Effect of Terminalia chebula Retz. extraction with water on Staphylococcus epidermidis activity and its biofilm formation

Background:Based on modern pharmacological studies,Terminalia chebula Retz.exhibits antimicrobial activity against a variety of bacteria.Previously,we found Terminalia chebula Retz.exhibited excellent antibacterial activity against Malassezia restricta.Methods:We determined the minimal inhibitory concentration(MIC)and minimum bactericidal concentration of Terminalia chebula Retz.extraction with water(TRW)against Staphylococcus epidermidis(including Staphylococcus epidermidis 1-15)using the microdilution method.Staphylococcus epidermidis 1(SE11),which was the most sensitive to TRW,was selected as the test bacterium for subsequent experiments.The time-kill curve of TRW on SE11 was generated using the viable count method.Further,an in vitro biofilm model of SE11 was constructed using the 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-((phenylamino)carbonyl)-2H-tetrazolium hydroxide test,semi-quantitative crystal violet experiment,and scanning electron microscopy.The effects of TRW on the total amount of biofilm formation,the number of viable biofilm bacteria,and biofilm microstructure of SE11 were also determined using a semi-quantitative crystal violet experiment,viable count method,and scanning electron microscopy.Finally,the electrical conductivity and soluble protein content of the SE11 suspensions were determined.Results:The average MIC of TRW against SE11 was 0.75±1.09 mg/mL.TRW(1/2MIC and 2MIC)and zinc pyrithione(1/2MIC and 2MIC)had no significant effect on total biofilm inhibition in the adhesion stage(P>0.05)and the aggregation stage(P>0.05).Further,TRW(1/2MIC and MIC)and zinc pyrithione(1/2MIC and MIC)had no significant effect on viable biofilm bacteria in the adhesion stage(P>0.05)and aggregation stage(P>0.05).TRW destroyed the integrity of the SE11 cell membrane,resulting in leakage of intracellular substances.Conclusion:TRW inhibits SE11 biofilm formation and is similar to zinc pyrithione in the adhesion and aggregation stages,which provides a theoretical basis for its application in the field of antimicrobial additives.

The changes of polyphenolic contents in two kinds of Terminalia chebula Retz.traditional Tibetian processing methods

Taking Terminalia chebula Retz. as the control product, the polyphenolic contents of the processed products in Tibetian, Rubia cordifolia L. processed Terminalia chebula Retz. and Euphorbia fischeriana Steud processed Terminalia chebula Retz. were analyzed by HPLC. Polyphenolic contents increased from 4.54% to 5.69% and 7.46%, respectively, which may lead to the change in their pharmacological effects.

Effects of different processing methods in Tibet on content of chebulinic acid in Terminalia chebula Retz.

To study the change of the content of chebulinic acid in Terminalia chebula Retz. by different processing methods in Tibet. We taking chebulinic acid as an indicator, the contents in Terminalia chebula Retz. and its processed products were analyzed by using HPLC. Also, the change rule was explored. Compared with Terminalia chebula Retz., the contents of chebulinic acid have decreased after processing, declining 50.18% for the Rubia cordifolia L. processed product, while 11.2% reduce for the Euphorbia fischeriana Steud processed product. After the specific preparation process in Tibet, the contents of chebulinic acid have reduced significantly, which may lead to different pharmacological effects.

Enhanced Antioxidant Capacities in vivo Caused by the Change in Key Constituent of Terminalia chebula Retz. Treated with Tibet Traditional Process

In order to investigate the chemical-biological relationship caused by the special processing technology,the constituent＇s content and antioxidant capacity in vivo of Euphorbia fischeriana Steud processing Terminalia chebula Retz. have been tested. Taking T. chebula Retz. as control,the content of gallic acid is analyzed with high performance liquid chromatography（HPLC） method. The results show that the increase of gallic acid concentration from 4.54% to 7.46% leads to enhancement of the antioxidant capacities in vivo of the E. fischeriana Steud processing T. chebula Retz. The significant antioxidant capacity in vivo（p〈0.05） of the processed product possesses is better than the unprocessed herb. Its superoxide dismutase（SOD）and malondia-ldehyde（MDA） contents in serum,the MDA content in liver can match the effects of vitamine E when administered at high dosage.

