血小板反应蛋白1反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导大鼠心肌纤维化

目的观察血小板反应蛋白1(TSP-1)反义寡核苷酸在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法差速贴壁法分离新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。反义、正义TSP-1寡核苷酸与TGF-β1(20μg/L)共培养24h,采用MTT法测CFs生长数目,羟脯氨酸法测胶原含量,RT-PCR法测TSP-1和VEGF的mRNA表达。结果TGF-β1可以明显促进CFsTSP-1mRNA的表达且呈浓度-时间依赖性(P<0.01)。VEGFmRNA的表达呈浓度-时间依赖性降低(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的MTTA值、胶原蛋白含量减少,VEGF的表达明显增高(P<0.01)。结论TSP-1反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成和升高VEGF的表达。TSP-1反义寡核苷酸可能具有抗心肌纤维化的作用。

TSP-1、EGFR、TGF-β1在慢性肺源性心脏病患者血清中的表达

目的观察凝血酶敏感蛋白1(TSP1)、表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子β1(TGF-β1)在由慢性阻塞性肺部疾病合并慢性肺源性心脏病患者血清中的表达情况。方法用酶联免疫吸附法检测50例慢性肺源性心脏疾病患者与50例正常对照组血清中TSP-1、EGFR、TGF-β1的表达。结果慢性肺源性心脏病患者血清中TSP-1、EGFR、TGF-β1的表达均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论 TSP-1、EGFR、TGF-β1可能参与了由慢性阻塞性肺部疾病发展至慢性肺源性心脏病的病理生理过程。

miRNA与TSP-1mRNA在肾小管上皮细胞中的表达水平研究

目的糖尿病肾病是一种进展性的肾脏疾病,也是导致终末期肾病的主要病因。目前的研究表明,miRNA在糖尿病肾病的发生及进展过程中起重要的作用。本实验通过研究miR-18a、miR-19a、miR-194及TSP-1在高糖与TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞中的表达情况,进一步探索miRNA在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法用半定量RT-PCR监测人肾小管上皮细胞在低糖组(终浓度5 mmol/L)、高糖组(终浓度30 mmol/L)及高糖组+TGF-β1组不同时期TSP1mRNA、miR-18a、miR-19a及miR-194的表达水平。结果TSP1mRNA的表达水平随血糖浓度的升高及培养时间的延长逐渐升高,而miR-194成逐渐下降的趋势,但miR-18a和miR-19a的表达水平并未随血糖浓度改变有明显变化。通过TGF-β1处理的体外培养的肾小管上皮细胞48h,研究结果显示,与未经TGF-β1处理的高糖组相比,TGF-β1+高糖组能进一步升高肾小管上皮细胞TSP1mRNA的表达水平,使肾小管上皮细胞miR-194的表达进一步下降,并具有统计学差异。结论通过研究结果显示,TGF-β1对TSP1的表达水平起正性调节作用,对miR-194的表达水平呈负性调节作用,而针对TSP1是否为miR-194靶向调节基因,还需后续试验进一步验证。

腺病毒介导的TSP1_f基因转移对脐静脉内皮细胞株EC V304增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1(TSP1)抗血管新生衍生物(TSP1f)基因转移对人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响。方法应用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1fcDNA序列构建TSP1f重组腺病毒(ADV-TSP1f);Western blot方法检测ADV-TSP1f介导TSP1f在K562细胞中的表达;台盼蓝拒染检测经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基对ECV304细胞增殖的抑制作用。结果K562细胞经ADV-TSP1f感染可高效表达/分泌TSP1f多肽;经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基可显著抑制ECV304细胞增殖,以ADV-LacZ及PBS作对照,抑制率分别为51.6%和53.8%。结论ADV-TSP1f可显著抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖,可望成为有效的恶性肿瘤血管新生抑制剂。

血小板反应蛋白1在前列腺癌辅助诊断中的应用

目的应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中血小板反应蛋白1（TSP-1）水平，分析其作为前列腺癌辅助诊断指标的价值。方法用ELISA试剂盒测定2012年1至7月复旦大学附属金山医院及复旦大学附属肿瘤医院50例前列腺癌患者（局限性癌22例、浸润转移性癌28例），20例前列腺增生患者和16例健康人群血清TSP-1值。结果前列腺癌组TSP-1值平均为（200±49）μg∥L，前列腺增生组平均（281±53）μg∥L，健康人群组平均（323±56）μg∥L，三组间两两比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。局限性前列腺癌组（I期和Ⅱ期）TSP-1值平均为（216±34）μg/L，浸润转移性前列腺癌组（Ⅲ期和Ⅳ期）平均为（188±49）仙g／L，差异亦有统计学意义（P=0．030）。前列腺癌Gleason评分与TSP-1值呈负相关（r=-0．32，P=0．023）。前列腺癌淋巴结转移与TSP-1值无明确相关（P=0．189）。TSP．1和前列腺特异抗原（PSA）对前列腺癌诊断的敏感度和特异度分别为72％、90％和64％、70％，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。TSP．1的受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积为0．886，PSA的ROC曲线下面积为0．719，差异亦有统计学意义（P=0．028）。结论TSP-1是-种较为理想的前列腺癌辅助诊断指标，其值不但能较为准确地鉴别前列腺癌和前列腺增生，而且对前列腺癌的分期和Gleason评分亦有-定的参考意义。

卵巢上皮癌组织微血管密度及血管形成相关分子的检测及预后价值

目的探讨卵巢上皮癌组织微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应素1（rpsP1）和p53蛋白表达与患者预后的关系。方法采用免疫组化法检测57例原发性卵巢上皮癌组织中VEGF、rpsP1和p53蛋白的表达情况，用CD34免疫染色后计数MVD。对VEGF、rpsP1、053蛋白和MVD与患者复发及生存时间的关系进行回顾性分析。结果卵巢上皮癌组织中VEGF、rpsP1和053蛋白表达阳性率分别为70．2％（40／57）、47．4％（27／57）和61．4％（35／57），MVD为30．3±8．5，MVD、VEGF和TSP1与复发相关（P值分别为0．030、0．025和0．026）。高MVD、VEGF和053蛋白阳性患者的中位生存时间短于低MVD、VEGF和053蛋白阴性者（P值分别为0．0187，0．010和0．005），MVD、VEGF和053蛋白是影响预后的危险因素。TSP1是影响患者预后的保护因素，其阳性患者的中位生存时间长于阴性患者（P=0．042）。多因素分析表明，MVD和p53蛋白是影响卵巢上皮癌预后的独立因素（P值分别为0．018和0．009）。结论VEGF、rpsP1和053蛋白可能参与了卵巢上皮癌的血管形成，MVD和053是影响卵巢上皮癌预后的独立因素。