基于网络药理学、分子对接和实验验证研究续断散加当归、骨碎补调控PI3K/AKT信号通路治疗激素性股骨头坏死的潜在机制

目的基于网络药理学、分子对接技术,结合动物实验验证探究续断散加当归、骨碎补(Teasel Root Sanjia Angelica Sinensis and Drynaria Rhizome,TASDR)对激素性股骨头坏死的治疗作用,并初步探讨其潜在作用机制。方法采用TCMSP数据库检索TASDR中各味中药的化学成分和中药靶点,利用GeneCards数据库筛选激素性股骨头坏死的作用靶点,通过String平台构建核心靶点基因的蛋白质PPI(蛋白质互相作用)网络,通过Omic-Share Tools进行GO、KEGG分析。使用AutoDock 1.5.6软件对所得靶点以及姜黄素进行分子对接验证。动物实验选取24只新西兰大白兔,分为空白组,模型组及高、低剂量药物干预组,从中选取18只建立醋酸泼尼松龙诱导的激素性股骨头坏死模型,各组采取相应的药物干预,采用HE染色、免疫组化、Western blot检测,比较TASDR在治疗激素性股骨头坏死过程中对PI3K/AKT信号通路中某些关键蛋白表达水平的影响。结果经过筛选后TASDR治疗激素性股骨头坏死潜在核心靶点38个,靶点包括TNF、IL-6、VEGFA等,此外TASDR作用靶点中包括AKT蛋白家族-AKT1。TASDR通过肿瘤信号通路、VEGF信号通路等通路,并涉及酶结合、受体结合等分子功能,参与程序性细胞凋亡、程序性细胞凋亡负调控等生物过程来调控成骨分化。分子对接显示TASDR与TNF、VEGF、AKT1等靶点基因的结合活性良好。动物实验结果表明:在模型组中,PI3K、AKT等蛋白呈现高表达,而下游蛋白FOXO1及VEGF表达量减少,经TASDR干预后PI3K及AKT等蛋白表达量下降,FOXO1及VEGF等蛋白表达升高。结论TASDR有着靶点、通路多元化的优势,可在一定程度上调控TNF、IL-6、VEGF、AKT1等靶点基因的表达,动物实验表明PI3K/AKT信号通路过度激活时,TASDR可一定程度上下调上游蛋白AKT及PI3K的表达量,且使得下游基因FOXO1及VEGF的表达量增加进而在激素性股骨头坏死的治疗中发挥作用。

寿胎丸对CHL细胞株染色体畸变影响的研究

目的探讨寿胎丸对CHL细胞株染色体畸变的影响,对其遗传安全性进行研究。方法采用CHL细胞培养技术,设寿胎丸不同剂量组,并对CHL细胞株进行体外染毒,观察寿胎丸致CHL细胞株染色体数目及结构变化。结果收集24 h及48 h细胞,在5 000、2 500、1 250μg/mL不同测试剂量浓度下,并在+S9与-S9两种测试条件下进行染色体畸变分析,各剂量组、阴性对照染色体畸变率均在正常范围。结论寿胎丸在本试验所确定的5 000μg/mL测试剂量浓度以下,初步认为无诱发CHL染色体畸变作用。

寿胎丸对TA97、TA98、TA100、TA102菌株基因回变菌落的影响

目的探讨寿胎丸对TA97、TA98、TA100、TA102菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行研究。方法采用直接平皿掺入技术,设寿胎丸不同剂量组,并对TA97、TA98、TA100、TA102系列菌株进行体外染毒,观察其回变菌落增长状况。结果在0.8至200.0 mg/皿的不同测试浓度,+S9与-S9两种测试系统条件下,其作用的4种测试菌株的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,回变菌落背景正常,未显示其有抑菌作用,且无剂量-反应关系。结论寿胎丸药液在本试验所确定的200.0 mg/皿剂量范围内,初步认为对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性。

寿胎丸对KM小鼠PCE/NCE比值及MNPCE率的影响

目的探讨寿胎丸对KM小鼠骨髓细胞微核率的影响,研究其遗传安全性。方法采用不同时间点、不同剂量对KM小鼠进行体内骨髓细胞染毒,观察其致小鼠骨髓细胞染色体完整性受损及染色体分离异常等。结果采用不同时间点取样,其骨髓细胞微核率与阴性对照相比无明显增加(P>0.05),说明在时效关系上,不同时间点给药对小鼠骨髓细胞微核率无明显影响。采用不同剂量进一步染毒,其骨髓细胞微核率分别与阴性对照组相比也无明显增加(P>0.05),说明在量效关系上,无明显诱发小鼠骨髓细胞微核率增加作用。阴性对照组和高剂量组嗜多染红细胞与成熟红细胞比值未见明显降低,表明该药对小鼠骨髓细胞也无明显毒性。结论寿胎丸药液在本试验所确定的100 g/kg剂量范围以下,无明显致小鼠骨髓细胞染色体完整性受损及染色体分离异常。

