酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究

目的建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型(HHV 7)特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法应用HHV 7标准株G lasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组pp85抗原;对325份血清HHV 7抗体进行检测,建立HHV 7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Q iagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV 7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数(CV)<10%]较好;以Q iagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98.1%、94.1%和97.8%,IgM ELISA分别为84.6%、99.7%和99.1%;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低。结论自制HHV 7 IgG和IgMELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV 7感染的诊断及流行病学调查。

人疱疹病毒7型U14编码区原核表达载体的构建

目的 构建人疱疹病毒7型（HHV-7）开放读码框（ORF）U14的原核表达载体，并且进行原核表达。方法 PCR技术扩增HHV-7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533氨基酸），目的基因与原核表达载体pThioHis A分别双酶切后连接，1×TSS法转化宿主菌E．coli BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达。结果 基因序列分析表明目的基因序列与HHV-7标准毒株相应序列基本-致，SDS-PAGE电泳可观察到相对分子质量为3．57万融合蛋白的表达，Western印迹证实pp85蛋白成功表达。结论 HHV-7被膜蛋白pp85原核表达载体构建和表达成功，为进一步探讨该重组蛋白在HHV-7特异性抗体检测中的应用提供实验基础。

人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达及应用

目的 构建人疱疹病毒7型（HHV7）被膜蛋白pp85编码基因（ORF U14）的原核表达载体，并进行原核表达。方法 应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞，PCR技术扩增HHV7 ORF U14基因的主要抗原决定簇编码区（328～533AA），目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后，转化宿主菌E．coli BL21，IPTG诱导融合蛋白表达，经镍-螯合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得重组抗原。重组蛋白电泳后转至PVDF膜，与HHV7阳性血清进行免疫印迹反应。结果 DNA序列分析表明，目的基因序列与HHV7标准毒株Glasgow相应序列完全一致，SDS-PAGE可观察到相对分子质量（Mr）为35．7×10^3融合蛋白的表达，免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性。结论 HHV7重组抗原具有较好的抗原性，进一步完善后可用于HHV7抗体的检测。