Purification and Activity of Antibacterial Substances Derived from Soil Streptomyces sp.CaiF1

[Objective] This study aimed to separate and purify antibacterial substances from soil Streptomyces sp. CaiF1, and to explore the activities of this substance. [Method] The antibacterial substances were separated and purified by Ethyl acetate extraction, macroporous adsorptive resin, silica gel chromatography and preparative high performance liquid chromatography (HPLC), and powdery mildew were taken as the indicating bacterial to study their activities. [Result] Antibacterial substances were purified and the stability analysis of the extracts from Streptomyces CaiF1 fermentation broth showed very stable at pH 2.0-pH 10.0, 100 ℃ and changed very little under UV treatment for 24 h. Inhibition rate of powdery mildew was 69.7%. [Conclusion] The purified antibacterial substances showed good stability, which provided theoretical foundation for their structural identifications and future applications.

南极适冷菌Pseudoalteromonas sp. S-15-13胞外多糖的分离、纯化和结构分析

从一株南极海冰中分离出来一种适冷菌Pseudoalteromonas sp. S-15-13,其胞外多糖具有良好的免疫活性.为了探讨南极菌S-15-13胞外多糖结构与功能之间的相互关系,对其胞外多糖进行了分离纯化和结构分析.粗多糖经DEAE-Sephadex A-50离子交换层析及Sephadex G-100凝胶层析纯化后得到组分EPS-Ⅱ,经HPLC分析验证EPS-Ⅱ为单一组分,其分子量为62000;单糖组成、甲基化分析及核磁共振结果表明,EPS-Ⅱ的主体结构由(1,2)α-D-Man组成主链,并在6位上有分支的新甘露聚糖.

头花蓼内生真菌Diaporthe sp.代谢产物中的抗菌活性成分研究

目的:研究头花蓼内生真菌Diaporthe sp.代谢产物中的抗菌活性成分。方法:采用硅胶色谱、Sephadex LH-20及半制备高效液相色谱等分离方法对内生真菌Diaporthe sp.的代谢产物进行分离纯化,运用MS、1H-NMR及13 C-NMR等现代波谱分析技术对分离得到的单体化合物进行结构鉴定,采用96孔板二倍稀释法对单体化合物进行抗菌活性研究。结果:从内生菌代谢物中分离得到化合物11个,分别为胸腺嘧啶核苷(1)、2′-O-甲氧基尿嘧啶核苷(2)、尿嘧啶核苷(3)、对羟基苯甲醛(4)、alternariol(5)、2-甲基-3,5-羟基色酮(6)、尿嘧啶(7)、(-)-(3 R)-mellein methylether(8)、3-(2 R,4 S-dihydroxypentyl)-6,8-dihydroxyisocoumarin(9)、2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(10)和对羟基苯乙醇(11),化合物1~3和7~10为Diaporthe属首次报道;抗菌活性测试显示,化合物5、6、8及9对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为16~32 mg/L,化合物5对金黄色葡萄球菌的MIC为32 mg/L。结论:化合物5、6、8及9为头花蓼内生真菌Diaporthe sp.代谢产物中的抗菌活性成分。

一株产异淀粉酶栖热菌的生长和产酶初步研究

异淀粉酶是一类在工业中有重要应用价值的淀粉酶,从云南梁河温泉水样中分离筛选到1株产异淀粉酶的菌株,初步鉴定为栖热菌(Thermus).该菌在8～19 h为对数生长期,17 h生长最快,20 h后进入稳定期,产酶伴随菌体生长同时发生,进入稳定期后产酶迅速提高,39 h产酶量达最高,初始酶活达4.14 u/mL.