桑生除痹合剂对兔膝骨性关节炎组织形态学和血液流变学的影响

目的观察桑生除痹合剂对膝骨性关节炎家兔组织形态学和血液流变学的影响。方法将健康6月龄新西兰大白兔36只,随机分为正常组,模型组,壮骨关节丸组,桑生除痹合剂高、中、低剂量组。每组6只,按照Hulth方法造模,分别灌服高、中、低剂量桑生除痹合剂,壮骨关节丸组灌服壮骨关节丸。12周后,测定血液流变学指标再处死动物,取股骨内侧髁关节负重区软骨及膝关节滑膜标本行光镜观察。结果关节软骨及滑膜标本光镜下呈显著退变表现;壮骨关节丸组和桑生除痹合剂高、中、低剂量组全血黏度、全血还原黏度、血浆黏度及红细胞聚集指数与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论从关节软骨及滑膜的光镜观察可以判断,兔膝骨性关节炎模型建立成功;桑生除痹合剂能明显改善血液流变学状态,改善局部血液循环,延缓软骨退化。

川续断的研究现状

从化学成分、质量辨别、染色体研究、药理作用及临床应用5方面综述了川续断的研究现状,为进一步研究和开发川续断提供参考。

不同灭菌法对续断中川续断皂苷Ⅵ含量的影响

目的考察在保证灭菌效率的前提下,不同灭菌法对续断中川续断皂苷Ⅵ含量的影响。方法分别采用不同方法灭菌后采用高效液相色谱法测定川续断皂苷Ⅵ灭菌前后的含量。结果水洗灭菌后川续断皂苷Ⅵ含量下降最多,为8.2%,而化学灭菌为4.6%、热灭菌为3.8%、辐射灭菌为2.1%。结论辐照灭菌最适合续断灭菌。

火焰原子吸收光谱法分析中草药续断中铜、铁、镉和锌的形态

对中草药续断中铜、铁、镉和锌4种微量元素存在的形态及含量进行了研究。文中叙述了续断样品中元素的各种形态(可溶态、悬浮态、无机态、有机态)的提取方法和试液的制备方法,采用火焰原子吸收光谱法测定了各试液中4种微量元素的含量。由4种元素在各种形态中的含量及分布状态可知:4种元素主要以可溶态存在,且可溶态中都以无机态为主。

续断对血管性痴呆模型大鼠认知功能的影响

目的探讨续断对血管性痴呆模型大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、续断低剂量组和续断高剂量组,每组12只。除假手术组外,其余组均采用双侧颈总动脉永久结扎法制备血管性痴呆模型。大鼠清醒后,续断低、高剂量组分别给予续断水煎剂2 g/(kg·d)和8 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等容量0.9%Na Cl溶液灌胃,均1次/d,持续4周。灌胃结束后,采用Morris水迷宫测定各组大鼠的学习记忆功能;黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。结果与假手术组相比,模型组大鼠游泳总距离明显延长(P<0.05),目标象限游泳总距离明显缩短(P<0.05),穿过站台总数明显减少(P<0.05);大鼠前额叶皮质MDA含量明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与模型组比较,续断低、高剂量组大鼠游泳总距离明显缩短(P均<0.05),目标象限游泳总距离明显延长(P均<0.05),穿过站台总数明显增多(P均<0.05);大鼠前额叶皮质MDA含量明显降低(P均<0.05),SOD活性明显升高(P均<0.05)。与续断低剂量组比较,续断高剂量组各指标改善情况更明显(P均<0.05)。结论续断可能是通过对抗或减少血管性痴呆大鼠体内氧自由基来发挥其对认知功能障碍的改善作用。

单味中药保胎的研究现状

中药保胎历史悠久,在中医学中占有极其重要的地位,但关于中药保胎的作用机制的现代研究较少。笔者认为,运用合适的动物模型,结合体外细胞培养体系,提取分离方药有效成分或部位,运用分子生物学、免疫组化等技术,从滋养细胞侵入、胎盘化血管重铸过程。

强腰壮骨膏的薄层鉴别

目的:建立强腰壮骨膏的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法(TLC法)对处方中的续断、三七进行定性鉴别。结果:在TLC图谱中可检出续断、三七的特征斑点。结论:所建立的方法准确快速,可作为该制剂质量控制的依据。

