基于TXNIP/GSDMD通路探讨补阳还五汤抑制高血压病大鼠内皮焦亡作用机制

目的通过观察补阳还五汤对高血压病大鼠硫氧还蛋白互作蛋白-消皮素D(TXNIP/GSDMD)信号转导通路的影响,从焦亡角度探讨补阳还五汤对高血压病大鼠主动脉血管内皮损伤的保护机制。方法将大鼠随机分为空白对照组,模型组,补阳还五汤低、中、高剂量组,氢氯噻嗪组,每组10只,所有大鼠于SPF级动物实验中心普通饲料适应性饲养7 d。空白对照组每日给予低盐饲料喂养,其余各组采用高盐饲料喂养,同时,补阳还五汤低、中、高剂量组分别以0.275、0.55、1.1 g/mL浓度中药干预,氢氯噻嗪组以10 mg/(kg·d)浓度药物干预。3周后,观察到大鼠血压比造模前升高大于或等于30 mm Hg(1 mm Hg≈0.133 kPa),且收缩压(SBP)≥160 mm Hg即高血压病大鼠造模成功。取大鼠主动脉进行检测,HE染色观察大鼠主动脉病理形态改变;采用ELISA检测大鼠主动脉中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)蛋白表达;荧光定量PCR检测大鼠主动脉中TXNIP、GSDMD、还原性辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)、IL-1β的mRNA表达,免疫印迹实验(Western blot)检测大鼠主动脉中GSDMD的蛋白表达,免疫组化(IHC)检测大鼠主动脉中TXNIP、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、GSDMD的蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组大鼠血压明显升高,主动脉内外膜都有一定脱落,界线模糊,血管中膜弹性纤维结构比较疏松,排列有一定紊乱;TXNIP、GSDMD、IL-1β、NOX4的mRNA表达上升(P<0.05);TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、IL-18、AngⅡ、MDA的蛋白表达升高(P<0.05),SOD蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤中剂量组和氢氯噻嗪组大鼠血压明显降低,血管内外膜更加完整、光滑,结构更加致密,界线较为清晰明显,补阳还五汤低、高剂量组内外膜仍有一定脱落,弹性纤维排列比较杂乱,变化不明显;药物干预后各组TXNIP、GSDMD、IL-1β、NOX4的mRNA表达均下降(P<0.05);补阳还五汤中剂量组和氢氯噻嗪组TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、IL-18、AngⅡ、MDA的蛋白表达降低(P<0.05),SOD蛋白表达升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过抑制氧化应激,调节TXNIP/GSDMD信号通路的分子表达,调控血管内皮焦亡,从而发挥保护血管、治疗高血压病的作用。

川芎嗪通过调控Txnip/TRX/NF-κB通路对急性肺损伤小鼠的保护作用研究

目的探索川芎嗪对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用,并探寻其可能的作用机制。方法选取50只健康BABL/c小鼠,随机分为对照组、模型组、地塞米松组(2 mg/kg)、川芎嗪低剂量组(20 mg/kg)和川芎嗪高剂量组(40 mg/kg)。对照组和模型组给予生理盐水,地塞米松组(2 mg/kg)、川芎嗪组(20、40 mg/kg)灌胃给予相应药物。给药1 h后,除对照组外,其余各组小鼠气管滴注20μg LPS。测定小鼠肺湿/干质量比,观察肺组织病理学变化,相应试剂盒检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)水平和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测白细胞介素-1β(1L-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,Western blotting检测Txnip、TRX和p-NF-κB p65蛋白表达。结果川芎嗪可显著缓解LPS诱导的ALI小鼠的肺水肿程度(P<0.01);显著上调SOD活力,下调MDA含量(P<0.05);有效降低小鼠肺组织炎性细胞因子表达水平(P<0.05);降低Txnip、pNF-κB p65的表达,上调TRX的表达(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过Txnip/TRX/NF-κB信号通路缓解LPS诱导的ALI。