高效液相色谱法测定诃子中诃黎勒酸和诃子酸

建立高效液相色谱法测定诃子中诃黎勒酸、诃子酸含量的方法,对《中华人民共和国药典》2020年版一部中诃子含量测定项进行补充。采用Dikma Platisil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,柱温为35℃,以0.1%甲酸水溶液-乙腈-甲醇(体积比为78∶16∶6)作为流动相等度洗脱,流量为1 mL/min,进样体积为5μL,检测波长为280 nm。诃黎勒酸、诃子酸的质量分别在0.03203~1.025μg、0.03555~1.137μg范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.9996、0.9995,方法检出限分别为2.67、4.44 ng,定量限分别为8.00、11.85 ng。测定值的相对标准偏差分别为1.9%、1.8%(n=6),样品加标平均回收率分别为99.0%、99.2%。该方法可用于诃子药材的质量控制方法。

诃子制铁棒锤乙酸乙酯部位化学成分研究

目的:研究诃子制铁棒锤乙酸乙酯部位化学成分。方法:采用硅胶柱层析、MCI柱层析、Sephadex LH-20柱层析和半制备高效液相色谱等方法对诃子制铁棒锤进行系统分离研究,并应用现代波谱技术结合文献对所得化合物进行结构鉴定。结果:从中分离得到7个化合物,分别鉴定为3,5-Di-O-galloylshikimic acid(1)、3,4,8,9,10-Pentahydroxy-dibenzo[b,d]pyran-6-one(2)、3,4,5-Tri-O-galloylshikimic acid(3)、没食子酸(4)、没食子酸-5-羟甲基糠醛酯(5)、没食子酸甲酯(6)、鞣花酸(7)。结论:所得化合物可能是药效成分,旨在为诃子制铁棒锤药效物质基础研究提供了参考。

基于液质联用和模拟炮制的诃子汤制狼毒大戟减毒机制研究

目的基于液质联用(LC-MS)和模拟炮制初探诃子汤制狼毒大戟的减毒机制。方法采用LC-MS分析狼毒大戟诃子汤制前后和狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制后的化学成分变化;小鼠分别灌胃给予狼毒大戟生品乙醇提取物、狼毒大戟水制品乙醇提取物、诃子汤乙醇提取物、狼毒大戟诃子汤制品乙醇提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷提取物、狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制提取物,以粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平以及肠道病理损伤情况评价诃子汤制狼毒大戟和诃子汤模拟炮制狼毒大戟生品二氯甲烷部位的毒性变化。结果狼毒大戟中共鉴定出115种化合物,诃子汤中共鉴定出53种化合物。狼毒大戟经诃子汤炮制后有58种化合物的含量显著降低,12种化合物的含量显著升高。与空白对照组相比,狼毒大戟生品组及其水制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤明显。与狼毒大戟生品组相比,诃子汤组和狼毒大戟诃子汤制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著降低(P<0.01),肠道损伤得到修复。狼毒大戟生品二氯甲烷部位经诃子汤模拟炮制后,二萜类化合物和鞣质酚酸类化合物的离子强度变化率分别为-6.75%~8.09%和66.06%~100.00%。狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位二萜类化合物的离子强度变化率为-9.92%~54.72%,无鞣质酚酸类化合物。与空白对照组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位组和狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤严重。与狼毒大戟生品二氯甲烷部位组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平显著降低(P<0.01),肠道未见明显损伤。结论诃子汤制能缓和狼毒大戟肠道毒性,其减毒机制可能是狼毒大戟在炮制过程中引入的诃子汤中大量的鞣质酚酸类化合物在动物体内起到了药理拮抗作用。

