Direct MALDI-MS Analysis of Proteins Isolated by Liquid-phase Isoelectric Focusing Electrophoresis

A liquid-phase isoelectric focusing electrophoresis system(Rotofor) was used as the prefractionation tool for the sample preparation in the MALDI-MS analysis of a protein mixture. Each fraction collected was then directly subjected to MALDI-TOF-MS analysis. By this approach, we are able to resolve two types of hemoglobins, A and C, which cannot be successfully separated by means of the traditional SDS-PAGE method.

蛋白质组研究中的二维电泳分离技术

对目前生命科学研究中的热点领域蛋白质组研究中应用的主要分离技术二维聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理、应用和最新进展进行了综述。同时,针对二维凝胶电泳的缺陷,介绍了目前正在发展的几种替代技术。

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究 ,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)谱带的位置和数目进行品种鉴别 ;用改进的十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)测定其主要蛋白质成分分子量 ;用等电聚焦电泳(IFE)测定其主要蛋白质成分的等电点 (PI)。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。

毛细管等电聚焦/毛细管无胶筛分电泳二维蛋白质分离平台的构建

设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速分离分析 ,验证了该二维分离平台的可行性及分离效能。实验结果表明 :二维分离系统总的峰个数和分离效能都比各自一维分离系统有较大提高。

酯酶同工酶IEF电泳及香菇品种鉴别

本研究旨在建立一种鉴别香菇品种的高效、高分辨率方法，即聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦同工酶电泳法，并利用此方法对28个香菇品种进行检测。实验结果表明，不同香菇品种均有基础酶带的存在，但不同品种间在酶带条数，pI值及酶活性上有差异。

福建柏叶片蛋白质双向电泳技术优化

蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,p H4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20 000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。

应用等电聚焦电泳测定玉米种子的纯度

应用灵敏度、分辨率和重复性均较高的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)电泳测定150多种玉米自交系和90多种玉米杂交种的胚及幼芽的酯酶(EST)同工酶,通过对酶谱的比较和遗传分析,发现它们的酶谱各有特点,而且相互间又有很显著的差异,这些差异正是它们基因型差异的反映。因此,酶谱的特点及差异为玉米自交系和玉米杂交种种子纯度的鉴定从遗传和生化角度提供了科学依据。

福建棘隙吸虫的蛋白质组分及基因组DNA多态性分析

采用RAPD技术和等电聚焦电泳方法 ,对福建棘隙吸虫福建株和广东株虫体进行基因组DNA多态性分析和蛋白质等电点测定 .结果表明 ,15个随机引物在两虫株基因组DNA中共获得扩增带 182条 ,二者共有的 89条 ,广东株特有的 4条 ,其共享度为 0 .978,遗传距离指数为 0 .0 2 2 ;两虫株的蛋白质经电泳分离均可获得 9条区带 ,其中有 7条区带的等电点相同 ,第Ⅳ、Ⅴ条蛋白区带的等电点存在差异 .

毛细管等电聚焦电泳技术进展

介绍了毛细管等电聚焦电泳(CIEF)技术的发展和现状,特别对载体两性电解质、柱内表面处理和检测技术等方面的最新进展加以系统评述,并且对CIEF的定性能力、峰容量、重现性及其在生命科学方面的应用前景进行了讨论。引用文献59篇。

双向凝胶电泳的实验操作及进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是研究蛋白质组的核心技术,本文重点介绍了双向凝胶电泳的原理、实验操作过程中的具体步骤以及近年来在实验过程中发展的一些新方法和进展。

全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性

评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。

肾病综合征患儿载脂蛋白E遗传表型及与血脂水平的关系

目的 :研究肾病综合征 (NS)患儿载脂蛋白E (ApoE)等位基因频率分布及ApoE遗传多态性对血脂水平的影响。方法 :NS患儿禁食 12h ,采静脉血 ,用等电聚焦电泳法测定ApoE遗传表型 ,酶法和免疫比浊法测定 6项血脂指标。结果 :NS患儿血清TG、TC、LDL C、HDL C、ApoB水平明显升高 (P <0 .0 0 1) ,Apoe4等位基因频率与健康儿童相比明显增高 (P <0 .0 5 )。NS患儿不同ApoE表型各项血脂指标均未见明显差异。结论 :NS患儿存在明显脂质代谢紊乱 ,Apoe4等位基因频率明显增高。ApoE遗传多态性对NS患儿血脂水平未见明显影响。

毛细管电泳-电喷雾质谱联用技术及其在蛋白质分析领域中的应用

综述了毛细管电泳与电喷雾质谱联用的接口技术、分离模式及其在蛋白质分析领域中的应用 。

海南产桶形芋螺蛋白质二硫键异构酶的鉴定

蛋白质二硫键异构酶(PDI)是内质网新生肽链折叠中一个重要的折叠酶.在热带药用海洋生物芋螺的毒液中富含PDI酶,该酶对于毒液中芋螺毒素神经肽的体内氧化折叠至关重要.本研究主要采用凝胶过滤层析和制备型Rotofor液相等电聚焦电泳等多种方法,从海南产桶形芋螺(Conus betulinusLinnaeus)毒管中分离纯化天然的PDI酶蛋白,经电泳和MALDI-TOF MS质谱鉴定分析确证获得了高纯度的桶形芋螺PDI酶,建立了天然芋螺PDI酶分离纯化的技术方法.以芋螺毒素线性肽K412为底物进行了PDI酶活性鉴定.结果表明,该分离纯化的PDI酶能够促进K412的氧化折叠.由于芋螺毒素的氧化折叠非常复杂,且氧化折叠后具有正确二硫键连接方式的芋螺毒素才具有各种药理活性,因此,本研究结果为后续PDI酶在种类繁多的芋螺毒素氧化折叠中的应用及其作用机制研究提供了重要的物质基础.

