检测人结肠癌组织端粒酶活性的TRAP方法研究

对检测人结肠癌组织端粒酶活性的端粒酶重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）进行了研究．当Ｍｇ２＋浓度为１８ｍｍｏｌ／Ｌ、退火温度为５５℃时，能得到可靠的检测结果．影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染．

TRAP结合液体闪烁计数法半定量检测端粒酶活性

本文介绍一种端粒酶检测方法，该方法是将 Ｔ Ｒ Ａ Ｐ法在 Ｐ Ｃ Ｒ 过程中引入３ Ｈｄ Ｃ Ｔ Ｐ，结合液闪计数ｃｐｍ 半定量分析端粒酶活性。应用该方法检测端粒酶阳性的 Ｃ Ｎ Ｅ２ 细胞和部分组织标本及 Ｒ Ｎａｓｅ Ａ 或加热预处理后的对照标本，并与 Ｔ Ｒ Ａ Ｐ 法相比较，结果显示 Ｃ Ｎ Ｅ２ 细胞端粒酶阳性，１０ 个 Ｃ Ｎ Ｅ２ 细胞中仍可检到端粒酶，组织样品的端粒酶与文献值基本一致；放射性活性计数（ｃｐｍ） 与 Ｃ Ｎ Ｅ２ 细胞抽提液中端粒酶活性具有良好的线性关系；用 Ｒ Ｎａｓｅ Ａ 或加热处理后标本为阴性，ｃｐｍ 值接近阴性对照；批内和批间变异度分别为１１ ．６８ ％ 和２０９９ ％ 。该方法不需使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ） 和放射自显影，简便快速，当天可观察结果，并具有灵敏度高、特异性和批内重复性好之特点。

端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义

目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性，用 Western blot印迹法检测 NSCLC组织 p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为： NSCLC 93.02％ (80/86)，癌旁非癌肺组织 9.33％ (7/75)，肺良性病变组织 27.27％ (3/11)， NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变，端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著； NSCLC p53异常为 51.42％（ 36／ 70）， p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义；端粒酶活性表达与 p53异常无显著关联（ P >0.05）；结论： NSCLC标记物中，端粒酶活性表达较 p53敏感， p53对 NSCLC分期分级有帮助，端粒酶活性表达与 p53异常在 NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。

端粒酶活性在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨端粒酶活性在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其作为NSCLC肿瘤标记物和治疗靶点的可能性。方法：采用端粒重复扩增法（TRAP）研究了74例NSCLC组织及周围非癌组织、10例肺良性病变组织端粒酶活性表达。结果：74例NSCLC组织69例（93．24％）有端粒酶活性表达，74例周围非癌组织有9例（12．16％）表达阳性，10例良性病变中2例（20．00％）表达阳性，而相应的病变旁正常组织无端粒酶活性表达，端粒酶活性表达率与肿瘤组织类型、分化程度、肿瘤大小、病理分期无明显相关性。结论：端粒酶活性较普遍存在于NSCLC中，有可能成为NSCLC诊断和判断疗效的标记物和治疗新靶点。

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA ,(humantelomeraseRNA ,hTR)的cDNA探针 ,分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法 (TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。 18例活检胃癌组织及 4 5例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为 10 0 % ,相应TRAP分析的阳性率分别为 88 89%、 86 6 7% ,低于RNA斑点杂交 (P <0 0 5 )。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA ,具有高度的敏感性和特异性 。

Bcl-2,p53表达及端粒酶活性三者在非小细胞肺癌发生中的相关性

目的 :研究Bcl 2 ,p5 3及端粒酶异常在非小细胞肺癌 (nonsmallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系 .方法 :用改良的端粒重复扩增法 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) .方法 :(TRAP PCR ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达 ,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl 2和 p5 3蛋白表达 .结果 :在 6 2例NSCLC中 ,Bcl 2及p5 3蛋白阳性表达率分别为4 5 .2 %和 5 3.2 % .无淋巴结转移者Bcl 2表达明显高于有淋巴结转移者 (5 9.4 %vs2 4 .0 % ,P <0 .0 5 ) ;Ⅱ +Ⅲ期Bcl 2表达阳性率为 2 0 % ,明显低于Ⅰ期 (P <0 .0 5 ) .p5 3表达与肿瘤的类型、大小及 pTNM分期显著相关 (P <0 .0 5 ) .Bcl 2与p5 3表达活性无明显相关性 (P >0 .0 5 ) .端粒酶活性阳性率为 89.6 % ,端粒酶活性与肿瘤大小 (P <0 .0 1 ) ;淋巴结有无转移 (P <0 .0 5 )显著相关 .不同pTNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) .端粒酶活性与Bcl 2表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,而端粒酶活性与p5 3蛋白表达有显著相关性 ,在p5 3阳性组织中端粒酶活性较高 (P <0 .0 1 ) .结论 :p5 3,Bcl 2及端粒酶异常参与了NSCLC的发生、发展 。