ICP-MS测定诃子炮制前后无机元素含量及安全性评价

目的:建立诃子生品及清炒、麸煨、砂烫、烘制4种炮制品中26个无机元素的分析方法,对其中重金属及有害元素进行健康风险评估。方法:采用电感耦合等离子体质谱法,以铑和铼为内标,通过标准曲线法测定诃子中的26个元素;采用危害指数(HI)法和暴露限值(MOE)法进行健康风险评估。结果:26个元素的标准曲线线性关系良好,仪器检出限为0.0002~0.4342μg·kg^(-1),加样回收率为83.21%~116.84%。诃子炮制前后无机元素差异明显,部分重金属及有害元素所致健康风险较低。结论:该方法简便、准确,适用于诃子中无机元素的含量测定,为其重金属及有害元素健康风险评估提供了参考。

诃子基原物种及其混伪品的形态鉴别与分子鉴定

目的:建立能够准确鉴别诃子、绒毛诃子及其混伪品的分子鉴定方法。方法:对诃子、绒毛诃子及其混伪品的新鲜果实进行烘干,观察其干燥前后的形态;提取样品DNA,采用DNA条形码内转录间隔区2(ITS2)序列和psbA-trnH序列进行聚合酶链式反应扩增并测序,采用DANMAN 7、MAGE 6软件对测序结果进行序列比对,计算Kimura 2-paramete遗传距离,并构建邻接法系统发育树。结果:形态观察发现,诃子、绒毛诃子果实干燥前后与混伪品有较大的差异,可以通过形态差异进行鉴别;DNA条形码序列表明,诃子和绒毛诃子ITS2序列基本一致,仅发现4个单核苷酸多态性位点,但不能由此对两者进行区分;诃子和绒毛诃子的psbA-trnH序列存在2处明显差异,可对两者进行准确区分;绒毛诃子中存在2种类型的单倍型,其明显差异在于是否在psbA-trnH序列上存在1段16 bp的串联重复序列;混伪品与诃子、绒毛诃子之间具有较大的psbA-trnH序列差异,可直接在美国国家生物技术信息中心比对进行区分;对市场上流通的诃子炮制品进行鉴定发现,其多为2种单倍型绒毛诃子,且存在毛诃子混伪的情况。结论:利用psbA-trnH序列可准确鉴别诃子、绒毛诃子及其混伪品,发现绒毛诃子中存在2种类型的单倍型。

UPLC-QTOF/MS结合网络药理学探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎和痛风性关节炎作用机制

目的:探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎(RA)和痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:采用数据挖掘技术找出治疗“图赖”病的核心药物组合(诃子-草乌),并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF/MS)检测大鼠灌胃诃子与草乌配伍药物后的入血成分;运用PubChem、Swiss Target Prediction、GeneCards、OMIM、DisGeNET、Metascape等多个数据库检索诃子与草乌化学成分对应靶点、RA和GA的疾病靶点,以及代谢通路等信息,利用Cytoscape3.8.2软件构建成分-靶点-通路-疾病网络,并利用分子对接方法证实诃子与草乌的主要成分与关键靶点之间的高亲合力。结果:诃子与草乌入血成分相应靶点与RA靶点交集后得到323个交集靶点、与GA靶点交集后得到24个交集靶点,两者共有靶点24个,主要有肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白p53(TP53)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)和信号转导和转录激活因子3(STAT3),与十八碳四烯酸、绢酸、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩、灵芝酸H等有紧密联系,涉及通路有TNF信号通路、破骨细胞分化通路、癌症通路等。分子对接结果显示灵芝酸H和TNF、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩和MMP-9有强烈对接活性。结论:蒙古族药诃子与草乌配伍治疗RA和GA具有多靶点效应,可能通过炎症反应的调节、细胞对生物刺激的反应、对细菌源分子的反应、磷酸盐代谢的正调控和对激素的反应等通路发挥“异病同治”作用。

