照组紊乱,部分锥体细胞体积缩小,核固缩,呈三角形,胞浆内尼氏体数目减少或消失。对照组海马CA1区可见少量表达p75和Bax的阳性细胞;CCl4组海马CA1区表达p75和Bax的阳性细胞数较对照组明显增多,以1周CCl4组增多最为明显;Western blotting结果与免疫组织化学染色结果一致。对照组海马CA1区未见TUNEL阳性细胞;CCl4组海马CA1区可见大量细胞核呈棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,以1周CCl4组的阳性细胞数最多。结论注射CCl4后,大鼠脑海马CA1区p75的表达明显增强,Bax的表达也相应增强,凋亡的神经元明显增多。

胎盘滋养层细胞的感染和凋亡与HBV的宫内传播机制

目的:通过HBV感染体外培养的人绒毛膜滋养层细胞,探讨HBV宫内感染发生的机制.方法:对人早孕绒毛膜滋养层细胞进行原代培养和对人滋养层细胞系JEG-3进行传代培养,将HBV感染血清与原代及传代培养细胞共同孵育8-48h,倒置显微镜观察细胞形态及细胞间连接,细胞免疫荧光和免疫组织化学染色方法检测滋养层细胞中HBsAg和HBcAg的表达,荧光定量PCR方法检测被感染的滋养层细胞中的HBV DNA,TUNEL方法检测滋养层细胞的凋亡.结果:与HBV阳性血清共同孵育对滋养层细胞的形态和细胞间连接无明显影响;细胞免疫荧光和免疫组织化学染色结果显示,滋养层细胞与HBV感染血清共同孵育(8,24,48h)后,滋养层细胞可以出现HBsAg和HBcAg的阳性表达,24 h时HBsAg阳性细胞数量最多(8h:18.0%±3.67%;24h:30.6%±2.88%;48 h:24.8%±4.21%);荧光定量PCR方法检测到被感染的滋养层细胞中HBV DNA的存在;TUNEL结果显示,与HBV感染血清共同孵育可导致滋养层凋亡细胞数量逐渐增加(24h:18.6%±3.05%;48h:26.8%±2.86%:P<0.01).结论:滋养层细胞的感染可能是HBV通过胎盘屏障的途径之一;HBV感染可以诱导滋养层细胞产生凋亡,这可能是胎盘屏障阻止HBV宫内感染的一种保护性机制.

^(125)I放射性粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤的有效性研究

目的探讨125I放射性粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤的疗效及其作用机制。方法人胰腺癌SW1990细胞株接种于BABL/c裸鼠右下肢旁腹股沟区偏背侧皮下,成瘤后取瘤块接种,6周后成瘤8～10mm。共16只成瘤大小合适的裸鼠用于实验,分别植入125I粒子(8只)和空载粒子(8只)。粒子植入后,每4天测量肿瘤的长径和短径并称裸鼠体重,裸鼠处死后称量瘤体重。瘤体标本行组织病理学检查、末端脱氧核苷酸转移酶-生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞及免疫组化染色检测增殖细胞核抗原。结果 125I粒子治疗组肿瘤体积增长缓慢,而对照组肿瘤体积增长迅速。实验组和对照组瘤体重分别约(2.68±0.70)g和(4.68±1.45)g,两者的差异有统计学意义(P=0.021);抑瘤率约42.66%。粒子植入前、后实验组和对照组间裸鼠体重对比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组肿瘤细胞坏死明显,而对照组肿瘤细胞无明显或仅有少许坏死。TUENL法检查发现实验组和对照组的凋亡指数分别为(23.2±1.9)%和(8.1±1.5)%,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化染色发现:实验组及对照组增殖细胞核抗原(PCNA)阳性染色指数分别为(49.8±1.8)%和(82.2±2.4)%,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠心、肝、肺、肾及脾脏等组织无明显放射性炎症表现。结论 125I粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤是有效的,其作用机制包括:直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡及降低细胞增殖,并且125I粒子植入瘤体内对周围脏器是安全的。

程序性细胞死亡在小鼠腭突发育及腭裂形成中的意义

目的:明确程序性细胞死亡在腭裂形成中的作用。进一步探讨调控程序性细胞死亡的相关基因在腭裂形成中的变化及分子生物学机制。方法:将16只妊娠10d(GD10)的C57BL/6N系小鼠随机分为实验组和对照组。实验组管饲维甲酸80mg/kg,对照组管饲等体积植物油。分别于GD1314(妊娠第13天第14小时,下同),GD1322,GD148,GD1414,GD1422,GD158,GD1522,GD168d处死孕鼠取胚鼠。胚鼠头部切片做原位末端转移酶标记(TUNEL)染色。结果:在腭突垂直生长期及定向移动期,两组腭间质细胞发生程序性死亡的数量有明显的差异(P<0.05)。结论:经外源性维甲酸作用后的小鼠腭突间质细胞发生大量程序性死亡,腭突体积发育瘦小,未能在中线相互融合而导致腭裂。

凋亡阳性率及凋亡相关基因bcl-2、bax在宫颈癌放疗前后表达的意义

目的 观察 30例宫颈癌患者放疗前后的凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达的变化 ,以探讨放射治疗肿瘤的机理。方法 采用免疫组织化学方法和脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术TUNNEL标记法对 30例Ⅰ -Ⅲ期宫颈鳞癌患者的放疗前后凋亡阳性率及bcl 2、bax蛋白表达水平进行检测。结果 30例患者凋亡阳性率放疗前后的表达分别为 76 .7%和 10 0 % ,放疗后显著增高 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 73.3%和 4 6 .7% ,放疗后显著降低 (P <0 .0 5 ) ;bax蛋白在放疗前后的表达阳性率分别为 86 %和 10 0 % ,放疗后显著增加 (P <0 .0 5 )。结论 放疗的过程就是放射线诱导细胞调亡的过程 ,放射线通过抑制bcl 2蛋白的表达。