五味子多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及AMPK/Nrf2/TXNIP通路的影响

目的 探讨五味子多糖对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗及单磷酸腺苷激活蛋白激酶/核因子E2相关因子2/硫氧还蛋白互作蛋白(AMPK/Nrf2/TXNIP)通路的影响。方法 Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、五味子多糖组、AMPK抑制剂组、五味子多糖+AMPK抑制剂组,构建大鼠T2DM模型。检测大鼠空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(P2BG),ELISA法检测大鼠血清胰岛素、炎症因子水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)并检测胰岛素耐量,HE染色观察大鼠胰腺组织病理学变化,Western blot法检测大鼠胰腺组织AMPK/Nrf2/TXNIP通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠FBG、P2BG、血清胰岛素、血糖和炎症因子水平以及胰腺组织TXNIP、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),胰腺组织受损较严重,ISI值和胰腺组织pAMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,五味子多糖组大鼠FBG、P2BG、血清胰岛素、血糖和炎症因子水平以及胰腺组织TXNIP、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05),胰腺组织受损得到缓解,ISI值和胰腺组织pAMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达升高(P<0.05);AMPK抑制剂可减弱五味子多糖对T2DM大鼠胰岛素抵抗的改善作用(P<0.05)。结论 五味子多糖对T2DM大鼠胰岛素抵抗有一定的缓解作用,其机制可能与激活AMPK/Nrf2/TXNIP通路有关。

消渴安糖方对2型糖尿病肾病患者血清Trx、Txnip的影响

研究2型 DN (2型 DN)中硫氧还蛋白(Trx)和硫氧还蛋白(Txnip)对 DN (2型 DN)中 Trx和 Txnip的调控作用。方法 选择广西中医学院瑞康人民医院内分泌内科门诊和入院的2型 DN病人69例,根据纳入条件,将其分成2组:普通疗法+止渴安糖方34例,普通疗法35例。比较两组的疗效。结果 两组患者术后 Trx和 Txnip均显著高于对照组,差异有统计学意义。结论 我们提出“消渴安糖方剂”通过调控 Trx和 Txnip表达,提高2型 DN (气阴夹瘀),为中药防治 DN开辟新途径。

姜黄素通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻对乙酰氨基酚诱导的大鼠急性肾损伤

目的探究姜黄素(curcumin,CUR)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及机制。方法48只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、阳性药NAC组、CUR低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。NAC及CUR灌胃给药10 d后,一次性灌胃给予2 g/kg APAP建立急性肾损伤模型,造模24 h后,取血并分离大鼠,计算肾指数;检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色评价大鼠肾病理变化;检测大鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;Western blot检测大鼠肾组织Trx-1、TXNIP、NLRP3炎症小体等蛋白的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠肾指数显著增加(P<0.01),血清Cr、BUN水平显著升高(P<0.01),病理切片显示大鼠肾组织出现明显的损伤,大鼠肾组织中GSH、T-SOD、CAT的活性显著降低(P<0.01),MDA的含量显著升高(P<0.01),大鼠肾组织中Trx-1的表达明显下调(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白的表达明显上调(P<0.01)。与模型组相比,CUR中、高剂量组肾指数显著降低(P<0.01),病理损伤改善,血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),肾组织中GSH、T-SOD、CAT活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),Trx-1的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)、TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论姜黄素预防性给药通过调控Trx-1/TXNIP/NLRP3通路减轻APAP诱导的大鼠急性肾损伤。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。