基于网络药理学研究“杜仲-续断”药对治疗膝关节炎的作用机制

目的基于网络药理学方法探讨杜仲-续断药对治疗膝关节炎的药效物质基础与潜在的分子作用机制。方法通过TCMSP数据库挖掘杜仲、续断的主要化学成分,结合SwissTargetPrediction平台筛选出药物活性成分并通过Uniprot数据库进行靶点预测;通过GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD数据库检索膝关节炎主要作用靶点,利用String平台进行蛋白质交互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,制作PPI网络图;再根据David数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,并通过Cytoscape3.8.0软件构建“靶点-通路”网络图。结果杜仲-续断配对调治膝关节炎的核心活性成分为β-谷甾醇、槲皮素等,重要靶点有丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase,MAPK)抗体、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等。杜仲-续断配对治疗膝关节炎的生物学通路主要作用于TNF信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路、MAPK信号通路等。结论杜仲-续断配对治疗膝关节炎具有多成分、多靶点、多通路的作用特点。

基于网络药理学探讨桑寄生-续断药治疗多囊卵巢综合征作用机制

目的:运用网络药理学方法探讨药对桑寄生-续断治疗多囊卵巢综合征(PCOS)潜在作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库平台(TCMSP)检索桑寄生、续断的活性成分并预测其所有靶点,通过uniprot数据库进行基因的标准化处理;在OMIM和Genecards数据库获取PCOS疾病相关靶点;将药物与疾病的靶点合并取交集以Venn图展示。利用Cytoscape3.7.2软件构建“药物-成分-疾病-靶点”网络图,运用STRING数据库构建蛋白互作PPI网络图,并运用Cytoscape3.7.2软件构建“药物-疾病”核心靶点网络图。利用DAVIDA数据库对共有靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果:通过筛选得到桑寄生-续断药物活性成分共10个,预测得到其靶点105个,PCOS靶点2164个,Venn图得到药物-疾病靶点77个,其中VEGFA、IL6、TP53、PTGS2、MAPK1、JUN、TNF、IL1B、EGF、EGFR、CCL2等靶点在桑寄生-续断治疗PCOS中发挥了关键作用。GO和KEGG富集分析得到126条生物条目和17条信号通路,其中GO生物条目涉及一氧化氮生物合成过程的正调节、细胞增殖的正调控、细胞外空间、酶结合、类固醇结合、类固醇激素受体活性等生物过程,KEGG通路富集分析发现靶基因主要富集在雌激素信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路、癌症、PI3K-Akt信号通路、癌症信号通路等信号通路中。结论:桑寄生-续断治疗PCOS具有多成分、多靶点、多通路的特点,为作用机制研究提供一定理论依据。

中药杜仲炮制方法及与续断不同配伍的化学研究

目的分析并研究中药杜仲炮制方法及与续断不同配伍的化学变化,为杜仲复方配伍提供科学的参考依据。方法分别采取清炒法、砂炒法和烘烤法来炮制杜仲样品,对比分析3种炮制方法的结果,然后采用薄层色谱法(thin-layer chromatography,TLC)法、UV光谱法和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对烘烤法炮制前后杜仲化学成分的变化情况。结果经比较,烘焙法虽然需要的时间较长(107 min),但其断丝率和成品率分别为(97.89±0.52)%和(89.75±0.93)%,明显高于清炒法(32 min)的(86.15±0.33)%和(54.00±0.84)%(P<0.05),以及砂炒法(6 min)的(92.31±0.64)%和(64.73±0.71)%(P<0.05),且损失率为(9.64±0.98)%,显著低于其他2种方法的(45.65±0.73)%和(31.43±0.79)%(P<0.05)。经炮制,杜仲的木脂素类和环烯醚类等化学成分明显减少(P<0.05),但杜仲胶、微量元素、氨基酸和其他成分的变化并不显著。杜仲和续断的配伍比例会对生品配伍以及炮制品配伍中的绿原酸含量产生影响,2者关系密切。结论中药杜仲炮制配伍化学成分的变化和炮制与配伍的方法具有密切关联。