乳腺癌组织中端粒酶活性的研究

目的 细胞中端粒(telomere)的长度与细胞寿命的调控密切相关,端粒长度的维持需要端粒酶(telomerase)的激活,近年来的研究发现,端粒酶的激活与肿瘤的发生,发展关系密切。本文研究乳腺癌组织,癌旁组织,良性乳腺病变,正常乳腺组织中的端粒酶活性,探讨其作为乳腺癌肿瘤标志物的可能性。方法 采用端粒重复序列扩增法(telomeraic repeat amplification protocol,TRAP)来检测36例乳腺癌及其相应癌旁组织,12例良性乳腺病变,6例正常乳腺组织中的端粒酶活性。结果36例乳腺癌组织中,有33例端粒酶表达阳性,其阳性率为91.7％,而且与肿瘤的大小,淋巴结的状态,临床分期有相关性。36例癌旁组织中,有2例端粒酶表达阳性,阳性率为5.6％。12例良性乳腺病变中,仅有1例端粒酶表达阳性,阳性率为8.3％。6例正常乳腺组织端粒酶表达均为阴性。结论 乳腺癌组织中普遍存在端粒酶活性表达,端粒酶有可能成为诊断乳腺癌的肿瘤标志物。

Bcl-2及端粒酶在非小细胞肺癌组织中的表达

目的研究Bcl-2及端粒酶异常在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系。方法用改良的端粒重复扩增法(telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)方法(TRAP-PCR-ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达。结果在84例NSCLC中,Bcl-2蛋白阳性表达率为44.5%。无淋巴结转移者Bcl-2表达明显高于有淋巴结转移者(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期Bcl-2表达阳性率高于Ⅲ期(P<0.05)。端粒酶活性阳性率为86.7%,端粒酶活性与肿瘤大小、淋巴结有无转移显著相关(P<0.01和P<0.05))。此外,不同组织学分级、不同TNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性。端粒酶活性与Bcl-2表达无相关性(P>0.05)。结论对NSCLC组织中Bcl-2及端粒酶同时进行检测,对临床早期诊断及判断预后有重要意义。

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法将端粒重复序列扩增测定法（ＴＲＡＰ）与微孔板杂交 相结合建立了非放射性检测方法，对３例正常肝组织和４例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织 进行检测。结果肝癌组织具有比较高的端粒酶活性，而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性，肝癌凋亡组织端粒酶活性 显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强，可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。

口腔颌面部癌及癌旁组织端粒酶检测

[目的]研究口腔颌面部癌组织及相应癌旁组织中的端粒酶活性 ,探讨其作为口腔颌面部癌肿瘤标志物的可行性及其临床意义。[方法]用银染 TRAP法检测32例口腔颌面部癌组织及其相应的32例癌旁组织、4例混合瘤、4例乳头状瘤、2例造釉细胞瘤、5例正常口腔粘膜的端粒酶活性。[结果]32例口腔颌面部癌组织中 ,有30例端粒酶活性表达阳性 ,其阳性率为93.7%。32例癌旁组织中 ,有2例端粒酶表达阳性 ,其阳性率为6.3%。4例乳头状瘤、4例混合瘤、2例造釉细胞瘤、5例正常口腔粘膜端粒酶表达均为阴性。口腔颌面部癌组织端粒酶活性表达与该肿瘤的临床病理特征无明显相关性(P>0.05)。[结论]口腔颌面部癌组织中普遍存在端粒酶活性表达 ,而口腔良性肿瘤和正常口腔组织中端粒酶活性较少表达 ,端粒酶可作为诊断口腔颌面部癌的肿瘤标志物。癌旁组织端粒酶活化提示有少量肿瘤细胞 ,应随访以证实。

人卵巢肿瘤组织中端粒酶活性表达及其临床意义

目的 :探讨卵巢肿瘤组织中的端粒酶活性表达及其临床意义。方法 :采用TRAP ELISA法检测 2 1份卵巢肿瘤组织 (其中恶性 8份、良性 13份 )及 4份正常卵巢组织标本中的端粒酶活性。结果 :卵巢恶性肿瘤组织端粒酶活性表达阳性率为 87.5 0 % ,显著高于卵巢良性肿瘤组织的 7.69% ,两者相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;正常卵巢组织阳性率为 2 5 .0 0 % ,与卵巢良性肿瘤组织相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 1例化疗后复发的卵巢浆液性乳头状腺癌 ,其端粒酶活性呈弱阳性。结论