GLP-1受体激动剂联合二甲双胍片对NAFLD患者肝纤维化及PTX3、TXNIP的影响

目的:探讨GLP-1受体激动剂联合二甲双胍片对非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者肝纤维化及血清五聚体蛋白-3(pentraxin 3,PTX3)、硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的影响。方法:选取2016年5月-2019年6月本院收治的308例NAFLD患者,随机分为观察组和对照组,各154例。对照组患者予以二甲双胍片进行治疗,观察组患者在对照组的基础上联合GLP-1受体激动剂利拉鲁肽进行治疗,比较两组患者治疗前后总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2 h血糖(postprandial 2 h plasma glucose,2 h PG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)等血糖血脂指标,空腹血糖、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI)(HOMA-IR)等胰岛素抵抗指标,血清透明质酸(serum hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、IV型胶原(IV collagen,IV-C)、Ⅲ型前胶原(Ⅲprocollagen,PCⅢ)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)等肝纤维化指标和肝纤维化评分及PTX3和TXNIP水平表达情况。结果:治疗后,两组患者TC、TG、LDL-C、FPG、2 h PG、HbA1c等指标水平较治疗前降低,且观察组较对照组更低(P<0.05),而两组HDL-C水平较治疗前升高,且观察组较对照组更高(P<0.05)。治疗后,观察组FPG、FINS、HOMA-IR等指标水平较治疗前降低,且低于对照组(P<0.05),而治疗后对照组FPG较治疗前升高,FINS、HOMA-IR较治疗前降低(P<0.05)。治疗后,两组患者LN、IV-C、PCⅢ、HA、AST、ALT等肝纤维化指标水平及NAFLDFS评分较治疗前显著降低,且观察组较对照组更低(P<0.05)。治疗后,两组患者血清TXNIP、PTX3水平较治疗前降低,且观察组血清TXNIP、PTX3水平较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GLP-1受体激动剂联合二甲双胍片可有效缓解NAFLD患者肝纤维化情况,改善胰岛素抵抗情况,降低血清PTX3、TXNIP水平表达,进而改善患者肝功能。

七叶皂苷通过抑制TXNIP/MLXIPL信号通路改善脑出血大鼠神经性损伤

目的七叶皂苷具有抗炎、消肿和改善血液循环的作用,但其在脑出血治疗中的作用及其机制尚未阐明。探究七叶皂苷对脑出血大鼠神经性功能的影响及潜在的作用机制。方法选取250~280 g雄性Wistar大鼠,采用胶原酶注射法构建大鼠脑出血(Intracerebral haemorrhage,ICH)模型,将其随机分为假手术组(sham)、ICH组、5或10 mg/kg七叶皂苷治疗组。体外,大鼠小胶质细胞HAPI经血红素(Hemin)处理,分为Control组、Hemin组、5或10μM七叶皂苷处理组。脑组织图评估大鼠脑水肿程度,HE染色观察大鼠脑组织的病理学变化,ELISA测定用来评估大鼠氧化应激水平。RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-128-3p表达量、硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-Interacting Protein,TXNIP)和MLX相互作用蛋白(MLX Interacting Protein-Like,MLXIPL)水平。荧光素报告基因实验验证miR-128-3p和TXNIP的靶定关系。Co-IP验证TXNIP和MLXIPL的相互作用。结果与Sham组大鼠相比,ICH大鼠脑水肿程度增加,HE染色可见神经细胞胞体皱缩且细胞核固缩,血清中炎性因子分泌量和氧化应激产物增加,经七叶皂苷治疗后损伤程度减缓,且10 mg/kg七叶皂苷效果明显优于5 mg/kg七叶皂苷(P<0.05)。TXNIP是miR-128-3p的一个靶基因,且TXNIP可正向调节MLXIPL。ICH大鼠脑组织以及Hemin处理的HAPI细胞中miR-128-3p表达量增加,TXNIP和MLXIPL表达量均降低(P<0.05),且大剂量的七叶皂苷效果优于小剂量七叶皂苷(P<0.05)。结论七叶皂苷通过抑制TXNIP/MLXIPL信号通路,减轻脑水肿,降低氧化应激水平来改善ICH大鼠神经性损伤。