复方益肾利石颗粒提取工艺优化与颗粒成型性考察

目的 对复方益肾利石颗粒水提工艺进行优化及颗粒剂制备工艺的筛选。方法 采用正交试验法,以总黄酮总含量、川续断皂苷Ⅵ含量、柚皮苷含量、新橙皮苷含量及得膏率为评价指标,优化处方的水提取工艺;采用星点设计-效应面法,以成型率、休止角、吸湿率、溶化性等为评价指标,对颗粒的成型工艺进行筛选。结果 最优水提取工艺为:加8倍量水,浸泡30 min,煎煮提取1 h,提取3次,过滤,干燥制得干浸膏粉。以乳糖和麦芽糊精为稀释剂,加入30%乙醇溶液作为黏合剂制软材,干燥,整粒。制得的复方益肾利石颗粒在粒度、性状、溶化性、水分等方面均符合药典要求。结论 本复方益肾利石方水提工艺及颗粒剂制备工艺稳定可行。

牛膝-续断治疗股骨头坏死的作用机制

目的:采用网络药理学研究方法探究牛膝-续断药对治疗股骨头坏死的作用机制。方法:通过数据库搜索并根据生物利用度筛选牛膝-续断药对活性化学成分,预测靶点,与检索出的股骨头坏死致病基因取交集获得共同靶点。对共同靶点实现PPI分析,得出核心靶点,并进行GO及KEGG富集分析。分析“中药-靶点-疾病-通路”相互作用关系,拓扑分析得出核心成分。最后模拟分子对接,对亲和力加以验证。结果:牛膝-续断药对含27个活性成分,202个药物活性靶点,股骨头坏死含靶点2302个,二者有125个共同靶点。GO富集分析主要包括脂质代谢异常、细胞吞噬与凋亡等功能途径;KEGG通路分析主要包括脂质与动脉粥样硬化、L-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、缺氧诱导因子-1信号通路等。结论:牛膝-续断可通过拮抗炎症反应、减轻脂质代谢异常、抑制细胞凋亡、提高机体免疫力等方面,多成分、多靶点、多通路治疗股骨头坏死。通过干预动脉粥样硬化脂质与动脉粥样硬化,流体切应力与动脉粥样硬化通路,恢复血运供给,达到从瘀论治。

续断的临床应用及用量探究

搜集整理古现代医家临证经验,总结出续断具有以下特点:续断汤剂中临床用量范围为0.74~41.4 g,其中常用剂量在6~30 g,丸散剂临床用量范围为1.43~12 g。根据不同病证区分用量,如补肝肾、通经脉、止崩漏治疗便血、血分病、妇科病等,用量为0.74~41.4 g,丸散剂用量为1.43~12 g;补肝肾、强筋骨、祛风湿、续折伤,治疗类风湿性关节炎、慢性肾小球肾炎、关节病、骨折等,用量为6~30 g,丸散剂用量为1.85~8.57 g。根据不同病证,配伍相应中药,如治疗肝肾亏虚、崩漏便血,常用续断配伍熟地黄、菟丝子、干姜、当归、川芎等;治疗筋骨萎软、风湿痹痛,常用续断配伍桑寄生、牛膝、杜仲、狗脊、补骨脂、骨碎补、独活等。

骨刺胶囊的质量标准研究

目的建立和提高骨刺胶囊的质量标准。方法采用显微鉴别法对骨刺胶囊中的杜仲、牛膝、熟地和续断进行鉴别;采用薄层色谱法(TLC)对骨刺胶囊中的独活、续断、牛膝和当归药材进行定性鉴别。结果显微特征明显;建立了独活、续断、牛膝和当归药材的薄层鉴别法,TLC斑点清晰,重现性好,专属性强,阴性对照无干扰。结论显微鉴别方法操作简便、准确可靠,耗费少;TLC方法简便可行,结果准确可靠,重复性好,可作为骨刺胶囊的质量控制方法。

壮腰健步丸的薄层色谱鉴别

目的:建立壮腰健步丸的薄层色谱鉴别方法,为该制剂质量标准的制定提供依据。方法:薄层色谱法鉴别该制剂中的甘草、白芍、续断、锁阳。结果:供试品色谱中与对照品及对照药材色谱相应的位置,显相同颜色的斑点。结论:实验方法简单,专属性强,阴性对照无干扰,可作为该制剂的定性质量控制标准。

续断生品炮制工艺研究

目的:优选出川续断的最佳工艺。方法:以续断中的川续断皂苷Ⅵ为考察指标,对续断工艺中水洗量、水洗时间、浸润水量、浸润时间、干燥温度、切制长度等因素进行考察,采用正交试验优选出续断的最佳工艺。结果:优选出续断最佳工艺为:取8倍量水洗10 min,5倍水浸润2 h,切制成4 mm,在60℃干燥温度下烘干。结论:优选出的续断最佳工艺稳定、可行,为保证续断饮片的质量,确定了水洗量、水洗时间、浸润水量等工艺参数。