壳聚糖酶的分离提纯及其酶学性质研究

从土壤中筛选获得的高产壳聚糖酶菌株Penicillium sp.ZD-Z1,经发酵、分离提取出两种壳聚糖酶A和酶B,并对它们分别进行酶学性质测试。分别测定酶A和酶B的等电点、相对分子质量、最适反应温度和pH、不同脱乙酰度的壳聚糖对酶活的影响。并考察了两种壳聚糖酶的酶解方式,结果表明,酶A为内切酶,酶B为外切酶。

小球藻多糖的分离纯化和组成分析

采用冻结-融化方法,用冷水提取海水小球藻Chlorellasp.多糖,多糖经除蛋白、乙醇分级沉淀、柱层析等一系列步骤处理后,得到组分均一的小球藻多糖(简称CPSB-1)。将CPSB-1完全酸水解,用高效阴离子液相色谱对其溶液进行分析,结果表明:组成多糖CPSB-1的单糖有D-岩藻糖、D-鼠李糖、D-2-氨基葡萄糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和几种未知的单糖;各已知糖基的摩尔比为D-岩藻糖∶D-鼠李糖∶D-2-氨基葡萄糖∶D-半乳糖∶D-葡萄糖=1.3∶1.0∶1.4∶1.2∶3.1。

水生栖热菌FL-03海藻糖合酶的分离纯化及特性研究

将从水生栖热菌FL-03中获得的海藻糖合酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephaeryl S-200HR凝胶过滤层析后，纯化68．48倍，产率为18．4％。研究表明：该酶分子量约为101kD，最适反应温度为60℃，最适pH为7．0，在40～80℃、pH 6.0～9．0范围内具有较高的反应活性和稳定性。Fe^3＋对该酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Tris、Zn^2＋对该酶具有较强的抑制作用。该酶具有高度的底物特异性，只能专一地将麦芽糖转化为海藻糖。在40℃、48h条件下，麦芽糖转化为海藻糖的转化率最大可达到79％。

叉鞭金藻多糖的分离纯化及体外抗氧化作用研究

叉鞭金藻多糖(DAP)经琼脂糖凝胶柱层析进行分级,得到了DAP-1和DAP-22个组分,分别对这2个组分进行了纯度和分子质量的测定,并考察了对羟自由基OH.、超氧阴离子O2-.的清除效果,以及对H2O2诱发小鼠红细胞氧化溶血的抑制作用和对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用.结果显示,两个组份的组成相对均一,能显著或极显著清除OH.、O2-.,抑制小鼠红细胞溶血,并能显著抑制小鼠肝脂质过氧化的产生,且呈现剂量依赖性.其中DAP-2的抗氧化活性较DAP-1好,其对OH.、O2-.的清除率最高可达85.2%和76.0%,对小鼠红细胞的溶血抑制率和脂质过氧化的抑制率分别可达83.6%和89.3%.

链霉菌182-2抗真菌活性物质的分离及抑菌特性的初步研究

[目的]链霉菌182-2的发酵液对烟草赤星病有良好的抑制作用,本文拟对其发酵液中抗真菌活性组分进行初步分离,并进行抑菌特性研究。[方法]发酵液经预处理后,依次用活性炭脱色,大孔树脂吸附层析分离纯化,对纯化后活性物质(组分Ⅱ)的抑菌活性进行测定。[结果]分离纯化结果表明其活性物质中至少含有两种抗真菌活性组分。离体条件下当活性物质浓度为2 000μg/mL时,对烟草赤星病菌有很强的抑菌作用,抑菌圈直径达58.0mm。目测法测定抗生作用表明其最小抑菌浓度(MIC)为80μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为160μg/mL。48h时对菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高,抑菌中浓度(EC50)分别为31.9μg/mL和42.2μg/mL。活性组分处理还可导致病原菌菌丝和孢子萌发产生的芽管变形扭曲或产生大泡囊。[结论]纯化后的活性物质对烟草赤星病菌具有较强的抑制作用,有进一步研究利用的价值。

冬虫夏草菌丝多糖分离提取特性研究

研究以冬虫夏草菌丝体为原料分离提取冬虫夏草多糖的最佳条件和生产工艺。结果证明 :冬虫夏草多糖的最佳提取条件是 :原料粒度为 30 0目 ,菌粉和水分的比例为 1∶2 .5 ,浸提时间为 2 4h ,pH值为7.5～ 8.0。研究结果为冬虫夏草多糖特性分析和临床检测提供了基本理论数据。