桑黄素通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨桑黄素(Morin)通过调控硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)信号通路,对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响。方法将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组、Morin低剂量(Morin-L,10 mg/kg)组、Morin高剂量(Morin-H,40 mg/kg)组、Morin-H+pLVXNC组(40 mg/kg Morin+pLVX-NC)、Morin-H+pLVX-TXNIP组(40 mg/kg Morin+pLVX-TXNIP)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(除外假手术组),给药1 h后再灌注。再灌注72 h后,进行神经功能缺损评分;取出全脑进行脑含水量测定;苏木精-伊红(HE)染色观察脑皮质半暗带病理损伤情况;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测脑组织梗死面积;酶联免疫吸附试验检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;Western blot检测脑皮质中TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,Morin-L组、Morin-H组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05);与Morin-H+pLVX-NC组比较,Morin-H+pLVX-TXNIP组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达增加(P<0.05)。结论Morin可以减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤,抑制神经元凋亡,作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路活化有关。

热淋清颗粒对慢性尿路感染模型大鼠TXNIP/NLRP3炎症小体通路及免疫状态的影响

目的:探讨热淋清颗粒对慢性尿路感染模型大鼠TXNIP/NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法:建立大鼠慢性尿路感染模型,随机分为模型组、热淋清低、中、高剂量组、左氧氟沙星组、假手术组。热淋清低、中、高剂量组分别灌胃7、14、28 g/kg热淋清颗粒;假手术组和模型组分别灌胃等体积蒸馏水;左氧氟沙星组灌胃20 mg/kg左氧氟沙星,连续给药14 d。HE染色观察肾脏组织病理形态;检测尿液量及尿白细胞数量;ELISA检测血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β水平;Western blot检测肾脏组织TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组尿液量明显减少(P<0.05),尿白细胞数量、血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β水平及肾脏组织TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达明显升高(P<0.05),肾脏组织出现明显病理学损伤。与模型组相比,热淋清低、中、高剂量组和左氧氟沙星组尿液量明显增加(P<0.05),尿白细胞数量、血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β水平及肾脏组织TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05),且肾脏组织病理学损伤明显改善。结论:热淋清颗粒对慢性尿路感染大鼠具有较好治疗效果,可能与抑制TXNIP/NLRP3炎症小体通路活化从而发挥炎症免疫调节作用有关。

基于PERK/TXNIP/NLRP3通路探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死大鼠神经元细胞焦亡的影响

目的基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路,探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死(diabetes mellitus complicated with cerebral infarction,DM-CI)大鼠神经元细胞焦亡的影响。方法将95只大鼠随机分为假手术组,模型组,左归降糖通脉方低(12 g·kg^(-1))、高剂量(24 g·kg^(-1))组,阳性对照(吡格列酮二甲双胍片+阿司匹林肠溶片)组。除假手术组外,其余各组以高糖高脂饲料喂养4周后联合35 mg·kg^(-1)1%链脲佐菌素(STZ)腹腔注射合并大脑中动脉闭塞(MCAO)术建立DM-CI大鼠模型。用蒸馏水,左归降糖通脉方低、高剂量,吡格列酮二甲双胍片和阿司匹林肠溶片进行相应干预,Zea-Longa评分法对大鼠进行神经功能缺损(NIHSS)评分,TTC染色法测量大鼠脑梗死体积,检测各组大鼠随机血糖和果糖胺水平,HE染色观察大鼠脑组织病理学变化,Western Blot法检测大鼠缺血侧脑皮质、海马区PERK、p-PERK、真核起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白的表达,免疫荧光双染法检测缺血侧脑皮质、海马区组织中神经元特异性烯醇化酶(NSE)与NLRP3蛋白的共定位表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠随机血糖、果糖胺水平、NIHSS评分、脑梗死体积、缺血侧脑皮质和海马区p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白水平和NSE与NLRP3双阳性信号细胞数量均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,左归降糖通脉方高剂量组的随机血糖、果糖胺水平、NIHSS评分、脑梗死体积、缺血侧脑皮质和海马区p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白水平和NSE与NLRP3双阳性信号细胞数量均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论左归降糖通脉方可改善DM-CI大鼠糖代谢紊乱,减轻神经功能损伤,其机制可能与左归降糖通脉方抑制PERK/TXNIP/NLRP3通路,减轻神经元细胞焦亡有关。

黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制

目的探究黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制。方法将hRECs细胞随机分为Control组、HG组、APS组和APS+pcDNA3.1-TXNIP组。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)水平;检测细胞中氧化应激和炎症因子水平;蛋白质印迹法检测细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β和caspase-1蛋白表达。结果和Control组相比,HG组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05);和HG组相比,APS组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显增加,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);和APS组相比,APS+pcDNA3.1-TXNIP组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制TXNIP/NLRP3通路激活有关。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p/TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制

目的探讨长链非编RNA(lncRNA)、KCNQ1重叠转录物(KCNQ1OT)1对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si-NC+HPC组、si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、miR-NC+HPC组、miR-499a-5p+HPC组、si-硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC组、pcDNA-NC+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、pcDNA-TXNIP+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p和TXNIP mRNA的表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和细胞SOD活性;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p、TXNIP之间的靶向关系。结果心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA KCNQ1OT1表达水平显著升高(P<0.05)。下调lncRNA KCNQ1OT1、下调TXNIP或上调miR-499a-5p后,心肌细胞H9C2中CyclinD1表达、细胞活性、SOD活性显著升高,Cleaved-caspase-3表达、细胞凋亡率、MDA含量显著降低(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-499a-5p调控TXNIP表达。过表达TXNIP可以逆转lncRNA KCNQ1OT1下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2的影响。结论下调lncRNA KCNQ1OT1可能通过miR-499a-5p/TXNIP轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。

山药总蛋白对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的保护作用及机制研究

探究山药总蛋白对高浓度D-葡萄糖(High concentrations of D-glucose,HG)诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及其机制。利用50 mmol/L HG建立HUVECs损伤模型。将HUVECs随机分为对照组、模型组、山药总蛋白低剂量组(0.5 mg/mL)以及山药总蛋白高剂量组(1 mg/mL),评估山药总蛋白对HG处理的HUVECs的细胞活力、细胞形态及血管生成能力的影响;检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活力;以及培养基上清液中一氧化氮(Nitric oxide,NO)、8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy deoxyguanosine,8-OHdG)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的水平;测定B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(Cleaved caspase-1)和IL-1β蛋白的表达水平。结果显示,山药总蛋白能显著提高HG处理后的HUVECs的细胞活力(P<0.01),改善细胞凋亡形态,并显著升高SOD和CAT的活力(P<0.05或P<0.01)以及凋亡相关蛋白(Bcl-2/Bax)的比值、血管形成能力、NO分泌量。此外,山药总蛋白还显著降低了HUVECs的ROS、MDA、8-OHdG、IL-1β和IL-6的水平(P<0.05或P<0.01)及炎症相关蛋白(Txnip、NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β)的表达水平(P<0.05或P<0.01),并且上述指标的变化均呈现明显的浓度依赖性。本研究结果表明,山药总蛋白可能通过抑制Txnip/NLRP3信号通路从而保护HUVECs拮抗HG诱导的氧化应激,恢复HUVECs内的氧化平衡,进一步减轻细胞的炎症反应。

黄芪桂枝五物汤对糖尿病大鼠周围神经组织Trx及Txnip表达的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对STZ大鼠坐骨神经Trx及Txnip表达的影响,初步探讨黄芪桂枝五物汤治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的机制。方法:将链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠随机分为模型组、给药组,另取正常大鼠为对照组。8周后,采用Western blot法及实时荧光定量PCR法测定大鼠坐骨神经中Trx与Txnip表达。结果:Western bolt法显示模型组大鼠坐骨神经Txnip表达明显高于对照组(P<0.01),给药组低于模型组(P<0.01)。实时定量PCR法显示模型组大鼠坐骨神经Txnip表达明显高于对照组(P<0.01),给药组低于模型组(P<0.01)但高于对照组。而大鼠坐骨神经Trx表达中模型组明显低于对照组(P<0.01),给药组高于模型组(P<0.01)但低于对照组。结论:DPN大鼠坐骨神经存在Txnip系统异常,黄芪桂枝五物汤治疗糖尿病周围神经病变,其作用机制与抑制Txnip表达,提高Trx表达有关。