涎腺肿瘤细针吸取标本端粒酶活性检测及其临床意义

目的 :检测涎腺肿瘤细针吸取标本的端粒酶活性并探讨其在涎腺肿瘤诊断中的价值。方法 :采用细针穿刺技术穿刺手术切除新鲜的 6 5例涎腺肿块组织 ,取FNA标本涂片 ,苏木精 -曙红 (HE)染色 ,作细胞学检查 ;残留于注射器内细胞用PBS液冲洗离心后 ,取沉淀物用银染 -TRAP法检测其端粒酶活性 ;肿块组织作病理学检查。结果 :17例FNA标本涎腺肿块细胞学检查诊断为恶性肿瘤 ,其中 14例 (82 % )端粒酶活性检测为阳性。 13例细胞学检查为不典型或不能确诊 ,有 7例端粒酶活性检测为阳性 ,随后组织病理诊断为恶性肿瘤 ,而 6例端粒酶活性检测为阴性标本有 5例最后组织病理诊断为良性肿块。 35例细胞学诊断为良性或取材不满意的FNA标本 ,有 4例端粒酶活性检测阳性而病理学检查有 2例为恶性肿瘤。结论 :FNA标本端粒酶检测诊断效率 (89.2 % )优于细胞学检查 (6 6 .2 % ) (U =3.15 >2 .5 8,P <0 .0 1) ,端粒酶活性检测是对FNA细胞学检查存在假阴性的补充检查并可作为涎腺恶性肿瘤诊断指标 ,特别是细胞学检查不能确诊的恶性肿瘤FNA标本。

上皮性卵巢肿瘤端粒酶活性及其各亚单位基因表达的研究

目的:探讨端粒酶及其亚单位(hTERT、TP1、hTR)在卵巢癌发生和发展中的作用,研究端粒酶活性与各亚单位表达的相关性。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测66例卵巢上皮性肿瘤及10例正常卵巢组织端粒酶不同亚单位基因的表达情况,应用端粒重复序列扩增技术(telomeraserepeatamplificationprotocol,TRAP)检测其中45例卵巢上皮性肿瘤及9例正常卵巢组织端粒酶活性。结果:1)恶性、交界性卵巢肿瘤组织中端粒酶阳性检出率分别为83.33%(25/30)、71.43%(5/7),两组间无显著性差异(P>0.05),而良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢上皮中未检测到端粒酶活性,与前两组之间均有显著差异(P<0.001);2)RT-PCR定性检测发现hTR和TP1mRNA在检测的各组组织中均有表达,而hTERTmRNA主要在上皮性卵巢癌和交界性卵巢肿瘤中表达,二者间hTERTmRNA表达的差别无统计学意义(P>0.05),而与良性及正常组织hTERT表达有显著差异(P<0.001);3)端粒酶活性与hTERT亚单位表达明显相关(P<0.001),而与hTR和TP1亚单位表达无明显相关性(P>0.05)。结论:端粒酶与卵巢癌发生发展过程密切相关;hTERT表达与端粒酶活性密切相关,并可能参与端粒酶的活性调节,hTERT的表达有望成为上皮性卵巢癌的诊断指标。

端粒酶活性与口腔鳞状细胞癌的相关性

目的 :探讨端粒酶在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与口腔鳞状细胞癌发生发展的关系。方法 :采用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)方法检测 30例口腔鳞状细胞癌患者术后标本中的病变组织及其癌旁正常组织 ,并分析其与临床病理的相关性。结果 :30例口腔鳞状细胞癌组织中端粒酶阳性表达率为 73.3% (2 2 / 30 ) ,而 30例癌旁正常组织中无 1例表现出端粒酶阳性。T1～T2 期 2 1例中端粒酶阳性表达率为 6 1.9% (13/ 2 1) ;T3 ～T4期 9例均为端粒酶阳性表达 (10 0 % )。 30例口腔鳞状细胞癌样本中Ⅰ级17例 ,端粒酶阳性表达率为 5 8.8% (10 / 17) ;Ⅱ级 8例 ,端粒酶阳性表达率为 87.5 % (7/ 8) ;Ⅲ级 5例 ,均表达出端粒酶阳性 (10 0 % )。口腔鳞状细胞癌组织端粒酶活性的阳性率明显高于癌旁正常组织 (P <0 .0 5 ) ,且端粒酶活性与口腔鳞状细胞癌的临床分期及病理分级呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :端粒酶活性表达在口腔鳞状细胞癌发病机制中具有重要作用 ,同恶性肿瘤的整个病程有关 ,与其恶性程度、浸润能力有相关性 ,可作为判断预后有价值的指标之一。