复方铁苋工艺优化及抑菌成分研究

目的 基于抑菌药效优化复方铁苋最佳配伍及提取工艺,并揭示该中药复方的抑菌物质。方法 以抗嗜水气单胞菌药效为考察指标筛选复方铁苋最佳配伍,以没食子酸的含量和抑菌活性为评价指标,通过单因素实验和响应面法优化复方铁苋的提取工艺;对不同提取工艺的复方铁苋建立化学指纹图谱并指认“共有峰”,通过相关分析建立指纹图谱与抑菌药效间的“谱效关系”,并采用UPLC-Q-TOF-MS技术进行成分鉴定,找出抑制嗜水气单胞菌的关键成分。结果 复方铁苋以铁苋菜∶五倍子∶诃子=2∶2∶1(w/w/w)为最佳配伍,以料液比为1∶25,浸泡22 min后煎煮60 min为最佳提取工艺,该条件下复方铁苋提取物对嗜水气单胞菌具有最佳抑制效果;从复方铁苋指纹图谱中找出4个与抑菌活性呈高度正相关的物质:诃子酸>诃子鞣酸>没食子酸-4-O-(6-O-没食子酰)葡萄糖苷>没食子酸(相关系数在0.499~0.846之间)。结论 铁苋菜、五倍子、诃子在最佳配伍及工艺条件下具有明显抑制嗜水气单胞菌的活性,通过“谱效关系”快速找出该中药复方中潜在的抑菌物质,为复方铁苋进一步开发为防治嗜水气单胞菌的药物提供科学依据。

诃子抗氧化活性物质提取工艺与抗氧化活性研究

对诃子抗氧化活性物质提取工艺、抗氧化活性及其初步物质基础进行了研究。结果表明,最佳提取工艺为:乙醇体积分数50%、液料比20、提取温度60℃、提取次数4次、提取时间7 m in;总还原力、FRAP法抗氧化能力和DPPH自由基清除能力的结果均显示诃子粗提物具有很强的抗氧化活性。生物活性追踪结果发现,诃子抗氧化活性物质主要由存在于乙酸乙酯相的弱极性化合物组成,该相质量浓度为25、50μg/mL样品的总还原力OD700值分别为0.197±0.002和0.380±0.006,FRAP法抗氧化能力OD593分别为0.272±0.023和0.631±0.002,DPPH自由基清除率分别为(86.838±0.600)%和(90.318±0.917)%。相关关系表明,诃子抗氧化活性的主要物质基础为总黄酮和总多酚。

诃子鞣质对白色念珠菌及其生物被膜的影响

目的研究诃子鞣质对生物被膜型白色念珠菌的抑制作用。方法采用MTT法检测诃子鞣质对生物被膜形成的影响;光镜下观察生物被膜内白色念珠菌的形态学变化;采用荧光显微镜观察吖啶橙/溴化乙锭染色的生物被膜内白色念珠菌的死亡方式。结果诃子鞣质对生物被膜的形成及成熟期生物被膜中的白色念珠菌有抑制作用,并存在时间和剂量依赖性;鞣质导致被膜内白色念珠菌细胞变形,形态结构改变,芽管和假菌丝形成抑制,但未见确切细胞凋亡。结论诃子鞣质对白色念珠菌生物被膜的形成有抑制作用,它可能通过非凋亡途径导致生物被膜内白色念珠菌的死亡。

诃子及其混淆品RAPD分析

目的 :对不同品种的诃子进行 DNA指纹图的鉴别研究 ,并对 RAPD在中药材鉴别中存在的一些问题进行研究。方法 :应用 RAPD技术对诃子及其常见混淆品进行 DNA指纹图多态性的比较。结果 :DNA指纹图显示 ,各样品间具有不同的遗传关系 ,根据这些差别可进行鉴别 ,同时对存在的若干问题提出了解决的方法。结论

生、炙诃子对气管平滑肌收缩活动的影响

本文采用乙酰胆碱、氯化钾诱发家免气管平滑肌收缩,观察生、炙诃子对气管平滑肌收缩活动的影响。结果表明:生诃子对乙酰胆碱和氯化钾诱发的气管平滑肌收缩无明显作用。而炙诃子对乙酰胆碱诱发的气管平滑肌收缩有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与一氧化氮和前列腺素类物质的释放、cGMP及肾上腺素能受体无关,是非上皮依赖性的。炙诃子对氯化钾诱发的气管平滑肌收缩无明显作用。生、炙诃子作用的差别可能与鞣酸的含量不同有关。