高速逆流色谱分离纯化裂壶藻油脂中的DHA

利用两步高速逆流色谱法分离纯化裂壶藻油脂中的二十二碳六烯酸(DHA)。经筛选,正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比15∶1∶15∶1)为第1步高速逆流色谱的两相溶剂体系,正庚烷-甲醇-水(体积比5∶6∶1)为第2步高速逆流色谱的两相溶剂体系。采用紫外检测器在波长210 nm处检测。利用单因素试验和响应面分析法对高速逆流色谱的分离条件:进样量、流动相流速、转速、分离温度进行优化试验,得到的最佳条件是:进样量180mg、流速3 mL/min、转速910 r/min、温度13℃。在此条件下,利用两步高速逆流色谱法分离纯化裂壶藻油脂中的DHA,用高效液相色谱和紫外检测联用技术检测DHA的纯度分别为90.06%和99.61%,回收率分别为为95.27%和93.81%。

链霉菌Streptomyces sp.P325的化学成分研究

对Streptomyces sp.P325的化学成分进行研究。采用正相硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等分离技术对Streptomyces sp.P325发酵产物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化。从中共分离得到6个化合物,通过波谱数据分析和文献比对鉴定其结构,其中包括2个新化合物:四羟基十八碳二酸I(1)和四羟基十六碳二酸I(2),以及4个已知化合物:iso-frenolicin B(3)、(R)-7-acetyl-3,6-dihydroxy-8-propyl-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one(4)、对羟基苯甲酸甲酯(5)和isonicotinaldehyde(6)。对分离得到的化合物1~6进行细胞毒活性评价。结果显示,化合物3对HepG2细胞系表现出显著的抑制活性(IC50为13.11μmol/L),对HeLa细胞的抑制活性为中等(IC50为25.04μmol/L)。

海洋胶红酵母菌CD-008产超氧化物歧化酶发酵条件优化及酶分离纯化

在单因素试验基础上,结合Plackett-Burman、Box-Behnken设计及响应面分析法进行回归分析以确定海洋胶红酵母菌Rhodotorula sp.CD-008产超氧化物歧化酶最佳发酵条件,并通过盐析、超滤离心、Sephadex G-100凝胶过滤层析研究了酶的分离纯化条件。结果表明,pH、转速、温度对酶活力有显著影响,最优发酵条件为pH 5.34、转速150 r/min、温度21.40℃,优化后发酵液酶活力达到6 430.52 U/g湿菌体,比优化前提高了1.53倍。粗酶液经65%饱和度的硫酸铵盐析、超滤离心、Sephadex G-100凝胶过滤层析后获得的SOD比酶活达到419.90 U/mg,纯化倍数为9.60倍,蛋白回收率为8.2%。SDS-PAGE凝胶电泳显示,纯化后的SOD的分子质量约为37.5 ku。

类芽孢杆菌Bg1抗真菌蛋白的分离及其特性分析

为了明确类芽孢杆菌（Paenibacillus sp．）Bg1的主要抗真菌物质及其特性，本文利用抑菌圈法测定了Bg1抗菌蛋白在各种处理条件下抑菌活性的稳定性；通过60％硫酸铵沉淀、DEAE—Sephadex A50离子交换层析及Sephadex G100凝胶过滤层析进行了抗菌蛋白的分离纯化，以SDS-PAGE进行了其纯度检测。结果表明，28～100℃处理30min、4℃存放55d及在pH值3～7范围内菌株Bg1抗菌蛋白抑菌活性均无显著性变化，但pH值〉8显著影响其抑菌活性，蛋白酶处理则使其抑菌活性完全丧失；纯化后所得抗菌蛋白分子量约10KD。据此可知，类芽孢杆菌Bg1主要抗菌活性物质为低分子量蛋白，其对热和酸性条件及贮存时间稳定性好，具有进一步开发应用的潜能。

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂吸附、硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH 2.0～10.0、100℃和紫外照射24 h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供理论依据。