大白菜一代杂种及双亲幼苗的等电聚焦电泳过氧化物同工酶分析

等电聚焦电泳是近些年发展起来的分离蛋白质的有效生化技术．操作简便，分辨率高，电泳条带多而且细，信息量大，利于进行深入细致的研究。该文利用等电聚焦丙烯酰胺电泳方法分析了6个大白菜一代杂种及双亲幼苗的过氧化物同工酶电泳图谱，共分离出十几条酶带，F1杂种与亲本间同工酶图谱均表现出明现差异，特别是A鉴别区内的酶带差异最明显，大多为互补型，是主要鉴别区。进一步研究结果表明，6个大白菜品种均可利用过氧化物同工酶鉴别由自交引起的假杂种。利用这项技术大量开展了这6个品种的商品种子纯度检测工作，同时在田间进行了验证性测定，二者结果基本相符。

薄层分析等电聚焦方法测定重组MUC1等电点及其性质的应用

目的采用薄层等电聚焦方法检测含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗(简称重组MUC1),为不含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗的下一步离子交换层析纯化蛋白提供参考依据。方法用两性电解质(Ampho-line)制备薄层凝胶,平铺在LKB电泳仪上,先预电泳15min,然后加样,电泳至电流不在下降停止电泳。测量等电点标准蛋白距阳极的泳动距离,然后绘制标准曲线,计算出含有组氨酸尾的重组MUC1的等电点值。根据测定的等电点值,选用阴离子交换层析法方法纯化不含有组氨酸尾的重组MUC1。结果等电聚焦方法测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点为5.4,阴离子交换层析法方法纯化获得纯度为83.5%的不含有组氨酸尾的重组MUC1。结论等电聚焦方法间接测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点,为不含有组氨酸尾的重组MUC1进一步的离子交换层析纯化蛋白提供了参考数据。

燕窝蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质经液相等电聚焦电泳纯化后,再经双向电泳分离获得了质量较佳的2-DE图谱,由此可见液相等电聚焦电泳是对燕窝蛋白质进行纯化的有效手段。对纯化后的2个白燕窝和1个血燕窝水提及丙酮沉淀蛋白质进行了双向电泳分析,结果显示两种方法制备蛋白质获得的2-DE图谱非常相似。燕窝水提蛋白质经丙酮沉淀制备样品时间较透析、冻干所需的时间短,这对于成分复杂蛋白质提取率较低的血燕窝则更为适用。

上海地区胃癌病人运铁蛋白(Tf)、组特异性成分(Gc)、α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)亚型分布的研究

用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了上海地区202例汉族胃癌病人及202例正常对照组的运铁聋白(Tf)和α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)亚型的分布,发现胃癌组Tfc_1c_1纯合子频率(0.3713)和Tfc_1基因频率(0.5718)显著低于对照组(分别为0.5149和0.6782),均为p<0.01,胃癌组Tfc_2c_2纯合子频率(0.2228)和Tfc_2基因频率(0.4019)显著高于对照组(分别为0.1436,p<0.05和0.2970,p<0.01),胃癌组和对照组的α_1-抗胰蛋白酶亚型分布无显著差异。用薄层聚丙烯酰胺等电聚焦结合免疫固定分析了上海地区200例汉族胃癌病人和200例正常对照组的组特异性成分(Gc)亚型分布,发现胃癌组Go1F表型频率(0.22)和Gc1F基因频率(0.4375)均显著高于正常对照组(分别为0.14和0.3600,均为p<0.05)。

三种鲀的毒性及其与种的相关性研究

用小鼠生物检测法及薄层等电聚焦电泳法测定 3种河的毒性及其蛋白质组分的种属差异性 .结果表明 ,河的毒性强弱与其种属有密切关系 ,不同种河的毒性差异很大 ;同种河的不同个体以及同一个体的不同器官组织也有较大差异 .

液相等电聚焦电泳纯化燕窝蛋白质

以市售燕窝为材料,采用MicroRotofor系统进行液相等电聚焦电泳(liquid-phase isoelectric focusing,LIEF)纯化燕窝蛋白质,等电聚焦电泳后对收集到10个小室的样品进行SDS凝胶电泳分析。结果显示,燕窝蛋白质提取液中的一些胶状物聚集在聚焦槽酸端第1～4样品室,第9、10样品室杂质也较多,合并第5～8样品室的样品,即得纯化后的燕窝蛋白用于后续双向电泳分析。液相等电聚焦电泳预分离纯化技术结合双向电泳技术,对4个燕窝蛋白质进行较好的分离,在2-DE胶上检测到约30～60个蛋白质点。由此可见,液相等电聚焦电泳预分离技术是燕窝蛋白质进行2-DE分离前的重要纯化手段。