苏萸痛风方通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路抗痛风性关节炎的作用机制

目的 研究苏萸痛风方抗痛风性关节炎的作用机制。方法 将雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱片组(阳性对照药,0.3 mg/kg)和苏萸痛风方高、中、低剂量组(5、2.5、1.25 g/kg),每组10只。给药组大鼠每日灌胃相应药物1次(10 mL/kg),连续给药7 d。正常对照组和模型组大鼠同法灌胃等体积水。第6天给药后1 h,除正常对照组外,其余各组大鼠于关节腔注入尿酸钠复制痛风性关节炎模型。检测大鼠造模后2、6、24 h的关节肿胀度和炎症指数评分。末次给药后1 h,检测大鼠血清中氧化应激相关指标[超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)]活性及炎症因子[白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平,观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,检测大鼠踝关节组织中硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达水平。结果 经苏萸痛风方干预后,大鼠关节肿胀度减轻、炎症指数评分降低、滑膜组织水肿改善、炎症细胞数量减少。苏萸痛风方高剂量组大鼠血清中SOD活性显著升高(P<0.01),XOD、MDA活性以及IL-1β、IL-18、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),踝关节组织中ROS水平和TXNIP、NLRP3、ASC蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。苏萸痛风方中、低剂量组上述部分指标活性/水平也发生显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论 苏萸痛风方可通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制NLRP3炎性小体激活,进而发挥抗痛风性关节炎的作用。

过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)通过激活p38MAPK通路促进MIN6细胞凋亡

目的研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对MIN6细胞凋亡的影响及其相关机制。方法将处于对数生长期的MIN6细胞,进行TXNIP慢病毒感染,用荧光显微镜和Western blot法检测感染效率。将MIN6细胞分为对照组、空载体(LV-GFP)组、TXNIP过表达(LV-GFP-TXNIP)组。利用CCK-8法检测细胞增殖活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TXNIP、硫氧还蛋白(TRX)、Bax、Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白激酶(p-p38MAPK)的蛋白水平。用p38MAPK抑制剂SP169316处理上述三组细胞,Western blot法检测其蛋白磷酸化水平及Bax、Bcl2、c-caspase-3蛋白水平的变化。结果感染慢病毒72 h后,LV-GFP组、LV-GFP-TXNIP组感染率分别为(87.10±2.30)%、(92.21±0.54)%,说明病毒感染成功。与对照组和LV-GFP组相比较,LV-GFP-TXNIP组的细胞生存率明显降低,细胞凋亡率、Bax/Bcl2比值、c-caspase-3蛋白、p38MAPK蛋白磷酸化水平明显增高。p38MAPK特异性抑制剂作用后,LV-GFP-TXNIP组Bax/Bcl2表达比率及c-caspase-3蛋白表达均显著减少。结论过表达TXNIP通过激活p38MAPK信号通路促进MIN6细胞的凋亡。

白藜芦醇抑制TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎性损伤

[目的]观察白藜芦醇对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)炎性损伤的保护作用,及其对TXNIP/NLRP3炎性通路的影响。[方法]采用脂多糖(LPS,1 mg/L)体外诱导HK-2细胞炎性损伤模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量(50μmol/L)白藜芦醇组、LPS+中剂量(100μmol/L)白藜芦醇组、LPS+高剂量(200μmol/L)白藜芦醇组;CCK8法检测HK-2细胞相对存活率,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western Blot方法分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧酶-2(COX-2)、人硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)及人隐热蛋白(NLRP3)表达。[结果]与LPS诱导组比较,不同浓度白藜芦醇干预的HK-2细胞相对存活率明显升高(P<0.05),细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低(P<0.05),细胞中炎性蛋白iNOS及COX-2表达水平显著降低(P<0.05);细胞中TXNIP及NLRP3蛋白表达也显著降低(P<0.05),并表现出剂量依赖性。[结论]白藜芦醇可以明显抑制LPS诱导的HK-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性通路活化相关。