菲降解不动杆菌AC的筛选及降解特性的研究

为了筛选出一株高效的菲降解菌株,采取东北白城地区受原油污染的土壤,以菲作为唯一的碳源,利用传统培养的方式进行筛选。通过形态学的方法进行电镜扫描检测出菌落形态为光滑的双球连接成的短杆状,进一步通过16S rRNA测序结果显示为不动杆菌属(Acinetobacter sp.),命名为AC;探索菌株AC的生长(OD600)与菌落数(CFU)的形成,以及菌株AC在不同条件下的生长状况,显示菌株AC在30℃、pH 7.0的条件下具有良好的生长状况。研究发现菲在浓度为20 mg·L^-1、接种量为0.1的条件下培养7天,菌株AC的降解率达到了80%。结果表明该菌株为高效降解菌株,同时也在生物修复土壤方面具有良好的应用前景。

一株高产碱性果胶酶菌株的分离、产酶条件的优化和酶液的初步分离提纯

从公园的花土中分离出一株相对高产碱性果胶酶的菌株，经16srDNA鉴定为枯草芽孢杆菌，命名为TCCCC11286。在初步的酶学性质研究中表明，它耐高温耐碱，最适作用温度为45℃，到60℃仍有酶活，最适作用pH为8．0。经过培养基的初步优化，菌株TCCCC11286对于富含铵根离子的化学物质和淀粉具有很好的利用能力。本实验还对酶的分离纯化进行了初步研究。

红胞藻藻红蛋白的分离纯化及稳定性研究

文章旨在从红胞藻中分离纯化得到试剂级的藻红蛋白,并对其相关性质进行研究。以红胞藻为原料,采用反复冻融、硫酸铵盐析和疏水层析的方法分离纯化藻红蛋白,并对其稳定性进行研究。结果表明,红胞藻经过4次反复冻融后藻红蛋白溶出率最高,两步硫酸铵分级沉淀可使藻红蛋白纯度(A_(545)/A_(280))提高到2.45,进一步采用Butyl-S-QZT 6FF疏水层析纯化后藻红蛋白纯度(A_(545)/A_(280))达到试剂级,为6.63,回收率为48.9%。纯化的藻红蛋白在545 nm处有最大特征吸收峰,荧光激发峰位于541 nm和553 nm处,发射峰位于587.5 nm处,二级结构主要以α-螺旋的形式存在。藻红蛋白含有3个亚基,分子质量分别为9、10 ku和20 ku,在30~50℃、pH6~8条件下能保持相对稳定。Cu^(2+)对藻红蛋白的光谱学性质有一定的影响,在Ca^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)等离子存在时,藻红蛋白光谱学性质没有发生明显变化。结论:采用硫酸铵分级沉淀结合一步疏水层析获得了试剂级的藻红蛋白,得率高,工艺简便。研究结果为红胞藻藻红蛋白的大规模生产提供了参考。

海洋链霉菌GB-2产抗真菌物质的分离纯化和稳定性研究

目的从海洋链霉菌GB-2的发酵液中分离纯化抗真菌物质,并研究该物质的稳定性。方法采用有机溶剂萃取,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗真菌物质;通过管碟法,以米曲霉为指示菌研究抗真菌物质的pH、温度和紫外稳定性。结果海洋链霉菌GB-2产的抗真菌物质得到了纯化;该物质在pH1.0、pH13.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变。结论纯化了海洋链霉菌GB-2抗真菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。

海洋来源琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究

采用Vibiro sp.ZC-1发酵制备琼胶酶,粗酶液经过中空纤维柱浓缩、硫酸铵沉淀、DEAE-阴离子交换层析,得到一个电泳纯的琼胶酶组分Aga ZC-1,其分子质量约为45k Da,比活力为114.613U/mg。对Aga ZC-1进行酶学性质分析,结果表明,其最适反应p H为7.0,在p H为5.0~9.0时保温1h仍能保持80%以上的酶活力;最适反应温度为50℃,在45℃条件下保温1h酶活力保持在60%以上。在高浓度(5mmol/L)下,Fe^(3+)、Cu^(2+)、Sn^(2+)和Zn^(2+)能完全抑制琼胶酶的活性,在低浓度(1mmol/L)下,Cu^(2+)、Ba^(2+)、Na^+、Zn^(2+)、Ag^+、Sr^(3+)、K+对琼胶酶活性具有明显抑制作用。琼胶酶的动力学参数K_m和V_(max)分别为0.538mg/ml和6.33μmol/(L·min),对琼胶底物具有高度专一性,降解产物主要为新琼四糖和新琼六糖。