涎腺肿瘤端粒酶的检测及其临床意义

目的 :研究涎腺肿瘤中的端粒酶活性表达 ,探讨其作为涎腺肿瘤标志物的可行性及其临床意义。方法 :用银染 TRAP法检测 2 8例涎腺癌组织及其相应的 2 8例癌旁组织、10例腮腺混合瘤、6例腮腺腺淋巴瘤、5例正常涎腺组织的端粒酶活性。结果 :2 8例涎腺癌组织中 ,有 2 5例端粒酶活性表达阳性 (89.3% )。 2 8例癌旁组织中 ,有 4例端粒酶表达阳性 (14 .3% )。 10例腮腺混合瘤 ,6例腮腺腺淋巴瘤 ,5例正常涎腺组织端粒酶表达均为阴性。涎腺癌组织端粒酶活性表达与该肿瘤的临床病理特征无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :端粒酶活性表达可作为诊断涎腺癌的肿瘤标志物 ;其癌旁组织端粒酶活性检测可作为肿瘤手术治疗后监测的指标之一。

探讨端粒酶及其相关组分在乳腺癌诊断中的意义

目的 探讨端粒酶活性及端粒酶相关组分 (hTERT)在乳腺癌诊断中的价值。方法 端粒重复扩增分析法检测 81例乳腺良恶性病变组织端粒酶活性 ;原位杂交法检测端粒酶逆转录酶基因hTERTmRNA的表达。结果 5 8例乳腺癌中 4 9例端粒酶阳性 (84 5 % ) ,端粒酶活性与临床病理参数无相关性 ;癌旁正常乳腺组织端粒酶阴性 ,7例乳腺增生症和 6例乳腺腺瘤中分别有 1例端粒酶阳性 ,与乳腺癌比差异非常显著 (P <0 .0 1)。原位杂交结果显示 ,hTERTmRNA阳性表达率为 6 7 2 % (39/ 5 8) ,与端粒酶活性表达呈一致性 (P <0 .0 5 )。结论 端粒酶活性检测和hTERTmRNA原位杂交检测在乳腺癌的诊断中具有重要参考价值 。

大肠癌及癌旁黏膜组织中端粒酶活性检测的临床意义

目的 研究端粒酶活性检测在大肠癌临床诊断和确定手术切除范围中的意义。方法 应用已建立的银染TRAP方法 ,检测 2 9例大肠癌组织及癌旁 (近端即食管端距癌组织 2cm、4cm、6cm、10cm ,远端即肛门端距癌组织 2cm、4cm、6cm )黏膜组织 ,共 8个标本的端粒酶活性。结果 大肠癌组织的端粒酶活性阳性率为 89.7% ( 2 6/2 9) ,其中近端 2cm癌旁黏膜组织的阳性率为 13.8% ( 4/2 9) ,远端 2cm癌旁黏膜组织的阳性率为 3.4% ( 1/2 9)。而近端 4cm、6cm、10cm ,远端 4cm、6cm癌旁黏膜组织端粒酶活性检测阳性率均为 0 ( 0 /2 9)。端粒酶活性与大肠癌的分化程度及肠系膜淋巴结转移无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 端粒酶活性既有可能成为大肠癌诊断的标志物 。

脑胶质瘤端粒酶活性表达的研究

目的 :探讨端粒酶在脑胶质瘤发生、发展中的作用 ,并研究端粒酶活性是否与其恶性程度相关。方法 :应用端粒重复序列扩增技术 (TRAP)对 4 8例胶质瘤标本和 8例正常脑组织的端粒酶活性进行检测。结果 :8例正常脑组织端粒酶活性均为阴性表达 ,4 8例胶质瘤标本中 2 3例为表达阳性 (4 7.92 % ) ,低度恶性组与高度恶性组胶质瘤之间端粒酶活性阳性率有明显差异 (P =0 .0 0 1)。结论 :端粒酶活性与胶质瘤恶性程度明显相关 。

喉癌中survivin mRNA与端粒酶活性的关系

目的通过测定23例喉癌患者喉癌组织的端粒酶活性和凋亡抑制因子survivin mRNA表达水平,探讨端粒酶活性和survivin mRNA表达水平这两个指标之间的关系。方法采用Taqm an技术建立荧光实时定量FQ-PCR方法检测喉鳞癌组织的survivin mRNA;应用TRAP-ELISA法测定喉癌组织的端粒酶活性。结果喉癌组织中survivin mRNA的表达水平与端粒酶活性具有相关性,呈正相关(r=0.591,P=0.003)。结论survivin可能是使端粒酶活性增高的细胞因子。

银染端粒重复扩增技术检测乳腺癌组织端粒酶活性的研究

目的 探讨应用银染端粒重复扩增技术 (TRAP)检测乳腺癌组织端粒酶活性。方法 用银染TRAP法对 36例乳腺癌组织和 2 4例乳腺良性病变组织进行端粒酶活性检测。结果 36例乳腺癌外科手术切除组织中 ,33例检测到端粒酶活性 (91.7% ) ,而其它良性乳腺病变组织无 1例阳性 ,两组有非常显者性差异 (P <0 .0 1)。结论 端粒酶激活在乳腺癌的发生中起着重要作用 。