三七总皂苷通过调节miR-16/TXNIP通路改善心肌细胞氧化应激损伤的机制研究

目的探究三七总皂苷(PNS)通过调节miR-16/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)通路改善心肌细胞氧化应激损伤的作用机制。方法体外培养H9c2细胞,分为空白组(常规培养)、模型组(H_(2)O_(2)处理2h)、PNS组(H_(2)O_(2)处理2 h+PNS作用)、PNS+miR-NC组(转染anti-miR-NC+H_(2)O_(2)处理2h+PNS作用)、PNS+miR-16 inhibitor组(转染miR-16 inhibitor+H_(2)O_(2)处理2 h+PNS作用)。MTT法、PI法和TUNEL法检测细胞增殖、坏死和凋亡情况。酶联免疫试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平。Western blot法检测TXNIP蛋白表达。结果与模型组细胞相比,PNS组细胞增殖活性(F=28.610,P<0.001)和miR-16相对表达量增加(F=29.048,P<0.001),凋亡率和坏死率(F=84.628,67.087,P<0.05)、DCFH-DA荧光强度(F=204.478,P<0.05)和TXNIP蛋白表达量(F=17.823,P<0.05)降低;细胞培养上清中LDH、MDA含量降低(F=55.387、92.506,P<0.05),同时SOD、GSH-Px水平升高(F=71.713、39.641,P<0.05)。但是与PNS组比较,PNS+miR-16 inhibitor组细胞增殖活性降低,凋亡率和坏死率、DCFH-DA荧光强度和TXNIP蛋白表达量增加;细胞培养上清中LDH、MDA含量增加,同时SOD、GSH-Px水平降低。经荧光素酶报告基因确认,TXNIP mRNA是miR-16下游靶基因。结论PNS能够改善心肌细胞的氧化应激损伤,其机制与上调miR-16表达进而靶向抑制下游TXNIP蛋白活性有关。

sCD163、TXNIP联合超声影像对非酒精性脂肪肝患者的诊断价值及预后评估意义

目的探究可溶性CD163(sCD163)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)联合超声影像对非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者的诊断价值及预后评估意义。方法前瞻性选取2016年7月至2018年8月资阳市人民医院收治的83例NAFLD患者作为观察组,同期纳入79例健康体检者作为对照组。比较两组及观察组不同FibroScan肝纤维化分期血清sCD163、TXNIP及肝脏脂肪含量(LFC),采用Spearman法分析sCD163、TXNIP、LFC相关性及其与FibroScan肝纤维化分期相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)分析sCD163、TXNIP、LFC单一或联合诊断NAFLD的效能。结果①观察组患者的sCD163、TXNIP及LFC水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);②观察组患者的FibroScan肝纤维化分期F4期sCD163、TXNIP及LFC水平高于F1期、F2期、F3期,差异具有统计学意义(P<0.05);③NAFLD患者sCD163、TXNIP、LFC与FibroScan肝纤维化分期呈正相关(1=0.615,r2=0.589,r3=0.626,P<0.05);④NAFLD患者sCD163与TXNIP、LFC呈正相关(r1=0.484,r2=0.622),TXNIP与LFC呈正相关(r=0.574,P<0.05);⑤ROC显示,诊断NAFLD效能的AUC:联合诊断>LFC>sCD163>TXNIP,联合诊断的敏感性及特异性分别为71.08%、92.41%。结论NAFLD患者sCD163、TXNIP、LFC水平与肝纤维化呈显著正相关,监测三者水平变化便于了解NAFLD患者肝纤维化进展,及时制定有效逆转肝纤维化措施,改善NAFLD预后。