2，3，7，8-四氯二苯-对-二噁英调节辅助性T细胞17／调节性T细胞平衡治疗类风湿关节炎的实验研究

目的探索2，3，7，8-四氯二苯-对-二噁英（TcDD）为芳香烃受体激活剂，诱导naiveT定向分化为调节性T细胞，纠正CIA-RA大鼠模型中辅助性T细胞]7（Th17）闹节性T细胞失衡，为TCDD临床治疗RA提供实验依据。方法①牛Ⅱ型胶原建立CIA大鼠动物模型。分别设对照组（N组）；CIA模型组（c组）；TCDD治疗组（T组）各10只。②流式细胞术（FCM）检测PBMCs中Th17细胞，调节性T细胞的百分数及二者比值。ELISA检测Th17细胞相关因子（IL-1β、IL-6、IL．17a、IL-23、TNF-α）和调节性T细胞相关细胞因子（TCF-β）含量。③评估关节炎指数积分及SPECT扫描下9Tcm3P4-RGD2在体内分布情况，计算大鼠四肢关节放射性核素平均计数率靶区摄取计数／纵隔摄取计数。④治疗2周后将大鼠处死行肿胀关节病理切片评价关节炎病理损伤评分。数据统计采用单因素方差分析和配对t检验。结果c组治疗前后Th17细胞百分比显著上升，分别为[（2．99±0．16）％、（4．02＋0．33）％，t=-6．82，P=O．001]，调节性T细胞百分比显著下降，分别为[（2．67±0．57）％、（1．79±0．39）％，t=3．11，P〈0．01]，Th17/调节性T细胞比值上升，分别为（1．14±0．14、2．27±0．39，t=-4．53，P=0．039）；T组治疗前后Th17细胞百分比显著下降分别为[（2．69±0．24）％、（1．21±0．25）％，t=5．12，P〈0.01]，调节性T细胞百分比0显著上升分别为[（2．76±0．36）％、（3．78±0．22）％，t=-6．24，P〈0．01]，Th17／调节性T细胞比值下降分别为（t．08±0．07、0．21±0．05，t=-11．92，P=-0．027）。C组治疗前后Th17相关因子明显上升，其值分别为IL-1β[（96±12）pg/ml、（153±18）pg／ml，t=-13．24，P〈0.01]，IL-6[（246±14）pg／ml、（295±15）pg／ml，t=-9．41，P=0．007]，IL-17（76±14）pg／ml、（99±16）pg／ml，t=-5．78，P=0．000]，IL-23[（85±9）pg／ml、（102±11）pg／ml，t=-11．71，P〈0．01]，TNF-a（303±12）pg／ml、（345±17）pg／ml，t=15．56，P=O．007]，调节性T细胞相关因子TGF-β值显著下降[（42±7）ng/ml、（35＋8）ng／ml，t=7．52，P=0．012]；T组治疗前后Th17相关因子明显下降，其值分别为IL-1β[（93＋10）pg／m]、（79±8）pg／ml，t=10．52，P〈0．01]，IL-6[（245±11）pg/ml、（151±8）pg／ml，t=19．23，P〈0．01]，IL-17[（76±10）pg／ml、（62±9）pg／ml，t=7．37，P=0．005]，IL-23[（84±11）pg/ml、（38±6）pg）ml，t=14．48，P〈0．01]，TNF-a（294±8）pg／ml、（195±9）pg／ml，t=23．35，P〈0．01]，调节性T细胞相关因子TGF-β值显著升高[（41±8）ng／ml、（61±10）ng／ml，t=10．61，P〈0．01]。结论TCDD可以通过上调调节性T细胞，下调Th17细胞，使RA病理过程中Th17／调节性T细胞重新达到平衡，改善RA症状。

基于克隆表达的芳香烃受体系统的二噁[口英]生物检测方法研究

目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白（ARNT）与天然芳香烃受体（AhR）特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况，通过两者结合与二噁[口英]（TCDD）的剂量反应关系，探索TCDD生物检测方法。方法（1）以小鼠肝组织总RNA为模板，通过RT—PCR扩增目的基因AhR—PAS[periodicity （Per）／Aryl hydrocarbon nuclear translocator（ARNT）／single—minded（Sim）]端、AhR羧基末端（AhR—C端）、ARNT—PAS端，构建含有目的基因的pGEX-5XI重组表达质粒，并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达。（2）用上述克隆表达的AhR片段蛋白（AhR—PAS、AhR—C）作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体。（3）从C57BL／6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物，将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶（GST）上面的融合蛋白GST—ARNT—PAS，分别在0．25、0．50、1．00、2．00pmol TCDD存在的条件下进行结合，通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量。结果（1）成功构建含有目的基因AhR—PAS、AhR—C和ARNT—PAS的重组质粒，并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的蛋白；（2）免疫家兔制得的多克隆抗体AhR—PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1ng；（3）测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60．5mg／ml；在TCDD存在的条件下，克隆得到的融合蛋白GST—ARNT—PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合，并测得检测下限为0．25pmol，约80pg TCDD。结论成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法，且检测下限达到pg级别。