大鼠肝实质及非实质细胞VLDL和HDL受体的研究

作者以^(125)I-标记的人VLDL和不含apo E的HDL_3为配体,研究了大鼠肝实质细胞(PC)及非肝实质细胞(NPC)的VLDL和HDL受体的生物学特性。结果显示:VLDL受体和HDL受体均可介导肝PC和NPC结合、摄取及降解相应的脂蛋白;肝NPC上该二受体的活性分别为PC的10倍和4倍;肝NPC上VLDL受体HDL受体的解离常数分别为15.0～34.2μg/ml和10.1～17.7μg/ml,最大结合容量分别为2170～2607ng/mg和1004～2738ng/mg细胞蛋白;VLDL受体活性受EDTA抑制及胆固醇的下降调节,HDL受体不受EDTA抑制但受胆固醇的上升调节。发现apoCⅢ对VLDL受体结合功能有明显抑制作用。

高密度脂蛋白对其动脉粥样硬化家兔肝细胞膜受体活性的影响

为了研究高密度脂蛋白对抗动脉粥样硬化的作用机理，采用酶联免疫受体分析法对注射高密度脂蛋白的动脉粥样硬化家兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体活性进行了检测。结果表明，人血浆高密度脂蛋白虽不能降低高脂饲养的家兔血脂含量，但可显著降低其肝脏脂质水平和显著升高胆囊胆汁脂质水平。受体分析发现，高脂对照组动物肝细胞膜高密度脂蛋白受体Ｋｄ值显著降低，而高密度脂蛋白试验组动物Ｋｄ值未见明显变化，但Ｂｍａｘ却显著降低。提示长期高脂饲养有使动脉粥样硬化模型动物肝细胞膜高密度脂蛋白受体Ｋｄ值显著降低的作用。

脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒的体外细胞摄取及毒性研究

目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)体外被人肝癌Hep G2细胞、小鼠腹水型高淋巴道转移肿瘤HCa-F细胞的摄取情况和对Hep G2细胞的毒性。方法:制备包载RBG和荧光标记物香豆素6的PLGA-TPGS纳米粒(RCPTN),荧光倒置显微镜观察Hep G2、HCa-F细胞对RCPTN的体外摄取情况。将试验分为阴性对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、RBG溶液(RS)组、RBG/PLGA纳米粒(RPN)组、RPTN组,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同终质量浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/m L)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后Hep G2细胞在450 nm波长下的光密度,计算细胞存活率(CV)和半数抑制浓度(IC_(50))。结果:RCPTN分布在Hep G2、HCa-F细胞的细胞核周围。RPN组和RPTN组细胞的CV随RBG浓度增加而减小,随作用时间延长而减小;与FS组比较,RPTN组细胞的CV均减小(P<0.05或P<0.01)。FS、RS、RPN和RPTN作用于Hep G2细胞的IC_(50)随时间的延长而减小,且IC_(50)的大小依次为RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC_(50)明显小于FS与RS(P<0.05或P<0.01)。结论:RPTN可将RBG带入Hep G2、HCa-F细胞内部,其对Hep G2细胞具有抑制作用,且作用强于RPN、RS和FS。

体外肝摄取高密度脂蛋白(HDL)细胞模型的建立

目的:建立肝摄取HDL的体外细胞模型,用于促进胆固醇逆转运活性成分的高通量筛选。方法:以Di I(1,1-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocao cyanine per chlorate)荧光染料标记HDL,体外培养人HepG2肝细胞株,细胞贴壁后与2μg/ml DiIHDL于37℃下恒温孵育,在动态细胞观察系统下连续观察细胞摄取HDL的实时状态,摄取完成后利用荧光显微镜照相并采用流式细胞术测定细胞的荧光值。结果:荧光显微镜和流式细胞术结果显示,5 h后HepG2细胞摄取HDL饱和。结论:通过体外培养HepG2细胞摄取Di I标记HDL建立的细胞模型并利用流式细胞术测定荧光值,可用于促进胆固醇逆转运活性成分的高通量筛选。

肝靶向索拉非尼脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

以甘草次酸修饰的胆固醇(GA-PEG-Chol)为肝靶向材料,采用薄膜分散法制备载索拉非尼(1)的肝靶向脂质体,并评价其制剂学相关性质、体外抗肿瘤活性及体外摄取效率。所得制品粒径和包封率为(89.79±6.20)nm和(86.13±2.75)%;在含有0.6%Tween-80的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中,48 h累积释放率为80%。体外抗肿瘤活性研究显示,当1浓度为10μg/ml时,肝靶向1脂质体对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7402的体外生长抑制作用明显优于游离1和非靶向1脂质体(P<0.05)。体外摄取研究结果显示,上述两株肝癌细胞对肝靶向脂质体的摄取效率显著高于游离香豆素(P<0.05),提示肝靶向1脂质体增强的抗肝癌活性可能源于其显著增加了肝癌细胞内的药物浓度。