诃子总多酚恒温超声辅助提取与过程动力学研究

采用三频恒温数控超声辅助提取技术优化了诃子总多酚提取工艺;通过比较试验和扫描电镜分析了该技术高效提取的原因;从Fick第一定律出发建立了诃子总多酚扩散动力学方程,并进行了验证。结果表明,恒温超声提取诃子总多酚最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%、超声频率80 k Hz、超声功率180 W、提取温度70℃;该工艺提取效率显著高于水浴振荡提取工艺(P<0.001);扫描电镜观察发现,恒温超声提取技术对原料粉末微观结构破坏更严重。结合Fick第一定律及超声提取动力学推导了恒温超声辅助提取诃子总多酚动力学方程;验证试验表明,在相应的范围内,提取时间对数和提取功率对数均与诃子总多酚浓度对数呈正比关系。结果表明:恒温超声辅助技术可用于诃子总多酚高效提取。

诃子及其炮制品对CCl_4诱导小鼠肝损伤的保护作用

将120只小鼠随机分为空白组、四氯化碳(CCl_4)组、联苯双酯(DDB)组及低、中、高3个剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)的原药诃子、白狼毒制诃子和茜草制诃子组,共12个组,每组10只。给药7 d后,腹腔注射10 m L/kgCCl_4油溶液,建立小鼠肝损伤模型,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)活力,观察肝脏组织学结构变化。研究结果显示,诃子不同炮制品可减少CCl_4所引起的小鼠肝损伤,显著降低血清ALT、AST活力,提高肝脏SOD、GSH–Px活力,并对肝细胞有一定保护作用;药效表现由强到弱依次为茜草制诃子、白狼毒制诃子、生药诃子,且高剂量的效果优于低剂量。以茜草制诃子高剂量组4.0 g/kg效果最为理想,其作用机制可能与抗氧化性有关。

诃子化学成分的研究

从诃子 (TerminaliachebulaRetz.)果实的乙醇提取物中分得 1 0个化合物 ,根据理化性质和波谱分析 ,鉴定为莽草酸 (I) ,莽草酸甲酯 (Ⅱ ) ,没食子酸 (Ⅲ ) ,没食子酸乙酯 (Ⅳ ) ,苯甲酸 (Ⅴ ) ,软脂酸 (Ⅵ ) ,甘露醇 (Ⅶ ) ,β 谷甾醇 (Ⅷ ) ,胡萝卜苷 (Ⅸ ) ,阿江榄仁素 (Ⅹ )。

诃子化学成分及药理活性的研究进展

诃子作为一种植物性鞣质的重要来源 ,以及其较强的抗菌活性 ,在临床上的应用越来越广泛。诃子主要含三萜酸类、没食子酰葡萄糖、没食子酰的简单酯类化合物及蒽醌类等物质 ,具有抗菌、强心、抗氧化及抗癌等药理活性。

高速逆流色谱法分离制备中药诃子中的没食子酸

利用高速逆流色谱法从100 mg诃子醇提物中一次性分离制备得到8.6 mg没食子酸。通过分析型高速逆流色谱对5种溶剂系统进行筛选,确定以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为1∶5∶1∶5)为两相溶剂体系并放大到制备型上,以上相为固定相,下相为流动相,在主机转速850 r/min、流动相流速2 mL/min、检测波长254 nm的条件下进行分离制备,获得4个分离峰(组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。经高效液相色谱检测,按照面积归一法计算,其中组分Ⅲ的纯度达96.40%。经电喷雾电离质谱分析,并结合与没食子酸标准品的高效液相色谱测定结果的对比,确定组分Ⅲ为没食子酸。该方法简便、快速、重复性好,适合于诃子中没食子酸的分离制备。