颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42和thiorphan对恒河猴脑内淀粉样β蛋白表达的影响

目的探讨颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴脑内Aβ表达的影响。方法将恒河猴随机分为模型组(n=3)和正常对照组(n=1),模型组开颅后于大脑皮质和基底神经节先注射thiorphan以消耗已存在的脑啡肽酶,然后缓慢注射纤丝状Aβ1-42,再植入含有thiorphan的微渗透泵到基底神经节,持续28d;正常对照组仅注射生理盐水。至50d时处死恒河猴,开颅取大脑,免疫组织化学法观察海马、基底神经节和大脑皮质等部位Aβ1-42的表达。结果正常对照组恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应阳性,30个高倍视野(×400)的积分吸光度(IA)分别为0.22±0.06,0.20±0.04和0.19±0.07。模型组3只恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应均明显增强,海马IA分别为0.57±0.05,0.60±0.05和0.61±0.05;基底神经节IA分别为0.62±0.06,0.63±0.05和0.65±0.05;大脑皮质IA分别为0.67±0.06,0.68±0.05和0.65±0.07。结论颅内联合注射Aβ1-42和thiorphan可增加脑内Aβ1-42的表达。

淀粉样β-蛋白1-42和thiorphan对恒河猴海马结构的影响

目的观察淀粉样β蛋白1-42(Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴大脑海马神经元淀粉样蛋白、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,为注射thior-phan和Aβ1-42建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核,消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色观察海马结构病理改变。免疫组化的方法检测猴子海马Aβ1-42、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达。结果HE染色显示海马CA1、CA2等区神经元萎缩,海马齿状回局部颗粒细胞丢失被胶质细胞取代;免疫组化结果显示模型组海马各区Aβ1-42、ChAT、GFAP阳性细胞吸光度(OD值)分别为0.59±0.05、0.21±0.04、0.19±0.04,与对照组比较P<0.01,差异具有统计学意义。结论Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药导致恒河猴海马产生类似AD患者的病理改变。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的:前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin(NEP),注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果:实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论:Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan诱发脑内广泛炎症反应

目的:观察颅内给Aβ1-42和thiorphan后是否可以在恒河猴大脑内诱发类似AD患者的炎症反应,探讨该法建立猕猴AD模型的可行性。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色及免疫组化观察大脑的炎症反应情况。结果:HE染色显示侧脑室室管膜的单层上皮结构消失,大量小胶质细胞浸润,形成多细胞层,小胶质细胞增生聚集成灶。免疫组化结果显示实验组恒河猴海马、基底核及皮质等部位出现星形胶质细胞增生。结论:Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药后可以在恒河猴大脑内诱发广泛的炎症反应。

塞奥芬(Thiorphan)物质对离体兔虹膜括约肌的作用

研究了塞奥芬(Thiorphan)物质(10^(-9)mol/L～10^(-4)mol/L)可引起离体兔虹膜括约肌的收缩,增强10^(-9)mol/L～10^(-6)mol/L P物质所致的括约肌收缩,其作用不为阿托品所阻断。提示塞奥芬在神经肽P物质参与的瞳孔反应中有调节作用。

Phosphoramidon和Thiorphan对豚鼠气管上皮细胞内皮素-1代谢的影响

目的 观察内皮素转换酶和主要的内皮素降解酶ＮＥＰ 对豚鼠气管上皮细胞培养上清液内皮素１（ＥＴ１） 浓度的影响。方法 无菌条件下取豚鼠气管，并用Ｓｃｒａｐｅｒ 机械轻刮下上皮细胞，在５ ％ ＣＯ２ ３７°ＣＤＭＥＭ／Ｆ１２ 培养液中培养，不加或分别按０ ．１ｍ ｍｏｌ／Ｌ 浓度加入中性肽链内切酶内皮素转换酶双重抑制剂Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｏｎ 和中性肽链内切酶抑制剂Ｔｈｉｏｒｐｈａｎ 继续培养１０ 小时。收集上清液，放免法测定ＥＴ１ 。结果 与对照组［（５８ ．５１ ±１４ ．２９）ｐｇ／ｍｇ 蛋白］ 比较，Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｏｎ 组［（４０ ．４３±１５ ．３７）ｐｇ／ｍｇ 蛋白］ＥＴ１ 降低有统计意义（ Ｐ＝ ０ ．０２８８） ，而Ｔｈｉｏｒｐｈａｎ 组［（８８ ．５１ ±１９ ．９８）ｐｇ／ｍｇ 蛋白）］ＥＴ１ 浓度明显增高（ Ｐ＝ ０ ．００３９）。结论 中性肽链内切酶抑制剂Ｔｈｉｏｒｐｈａｎ 因抑制中性肽链内切酶而减少内皮素降解，使豚鼠气管上皮细胞培养上清液中内皮素浓度增加。中性肽链内切酶内皮素转换酶双重抑制剂ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｏｎ 因抑制内皮素转换酶，使内皮素形成减少。

LC-MS／MS测定人血清消旋卡多曲活性代谢物及其应用

目的建立人血清中消旋卡多曲活性代谢物(±)N-(1-氧-2-巯甲基-3-苯丙基)甘氨酸(thiorphan)浓度的LC- MS/MS测定方法,研究其在健康人体内的药动学行为,评价2种制剂的生物等效性。方法血清样品管采集前加入适量L-半胱氨酸,甲醇沉淀,LC-MS/MS内标法分析,检测离子为m/z 251.96→217.97(消旋卡多曲活性代谢产物thiorphan减氢离子)、m/z 404.1→114.0(内标赖诺普利减氢离子)。20名健康志愿者交叉口服试验制剂消旋卡多曲颗粒剂210 mg和参比制剂消旋卡多曲片剂200 mg,血药浓度-时间数据经DAS2.0统计软件处理,计算主要药动学参数,并对2种制剂进行等效性评价。结果Thiorphan的线性范围为9.375～600μg·L^(-1),消旋卡多曲颗粒剂与片剂的主要药动学参数分别为:t_(1/2) (6.14±2.55)和(6.56±2.43)h,ρ_(max)(519.8±202.0)和(519.2±181.2)μg·L^(-1),t_(max)(1.35±0.92)和(1.60±1.14)h、AUC_(0-24 h)(2 113.7±878.8)和(2 199.0±989.6)μg·h·L^(-1)。结论所用测定方法简便、准确、专属性高,统计学分析结果显示,2种制剂具有生物等效性。

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中消旋卡多曲活性代谢物含量

建立高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定人血浆中消旋卡多曲活性代谢物Thiorphan（TP）的含量及S-Methyl-Thiorphan（MTP）的相对含量。采用Kromasil C18色谱柱（25mm×4.6mm,5μm）,流动相为V（水）∶V（乙腈）=72∶28,甲酸调pH至2.8。加抗氧化剂的血浆样品经乙腈直接沉淀后进样、MRM模式外标法定量,TP和MTP检测离子对分别为m/z252/218和m/z266/218。TP在6.25～3200μg/L范围内线性关系良好（r=0.9998）;方法回收率为97.1%～109.0%,批内批间RSD分别小于3.5%及6.0%。