肿瘤显像剂S^11C-甲基-L-半胱氨酸的细胞摄取机制研究

目的探讨肿瘤细胞摄取S^11C-甲基-L-半胱氨酸（^11C-MCYS）的机制。方法将Hepal-6肝癌细胞分为Na^＋依赖组（NaCl组）及非Na^＋依赖组（氯化胆碱组）进行氨基酸转运实验。每组又分为对照组、L-氨基酸转运载体抑制剂2-氨基二环．2，2，1-庚烷-2-羧酸（BCH）组、转运系统A和ASC的抑制剂α-甲基-氨基异丁酸（MeAIB）组、MeAIB＋丝氨酸组，分别加入^11C-MCYS（400μl0．925MBq／ml）、^11C—MCYS（200μl1．85MBq／ml）＋阻滞剂BCH（200μl 15mmol／L）、^11C-MCYS（200μl1．85MBq／ml）＋阻滞剂MeAIB（200Ixl15mmol／L）以及“C．MCYS（200斗11．85MBq／ml）＋阻滞剂MeAIB＋丝氨酸（200斗l15mmol／L）。作用4min后终止培养应用1计数仪测量细胞放射性活度。将Hepal一6肝癌细胞分为5组，各组均加入200μl^11C—MCYS（1．85MBq／ml）后分别加入50、100、200、300、350μmol／L浓度不等的MCYS进行竞争抑制实验。培养4min后终止培养应用γ计数仪测量细胞放射性活度。结果无论是否有Na^＋存在，对照组、BCH组、MeAIB及MeAIB＋丝氨酸组对^11C—MCYS摄取的差异均无统计学意义（均P〉0．05）。MeAIB组和MeAIB＋丝氨酸组中的NaCl组细胞放射性活性与氯化胆碱组相比差异均无统计学意义（18958．18±97．32比20582．27±196．32，18385．24±122．96比21620比±131．41，均P〉0．05），两者均不能抑制Na^＋非依赖性氨基酸转运载体的转运。而BCH组中的NaCl组细胞放射性活性高于氯化胆碱组（2587．21±＋30．25比2340．61±21．09，P〈0．05），可见BCH能明显抑制Na^＋非依赖性氨基酸转运体对^11C-MCYS的转运。不同浓度MCYS（50～350μmol／L）作用下肿瘤细胞对^11C-MCYS摄取差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论肿瘤细胞摄取^11C-MCYS是通过非Na^＋依赖的L-氨基酸转运系统进行转运的，极少涉及氨基酸转运系统A和ASC。

外泌体携载阿霉素递送体系构建及体外抗肿瘤活性评价

目的制备肝癌细胞Hep1-6外泌体并对化疗药物阿霉素(DOX)进行包载,以期实现对肿瘤细胞更高的靶向活性与杀伤作用。方法采用梯度离心法对肿瘤细胞Hep1-6来源的外泌体进行制备分离;采用透射电镜技术、表面标记蛋白表征以及纳米颗粒追踪分析技术对外泌体的形态、特征蛋白、粒径分布和浓度进行表征;采用电穿孔方法实现外泌体对DOX的有效包载,制备包载阿霉素外泌体(EXODOX)。采用CCK-8法检测EXODOX与DOX(0.5、1、2、3、5、10μg·mL^(−1))体外对Hep1-6细胞增殖的影响,采用激光共聚焦显微镜观察体外Hep1-6细胞对EXODOX与DOX(1μg·mL^(−1))的靶向摄取作用。结果所制备的外泌体具有形态良好、粒度均一的特性且具备外泌体特征膜蛋白CD63、CD81、肿瘤易感基因101(TSG101)的表达;在电穿孔条件为150 V和75μF下外泌体对DOX具备良好的包载特性;相比于单独给药DOX,在同等质量浓度下EXODOX对Hep1-6细胞增殖抑制作用显著增强(P<0.05、0.01),同时肿瘤细胞对EXODOX的摄取更具靶向性。结论制备的EXODOX较DOX具有更强的体外细胞毒活性,EXODOX表现出对肿瘤细胞更高的靶向特性。